专利名称：从脂质双层膜的外侧向内侧输送钾离子的方法
技术领域：
本发明涉及从脂质双层膜的外侧向内侧输送钾离子的方法。
背景技术：
存在于细胞的脂质双层膜的G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor)(以下，有时也称之为“GPCR”)与存在于细胞的脂质双层膜的G蛋白质协同发挥功能。如图1 所示，如神经传递物质等的化学物质结合在GPCR时，在细胞中与GPCR偶联的三聚体G蛋白被活化，解离SGa亚基、和由G0亚基及Gy亚基构成的二聚体(以下，有时也称之为"G0 γ 亚基复合物”)。它们分别传递各种信号。如图2所示，G0 γ亚基复合物在G蛋白偶联的内向整流型钾通道 (Gprotein-coupled inwardly rectifying potassium channel)(以下，有时也禾尔之为 “GIRK”)上的结合促使GIRK门的开放。GIRK门被开放时，存在于脂质双层膜的外侧的钾离子通过该门移动至脂质双层膜的内侧。对该钾离子的移动可采用离子电流测定法进行检测
或定量。Ga亚基如果是嵌合6。亚基，在某些时候钾离子可更有效地从外侧向内侧移动。基于这种现象，现已提出将表达有具备嵌合Ga亚基的G蛋白的脂质双层膜用作于化学物质感应器的技术方案。以下非专利文献1 6与本发明相关。非专利文献1Gloriam D. , Fredriksson R. , Schioth H.，(2007) "The G protein-coupled receptor subset of the rat genome，，BMC Genomics 8,338-405.非专利文献2]Oldham, W. Μ. and H. Ε. Hamm(2008). "Heterotrimeric G protein activation by G-protein-coupled receptors. "Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 9,60-71.非专利文献3Kim W. Chan, Jin-Liang Sui，Michel Vivaudou, and Diomedes E.Logothetis, (1996) “Control of channel activity through a unique amino acid residue of a G protein-gated inwardly rectifying K+channel subunit"Proc. Natl. Acad. Sci.，93，14193—14198.# 禾U i ■ 4Gregory J. Digby, Pooja R. Sethi, and Nevin A. Lambert, (2008),"Differential dissociation of G protein heterotrimers" J. Physiol,586, 3325-3335.非专利文献5Thomsen W.，Frazer J.，UnettD.，(2005)，"Functional assays for screening GPCR targets"Curr. Opin.Biotech. ,16,655-665.非专利文献6:Leaney J. L.，Milligan G. ,Tinker A.，(2000) "The G Protein a Subunit Has a Key Role in Determining the Specificity of Coupling to,but Not the Activation of,G Protein-gated InwardlyRectifying KIChanneIs" J. Biol. Chem., 275,921-929.

发明内容
