一种植物染色体压片观察方法
【专利摘要】本发明公开了一种压片法观察植物染色体技术。该方法包括对分裂旺盛试材的前处理、染色体固定、细胞酸解、碱中合、染色、压片观察等步骤。供试材料取分裂旺盛部位1-2cm置于处理液中黑暗条件下进行前处理，固定液固定好前处理过的样品后，采用高浓度的盐酸酸解细胞壁，原生质体弱碱中合掉多余的盐酸，染色、压片，最后在显微镜下观察染色体分裂情况。
【专利说明】一种植物染色体压片观察方法

【技术领域】
[0001]本发明涉及一种染色体观察方法，特别是涉及来源于植物试材的采用压片技术进行染色体观察的方法。

【背景技术】
[0002]植物分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰，此时把试材固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。染色体压片法，是观察植物染色体最常用的方法，也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单体交换的基础。结合现代生物技术FISH可以清晰确定目的基因在染色体的位置及分布情况，是进一步深入研究的基础。现有的压片方法，染色的原生质体中染色体与其它细胞器颜色差异不显著，观察效果不理想。为了克服该问题，本发明提供一种植物染色体压片法观察的新方法。


【发明内容】

[0003]本发明的目的是提供一种植物染色体压片观察方法。
[0004]为了实现上述目的，本发明的技术方案为:提供的观察植物染色体技术，来自于压片显微镜观察技术，是如下技术:试材上取样品，样品前处理，固定，酸解，碱中合，染色，压片，镜检等主要过程。
[0005]供试材料取分裂旺盛部位1-2 cm置于处理液中黑暗条件下进行前处理，固定液固定好前处理过的样品后，采用高浓度的盐酸酸解细胞壁，原生质体弱碱中合掉多余的盐酸，染色、压片，最后在显微镜下观察染色体分裂情况。
[0006]通过镜检观察细胞核中染色体数目、形态及特性。
[0007]对试材进行前期处理，使染色体凝缩，彼此分离，便宜观察。
[0008]采用高浓度盐酸酸解的方法，解离细胞壁，获得植物细胞原生质体。
[0009]取供试材料分裂旺盛部位1-2 cm置于处理液中黑暗条件下进行前处理。
[0010]染色原生质体，使染色体与其它细胞器颜色差异显著。
[0011]为达到良好的染色效果，酸解细胞壁后，采用弱碱与清水冲洗原生质体的方法，结合改良的染色剂配制技术，使染色效果良好，便于镜检。

【具体实施方式】
[0012]以下实施例中所述的方法，如无特别说明，均为常规方法。
[0013]一种植物染色体压片的制作方法，包括如下步骤:
步骤1:前处理。
[0014]于上午8-11点，取供试材料的根、茎尖(茎尖剥去大叶)，浸于饱和的对二氯苯溶液中5-6小时(或用8-羟基喹啉、风油精、秋水仙素等，但时间长短不一，视条件和材料而定)，茎尖最好置于黑暗条件下。
[0015]步骤2:固定。
[0016]卡诺固定液固定2-24小时(卡诺固定液为95%酒精与冰醋酸酸按体积比3:1混合而成)。若长期保存，可换70%酒精，于冰箱冷藏层保存，也可直接进行压片。
[0017]步骤3:酸解。
[0018]取出卡诺或酒精中的材料，滤纸吸干，(茎尖剥至最小使茎尖露出)，置于5N盐酸中解离3-5分钟，或在IN盐酸中60°C水浴3-5分钟(时间不定，可视材料大小、性质而定，以材料充分变软为宜)。
[0019]步骤4:碱中合。
[0020]取出解离好的材料放入IN NaCo3水溶液中，中合5_10分钟，蒸馏水或清水冲洗3-5次或浸泡2-3分钟。
[0021]步骤5:染色。
[0022]取出材料滤纸洗干，取Imm根尖或剥取尽可能小的茎尖于载玻片上，滴两滴改良的卡宝品红染色液染色7-8分钟，时间可视材料染色难易适当调整。
[0023]步骤6:压片。
[0024]盖盖玻片，用镊子压材料部分，使材料分散，吸干周围染液，以滤纸包载玻片，以套胶头滴管胶头的铅笔敲击材料，力度以载玻片不碎，材料细胞分散为宜。
[0025]实施例7:镜检。
[0026]显微镜下观察，好的片子可用封片剂封片以长期保存。
[0027]上述改良卡宝品红染色液可由如下方法制得:
?原液配制:
A原液:称3g碱性品红溶于10ml 70%酒精中 B原液:取1ml A原液加入90ml 5%的石炭酸水溶液 C原液:取B原液55ml加冰醋酸和福尔马林(37%的甲醛)各6ml ※A、C原液可长期保存，B原液两周内使用有效
?染色液配制:取C原液10-20ml，加45%醋酸80_90ml和山梨醇1.8g，配成10 — 20%
浓度的石炭酸品红溶液，配后两周着色力达最强，即可使用。
【权利要求】
1.一种植物染色体压片的制作方法，包括如下步骤: 步骤I前处理 取供试材料的根、茎尖，浸于药剂中处理，所述药剂为饱和的对二氯苯、8-羟基喹啉、风油精、秋水仙素溶液中的一种，茎尖置于黑暗条件下； 步骤2固定 将前处理后的材料用卡诺固定液固定2-24小时，所述卡诺固定液为95%酒精与冰醋酸酸按体积比3:1混合而成；若长期保存，可换70%酒精，于冰箱冷藏层保存，也可直接进行压片； 步骤3酸解 取出卡诺或酒精中的材料，滤纸吸干，置于5N盐酸中解离3-5分钟，或在IN盐酸中60°C水浴3-5分钟； 步骤4:碱中合 取出步骤3中解离好的材料放入IN NaCo3水溶液中，中合5_10分钟，蒸馏水或清水冲洗3-5次或浸泡2-3分钟； 步骤5:染色 取出材料滤纸洗干，取Imm根尖或剥取尽可能小的茎尖于载玻片上，滴两滴改良的卡宝品红染色液染色7-8分钟； 步骤6:压片 盖盖玻片，用镊子压材料部分，使材料分散，吸干周围染液，以滤纸包载玻片，以套胶头滴管胶头的铅笔敲击材料，力度以载玻片不碎，材料细胞分散为宜； 步骤7:镜检 显微镜下观察，好的片子可用封片剂封片以长期保存。
2.一种卡宝品红染色液的配制方法，其特征在于包括如下步骤: 原液配制: A原液:称3g碱性品红溶于10ml 70%酒精中； B原液:取1ml A原液加入90ml 5%的石炭酸水溶液； C原液:取B原液55ml加冰醋酸和福尔马林(37%的甲醛)各6ml 染色液配制:取C原液10-20ml，加45%醋酸80_90ml和山梨醇1.8g，配成10 — 20%浓度的石炭酸品红溶液。
【文档编号】G01N1/28GK104374618SQ201410555921
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年10月20日 优先权日:2014年10月20日
【发明者】何平, 李林光, 李慧峰, 王海波 申请人:山东省果树研究所