本发明的目的在于，提供一种以高灵敏度响应化学物质的、从脂质双层膜的外侧向内侧输送钾离子的方法。本发明人们发现具有特定的嵌合Ga亚基的G蛋白可解决上述技术问题，从而完成了本发明。S卩，本发明提供以下技术方案1 9。技术方案1:一种从脂质双层膜的外侧向内侧输送钾离子的方法，包括以下步骤(a)及步骤 (b)步骤(a)，制备所述脂质双层膜，其中，所述脂质双层膜包括化学物质的受体、G蛋白、及钾离子通道，所述G蛋白包括嵌合Ga亚基、及G0y亚基复合物，所述嵌合6。亚基由Gi/olfl3(序列号:04)、GiMf28(序列号:05)、GiMf94(序列号 7)、Α/。1η 3(序列号08)、GiMf α3_05,。(序列号12)、或 GiMf α4_06,。(序列号15)中的任意一种构成；以及步骤(b)，从所述外侧供给所述化学物质及所述钾离子，通过所述嵌合Ga亚基及所述G0y亚基复合物的释放、以及所述G0y亚基复合物在所述钾离子通道上的结合将钾离子从所述外侧输送至所述内侧。技术方案2 技术方案1所述的方法，其中，所述化学物质为肾上腺素能受体激动剂。技术方案3 技术方案1所述的方法，其中，所述钾离子通道为G蛋白偶联的内向整流型钾离子通道。技术方案4 —种检测或定量化学物质的方法，包括以下步骤(C) 步骤(e)步骤(c)，制备脂质双层膜、位于所述脂质双层膜外侧的第1液体、及位于所述脂质双层膜内侧的第2液体，其中，所述脂质双层膜包括化学物质的受体、G蛋白、及钾离子通道，所述G蛋白包括嵌合Ga亚基、及G0y亚基复合物，所述嵌合Ga亚基由GiMfl3(序列号04)、GiMf28(序列号05)、GiA)lf94(序列号 7)、Α/。1η 3(序列号08)、GiMf α3_05,。(序列号12)、或 GiMf α4_06,。(序列号15)中的任意一种构成，所述第1液体含有钾离子；步骤(d)，将所述化学物质供给至所述第1液体；以及步骤(e)，测定所述第1液体及第2液体中至少任意一方的钾离子的量，从而基于所述钾离子的量检测或定量所述化学物质。技术方案5 技术方案4所述的方法，其中，所述化学物质为肾上腺素能受体激动剂。技术方案6
技术方案4所述的方法，其中，所述钾离子通道为G蛋白偶联的内向整流型钾离子通道。技术方案7 一种检测或定量化学物质的方法，包括以下步骤(f) (h)步骤(f)，制备脂质双层膜，其中，所述脂质双层膜包括化学物质的受体、G蛋白、及钾离子通道，所述G蛋白包括嵌合Ga亚基、及G0y亚基复合物，所述嵌合Ga亚基由GiMfl3(序列号04)、GiMf28(序列号05)、GiA)lf94(序列号 7)、Α/。1η 3(序列号08)、GiMf α3_05,。(序列号12)、或 GiMf α4_06,。(序列号15)中的任意一种构成，步骤(g)，供给分别位于所述脂质双层膜的外侧及内侧的第1液体及第2液体，在所述第1液体及第2液体之间夹持所述脂质双层膜，其中，所述第1液体含有钾离子及化学物质；以及步骤(h)，测定所述第1液体及第2液体中至少任意一方的钾离子的量，从而基于所述钾离子的量检测或定量所述化学物质。技术方案8 技术方案7所述的方法，其中，所述化学物质为肾上腺素能受体激动剂。技术方案9 技术方案7所述的方法，其中，所述钾离子通道为G蛋白偶联的内向整流型离子通道。根据本发明，从脂质双层膜的外侧输送至内侧的钾离子的量增加。由此，能够以高灵敏度进行靶化学物质的检测。


图1为表示三聚体G蛋白介导的信号传递的模式图。图2为表示利用了 GIRK作用的化学物质感应器的模式图。图3为表示G蛋白的二级结构的模式图。图4为Gai的二级结构的模式图。图5为Ga。lf的二级结构的模式图。图6为GiMf5的二级结构的模式图。图7为GiA)lfl3的二级结构的模式图。图8为GiA)lf28的二级结构的模式图。图9为GiA)lf45的二级结构的模式图。图10 为 Gi7olf94的二二级结构的模式图。
图11 为 GiZ0Ifii3的:二级结构的模式图。
图12 % Gi7olfl56的:二级结构的模式图。
图13 % Gi7olfl95的:二级结构的模式图。
图14 为 Gi/olf. a3-0 5的二级结构的模式图。
图15 为 Gi/olf a3-0 5,。的二级结构的模式图
图16为GiMf α4_06的二级结构的模式图。图17为GiMf α3_05, α4_06的二级结构的模式图。图18为GiMf α4_06,。的二级结构的模式图。图19为GiMf α3_05, α4_06,。的二级结构的模式图。图20为β 1肾上腺素能受体表达质粒的制备方法的示意图。图21为Kir3. 1表达质粒的制备方法的示意图。图22为Kir3. 1 (F137S)表达质粒的制备方法的示意图。图23为嵌合G蛋白表达质粒的制备方法的示意图。图M为嵌合G蛋白表达质粒的制备方法的示意图。图25为嵌合G蛋白表达质粒的制备方法的示意图。图沈示出Gai(C351G)蛋白表达细胞的离子电流。图27示出GiA)lfl3蛋白表达细胞的离子电流。图观示出野生型Ga。lf蛋白表达细胞的离子电流。图四示出嵌合G蛋白表达细胞的离子电流的变化。图30示出G蛋白表达细胞的离子电流的变化。图31示出G蛋白表达细胞的离子电流的变化。图32示出基于本发明的结构的化学感应器相对于现有化学物质检测方法的优越性。图33示出嵌合G蛋白表达细胞的钾离子电流对于各种化学物质的浓度依赖性。
具体实施例方式术语定义对本说明书中使用的术语，进行如下定义。术语“脂质双层膜”意指构成细胞表面的膜，即细胞膜。术语“嵌合Ga亚基”意指将某一 Ga蛋白(例如，Gai)的特定区域用不同Ga蛋白 (例如，Ga。lf)的对应区域置换后的Ga亚基。术语“嵌合G蛋白”意指α亚基为嵌合Ga亚基的G蛋白。本发明中使用的脂质双层膜包括化学物质的受体、嵌合G蛋白、及钾离子通道。具有脂质双层膜的细胞的一个例子为人源株化细胞。〈化学物质的受体〉采用G蛋白偶联受体作为化学物质的受体。G蛋白偶联受体除激素受体、神经传递物质受体、费洛蒙受体、嗅觉受体、及味觉受体之外，还包括各种孤儿G蛋白偶联受体。激素受体的一个例子为肾上腺素能受体。〈嵌合G蛋白〉嵌合G蛋白包括嵌合Ga亚基及G0y亚基复合物。本发明中，嵌合6。亚基选自由Α/。1 13、&/。1 28、Α/。1 94、Α/。1 113、Α/。Η a3_e5,c、以及 Gi, olf a4-e6,。构成的组。嵌合Ga亚基的名称中所含的标示文字表示Gai蛋白的氨基酸序列被对应的Ga。lf的氨基酸序列置换了的区域。采用这些嵌合Ga亚基时，响应于化学物质的接触，更多量的钾离子可从脂质双层膜的外侧被输送至内侧。各嵌合Ga亚基的氨基酸序列如下所示。<Gi/olfl3>MGCTLSAEDKAAVERSKMIDRNLREDGEKAAREVKLLLLGAGESGKSTIVKQMKIIHEAGYSEEECKQY KAWYSNTIQSIIAIIRAMGRLKIDF⑶SARADDARQLFVLAGAAEEGFMTAELAGVIKRLWKDSGVQACFNRSREY QLNDSAAYYLNDLDRIAQPNYIPTQQDVLRTRVKTTGIVETHFTFKDLHFKMFDVGGQRSERKKWIHCFEGVTAIIF CVALSDYDLVLAEDEEMNRMHESMKLFDSICNNKffFTDTSIILFLNKKDLFEEKIKKSPLTICYPEYAGSNTYEEAA AYIQCQFEDLNKRKDTKEIYTHFTCATDTKNVQFVFDAVTD11QRMHLKQYELL (序列号04)<Gi/olf28>MGCTLSAEDKAAVERSKMIDRNLREDGEKAAREVKLLLLGAGESGKSTIVKQMKIIHEAGYSEEECKQY KAWYSNTIQSIIAIIRAMGRLKIDF⑶SARADDARQLFVLAGAAEEGFMTAELAGVIKRLWKDSGVQACFNRSREY QLNDSAAYYLNDLDRIAQPNYIPTQQDVLRTRVKTTGIVETHFTFKDLHFKMFDVGGQRSERKKWIHCFEGVTAIIF CVALSDYDLVLAEDEEMNRMHESMKLFDSICNNKffFTDTSIILFLNKKDLFEEKIKKSPLTICYPEYAGSNTYEEAA AYI QCQFEDLNKRKDTKE IYTHFTCAVDTENIRRVFNDCRD11 QRMHLKQYELL (序列号05)<Gi/olf94>MGCTLSAEDKAAVERSKMIDRNLREDGEKAAREVKLLLLGAGESGKSTIVKQMKIIHEAGYSEEECKQY KAWYSNTIQSIIAIIRAMGRLKIDF⑶SARADDARQLFVLAGAAEEGFMTAELAGVIKRLWKDSGVQACFNRSREY QLNDSAAYYLNDLDRIAQPNYIPTQQDVLRTRVKTTGIVETHFTFKDLHFKMFDVGGQRSERKKWIHCFEGVTAIIF CVALSDYDLVLAEDEEMNRMHESMKLFDSICNNKWFTDTSIILFLNKKDLFEEKVLAGKSKIEDYFPEYANYTVPED ATPDAGEDPKVTRAKFFIRDLFLRISTATCDGKHYCYPHFTCAVDTENIRRVFNDCRDIIQRMHLKQYELL(序列号07)<Gi/olfll3>MGCTLSAEDKAAVERSKMIDRNLREDGEKAAREVKLLLLGAGESGKSTIVKQMKIIHEAGYSEEECKQY KAWYSNTIQSIIAIIRAMGRLKIDF⑶SARADDARQLFVLAGAAEEGFMTAELAGVIKRLWKDSGVQACFNRSREY QLNDSAAYYLNDLDRIAQPNYIPTQQDVLRTRVKTTGIVETHFTFKDLHFKMFDVGGQRSERKKWIHCFEGVTAIIF CVALSDYDLVLAEDEEMNRMHESMKLFDSICNNKWLRTISIILFLNKQDMLAEKVLAGKSKIEDYFPEYANYTVPED ATPDAGEDPKVTRAKFFIRDLFLRISTATCDGKHYCYPHFTCAVDTENIRRVFNDCRDIIQRMHLKQYELL(序列号08)<GiMfa3_e5,c>MGCTLSAEDKAAVERSKMIDRNLREDGEKAAREVKLLLLGAGESGKSTIVKQMKIIHEAGYSEEECKQY KAWYSNTIQSIIAIIRAMGRLKIDF⑶SARADDARQLFVLAGAAEEGFMTAELAGVIKRLWKDSGVQACFNRSREY QLNDSAAYYLNDLDRIAQPNYIPTQQDVLRTRVKTTGIVETHFTFKDLHFKMFDVGGQRSERKKWIHCFEGVTAIIF CVALSDYDLVLAEDEEMNRMHESMKLFDSICNNKffLRTISIILFLNKKDLFEEKIKKSPLTICYPEYAGSNTYEEAA AYI QCQFEDLNKRKDTKE I YTHFTCATDTKNVQFVFDAVTD 11 QRMHLKQYELL (序列号12)<GiMfa4_e6,c>MGCTLSAEDKAAVERSKMIDRNLREDGEKAAREVKLLLLGAGESGKSTIVKQMKIIHEAGYSEEECKQY KAWYSNTIQSIIAIIRAMGRLKIDF⑶SARADDARQLFVLAGAAEEGFMTAELAGVIKRLWKDSGVQACFNRSREY QLNDSAAYYLNDLDRIAQPNYIPTQQDVLRTRVKTTGIVETHFTFKDLHFKMFDVGGQRSERKKWIHCFEGVTAIIF CVALSDYDLVLAEDEEMNRMHESMKLFDSICNNKffFTDTSIILFLNKKDLFEEKIKKSPLTICYPEYAGSNTYEEAA AYIQCQFEDLNTATCDGKHYCYTHFTCATDTKNVQFVFDAVTDIIQRMHLKQYELL(序列号15)
如图3所示，构成Ga亚基的蛋白质具备被称为GTP酶功能域(GTPase domain) 的区域和被称为螺旋功能域(helical domain)的区域。两区域经由分别被称为连接子-I(Iinker-I)和连接子_2 (linker-2)的2个α螺旋(a-helix)而相互连接。GTP酶功能域含有5个α螺旋、6个β折叠片层、及连接它们的环(loop)。如图7所示，GiMfl3的二级结构为，Ga i (C351G)的自C末端起的13个氨基酸被Ga。lf 的对应的氨基酸所置换的结构。如图8所示，GiMK8的二级结构为，Gai(C351G)的含β 6_ a 5环的C末端侧的区域被Gaolf的对应的区域所置换的结构。如图10所示，GiMf94&二级结构为，Gai(C351G)的含a G-a 4环的C末端侧的端区域被Ga。lf的对应的区域所置换的结构。如图11所示，GiMfll3m二级结构为，Gai(C351G)的含α 3_ β 5环的C末端侧的区域被Ga。lf的对应的区域所置换的结构。如图15 所示，GiMf α3_05,。的二级结构为，Gai(C!351G)的 α3_β5 环、及 a 5-C 末端环被Ga。lf的对应的环所置换的结构。如图18 所示，GiMf α4_06,。的二级结构为，Gai(C!351G)的 α3_β5 环、及 a 5-C 末端环被Ga。lf的对应的环所置换的结构。〈钾离子通道〉作为钾离子通道，可采用G蛋白偶联受体内向整流型钾离子通道(GIRK)。GIRK 被划分为Kir3. 1、Kir3. 2、Kir3. 3及Kir3. 4这四种亚型。本发明中，优选采用Kir3. 1的 137位的苯丙氨酸被丝氨酸置换后的变异型Kir3. 1 (F137S)。其理由如下。亚型Kir3. 1 Kir.3.4彼此可与不同的亚型形成杂合多聚体。换言之，GIRK含有2种亚型。但变异型Kir3. 1(F137S)可形成纯合四聚体，并由该四聚体构成钾离子通道。因此，采用变异型 Kir3. KF137S)时，钾离子通道的构成所需的蛋白质的种类为1种。作为包括化学物质的受体、嵌合G蛋白、及钾离子通道的脂质双层膜，例如可通过以下所述的方法调制而成。即，制备对化学物质的受体进行编码的表达质粒、对嵌合G蛋白进行编码的表达质粒、及对钾离子通道进行编码的表达质粒。将制备的各质粒导入细胞中进行表达。在实施例中对该方法的具体步骤进行详述。〈钾离子的输送〉包括化学物质的受体、嵌合G蛋白、及钾离子通道的脂质双层膜的外侧和内侧分别接触适宜的缓冲液。接触该脂质双层膜的外侧的缓冲液含有浓度为1 IOOOnM的钾离子。当化学物质被供给至该脂质双层膜的外侧、且与化学物质的受体结合时，在脂质双层膜的内侧，与化学物质的受体结合的嵌合G蛋白被分割并释放出嵌合Ga亚基和G0y亚基复合物。G0y亚基复合物与钾离子通道的接触将导致钾离子通道的门的开放。一旦钾离子通道的门被开放，钾离子便随即从脂质双层膜的外侧被输送至内侧。<化学物质的检测或定量>利用上述从脂质双层膜的外侧向内侧输送钾离子的方法，可检测或定量化学物质。即，测定因钾离子的输送而生成的电流的变化，从而检测或定量存在于脂质双层膜外侧的化学物质。具体而言，对化学物质可通过以下方式进行检测或定量。首先，将钾离子供给至包括上述的化学物质受体、嵌合G蛋白、及钾离子通道的脂质双层膜的外侧。具体而言， 例如，将第1液体供给至脂质双层膜的外侧，将第2液体供给至内侧。即，该脂质双层膜被夹持在第1液体和第2液体之间。第1液体及第2液体通常为pH7左右的缓冲液。第1液体含有钾离子。第2液体也可以含有钾离子。靶化学物质也被供给至该脂质双层膜的外侧。具体而言，在脂质双层膜被夹持在第1液体及第2液体之间的状态下，将靶化学物质供给至第1液体。靶化学物质被供给至化学物质的受体。化学物质被供给至化学物质的受体将导致嵌合G蛋白的亚基的释放，从而存在于脂质双层膜外侧的钾离子(含在第1液体中)被输送至脂质双层膜的内侧(第2 液体)。测定因钾离子的输送而生成的离子电流的变化，并依据该测定结果检测或定量化学物质。上述化学物质的供给也可通过将最初供给至脂质双层膜外侧的第1液体置换为除含化学物质以外与第1液体具有相同组成的液体来进行。出于化学物质定量的目的，计量标准曲线通常被采用。〈化学物质〉作为化学物质，可以使用任意可用作化学物质的受体激动药的化学物质，对此不做特殊限定。将肾上腺素能受体用作化学物质的受体时，作为化学物质，可例举异丙肾上腺素(isoproterenol)、多巴胺(dopamine)、多巴酚丁胺(dobutamine)等。实施例[质粒的制备] 实施例及比较例中所使用的质粒的制备方法如下所示。<肾上腺素能受体表达质粒的制备>图20示出肾上腺素能受体表达质粒的制备步骤。β肾上腺素能受体的基因 (GenBank注册号J05561. 1)通过以下步骤被扩增。源于大鼠心脏的cDNA(rat heart cDNA)被分割成两个片段，并通过PCR法的实施而被扩增。一方片段的扩增中使用的引物为引物1 (序列号17)及引物2 (序列号18)。另一方片段的扩增中使用的引物为引物3 (序列号19)及引物4(序列号20)。得到的两个片段分别连接在质粒中。以这两个质粒为模板进行PCR。一方质粒的扩增中使用的引物为引物5(序列号21)及引物2(序列号18)。 另一方质粒的扩增中使用的引物为引物3(序列号19)及引物6(序列号22)。由此，在扩增片段的末端加上了限制酶切位点。对得到的两种片段中的一方用EcoRI及HindIII进行处理。并对另一方用HindIII及MlI进行处理。处理后的片段被连接在预先用EcoRI 及MlI进行了处理的表达质粒中，从而得到β 1肾上腺素能受体表达质粒(以下，称之为 "plasmid(^AR) ”)。所使用的引物的序列如表1所示。[表1]
权利要求
1.一种从脂质双层膜的外侧向内侧输送钾离子的方法，包括以下步骤a及步骤b 步骤a，制备所述脂质双层膜，其中，所述脂质双层膜包括化学物质的受体、G蛋白、及钾离子通道， 所述G蛋白包括嵌合Ga亚基、及G0 γ亚基复合物，所述嵌合Ga亚基由GiMfl3(序列号04)、GiMf28(序列号0 、GiMf94(序列号07) ,Gi7 。lfll3(序列号08)、GiMf α3_05,。(序列号12)、或GiMf α4_06,。(序列号15)中的任意一种构成；以及步骤b，从所述外侧供给所述化学物质及所述钾离子，通过所述嵌合Ga亚基及所述 G0 γ亚基复合物的释放、以及所述60 γ亚基复合物在所述钾离子通道上的结合，将钾离子从所述外侧输送至所述内侧。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述化学物质为肾上腺素能受体激动剂。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述钾离子通道为G蛋白偶联的内向整流型钾离子通道。
4.一种检测或定量化学物质的方法，包括以下步骤c 步骤e 步骤c，制备脂质双层膜、位于所述脂质双层膜外侧的第1液体、及位于所述脂质双层膜内侧的第2液体，其中，所述脂质双层膜包括化学物质的受体、G蛋白、及钾离子通道， 所述G蛋白包括嵌合Ga亚基、及G0y亚基复合物，所述嵌合Ga亚基由GiMfl3(序列号04)、GiMf28(序列号0 、GiMf94(序列号07) ,Gi7 。lfll3(序列号08)、GiMf α3_05,。(序列号12)、或GiMf α4_06,。(序列号15)中的任意一种构成，所述第1液体含有钾离子；步骤d，将所述化学物质供给至所述第1液体；以及步骤e，测定所述第1液体及第2液体中至少任意一方的钾离子的量，从而基于所述钾离子的量检测或定量所述化学物质。
5.如权利要求4所述的方法，其中，所述化学物质为肾上腺素能受体激动剂。
6.如权利要求4所述的方法，其中，所述钾离子通道为G蛋白偶联的内向整流型钾离子通道。
7.—种检测或定量化学物质的方法，包括以下步骤f 步骤h 步骤f，制备脂质双层膜，其中，所述脂质双层膜包括化学物质的受体、G蛋白、及钾离子通道， 所述G蛋白包括嵌合Ga亚基、及G0 γ亚基复合物，所述嵌合Ga亚基由GiMfl3(序列号04)、GiMf28(序列号0 、GiMf94(序列号07) ,Gi7 。lfll3(序列号08)、GiMf α3_05,。(序列号12)、或GiMf α4_06,。(序列号15)中的任意一种构成，步骤g，供给分别位于所述脂质双层膜的外侧及内侧的第1液体及第2液体，在所述第 1液体及第2液体之间夹持所述脂质双层膜，其中，所述第1液体含有钾离子及化学物质；以及步骤h，测定所述第1液体及第2液体中至少任意一方的钾离子的量，从而基于所述钾离子的量检测或定量所述化学物质。
8.如权利要求7所述的方法，其中，所述化学物质为肾上腺素能受体激动剂。
9.如权利要求7所述的方法，其中，所述钾离子通道为G蛋白偶联的内向整流型离子通道。
全文摘要
本发明提供一种从脂质双层膜的外侧向内侧输送钾离子的方法，目的在于，高灵敏度且高精度地检测特定的化学物质。通过利用特定的脂质双层膜，可以高灵敏度且高精度地检测出化学物质。这里，所述特定的脂质双层膜包括化学物质的受体、嵌合G蛋白、及钾离子通道。所述嵌合G蛋白包括嵌合Gα亚基及Gβγ亚基复合物，所述Gα亚基选自由Gi/olf13(序列号04)、Gi/olf28(序列号05)、Gi/olf94(序列号07)、Gi/olf113(序列号08)、Gi/olf α3-β5，c(序列号12)、或Gi/olf α4-β6，c(序列号15)构成的组。
文档编号G01N33/50GK102576029SQ20118000268
公开日2012年7月11日 申请日期2011年1月25日 优先权日2010年10月1日
发明者冈弘章, 森泰生, 清中茂树, 铃木雅登 申请人:松下电器产业株式会社