专利名称：一种桔小实蝇产卵孔的检测方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种桔小实蝇产卵孔检测的方法及应用。
背景技术：
桔小实蝇(Bactrocera dorsalis Hendel)，属双翅目实蝇科。卵产于将近成熟的 果皮内，每头雌虫产卵量400 1000粒。幼虫孵出后即在果内取食为害，被害果常变黄早 落；即使不落，其果肉也必腐烂不堪食用，对果实产量和质量贻害极大，严重影响产量和质 量。能为害芒果、番石榴、番荔枝、阳桃、枇杷等200余种果实。是我国水果生产中的重大害 虫。随着国内外贸易不断加强，境内外农产品的流通更为频繁，桔小实蝇随水果运输 而传播的风险加大。而且，进境旅客携带水果量小，批次多，隐蔽分散，难以控制，传播桔小 实蝇的几率很高。目前，分子生物学手段已被用于桔小实蝇的快速鉴定。然而，桔小实蝇的检疫很大 程度上依赖于水果受害后所形成的表面特征，一些刚受害不久的果实，由于其中桔小实蝇 的卵尚未孵化或孵化不久未能在水果表面产生明显的为害特征而使得在检疫过程中容易 被疏忽。另外，桔小实蝇的种群动态调查主要采用性诱剂对雄成虫进行监测，但造成水果受 害的却是雌虫，而对雌虫的监测尚无有效方法。雌虫在水果表面留下的产卵孔可以被利用以掌握雌虫的发生情况，进而以此弥补 性诱剂监测的缺陷。桔小实蝇产卵孔较小，直径通常只有0. 2mm，多数水果表面的桔小实蝇 产卵孔难以肉眼辩认。利用产卵孔了解雌虫的发生情况尚无技术性突破，难以应用。曾有报道选用红色素(Erythriosin)、伊红(Eosin)或甲基绿(Methylgreen) 之一配成水溶液对水果染色后对产卵孔进行辨认，并指出红色素对产卵孔的染色效果最 佳，可达100%。但是本申请人通过实验验证发现红色素对绝大部分水果表面的产卵孔染色 率均不能达到100%，染色效果好差不一，清晰度不够，并不能确定是否全部为桔小实蝇产 卵孔染色斑，检测结果存在不确定性。通过长期大量的研究总结发现，因为不同水果的物理特性存在较大的差异，不同 种类水果结合种类和浓度不同的染色剂，染色效果都大不同，现有技术相关技术方案并不 能给出针对不同水果获得最佳的染色效果的技术方案，不方便实际应用。

发明内容
本发明的目的是弥补现有技术的不足，提供一种桔小实蝇产卵孔的检测方法，简 单易行，考虑不同水果的物理特性，根据不同水果种类提出染色效果最佳的染色剂种类，使 桔小实蝇产卵孔清晰可见，肉眼可辨，方便统计，适合实际应用。本发明的另一个目的是提供所述方法在水果受桔小实蝇危害检测方面的应用。本发明的目的通过以下技术方案予以实现
提供一种桔小实蝇产卵孔的检测方法，采用体积比浓度为70%的酒精冲洗水果后 风干，再使用染色剂对桔小实蝇产卵孔进行染色处理后辨认统计；所述染色剂为刚果红、藏 红和甲基蓝等。本发明所述桔小实蝇产卵孔的检测方法具体包括以下步骤(1)将果实用体积比浓度为70%的酒精冲洗后风干。本发明采用医学上常用的 70%的酒精对水果表面进行处理，有利于保证后续染色检测的良好效果。配制好质量百分比浓度为0.5 1.0%的染色剂水溶液(0.5 l.Og染色剂 IOOml 水)。(2)将步骤(1)所述清洁后的果实放入染色剂溶液浸泡后取出用清水冲洗干净即 可观察。浸泡3分钟染色效果较佳。本发明方法用于不同种类水果中桔小实蝇产卵孔的准确检测。本发明也可应用于田间桔小实蝇发生情况的调查。通过实施本检测方法可方便地 辨认统计不同水果上桔小实蝇产卵孔情况。本发明的有益效果是按照现有技术，通常采用统一的染色剂例如红色素进行产卵孔的检测，但实际上， 即使是很相似的水果，例如橙、桔或柑，其果皮组织很相似，但按照现有技术的技术路线，其 检测结果相差较远，橙和桔分别使用藏红和刚果红才可分别获得较高的染色率。本发明打破了现有技术笼统的检测路线，克服了现有技术给本技术领域造成的局 限、呆板的操作习惯和思维方式，首次提出不同的水果必须选用不同的染色剂，结合本发明 的处理方式，获得更加清晰准确的检测结果，使本来难以辨认的桔小实蝇产卵孔清晰可见， 肉眼可辨，方便进行统计，保证90%的染色斑为桔小实蝇产卵孔的染色斑，检测结果专一性 和准确率高，适合实际应用。本发明整个检测过程操作简单易行，准确快速，染色剂容易获得，不仅可应用于进 出境水果中桔小实蝇产卵孔的检测，也可用于田间桔小实蝇发生情况的调查，容易推广应用。
具体实施例方式下面结合具体实施例详细说明本发明。本发明提出不同的水果必须选用不同的染 色剂的技术方案，但不能在实施例中一一赘述，选取了具有代表性和常见的水果种类用以 辅助说明本发明，但并不因此限定本发明的范围。实施例1将被桔小实蝇产卵后的芒果用70% (体积比浓度)的酒精冲洗，风干后，放入浓度 为0. 5%的甲基蓝水溶液中浸泡3min，取出芒果用清水冲洗干净即可观察结果。整个过程 操作简单，而且被染色后产卵孔清晰可见，并有90%以上的染色斑是桔小实蝇产卵孔。实施例2将被桔小实蝇产卵后的番石榴用70%的酒精冲洗，风干后，放入浓度为1.0%的 藏红水溶液浸泡3min，取出番石榴用清水冲洗干净即可观察结果。整个过程操作简单，而且 被染色后产卵孔清晰可见，并有90%以上被染色斑是桔小实蝇产卵孔。实施例3
将被桔小实蝇产卵后的桔或柑用70%的酒精冲洗，风干后，放入浓度为0. 5%的 藏红水溶液浸泡3min，取出桔或柑橘用清水冲洗干净即可观察结果。整个过程操作简单，而 且被染色后产卵孔清晰可见，并有90%以上被染色斑是桔小实蝇产卵孔。实施例4将被桔小实蝇产卵后的橙用70%的酒精冲洗，风干后，放入浓度为0.8%的刚果 红水溶液浸泡3min，取出橙用清水冲洗干净即可观察结果。整个过程操作简单，而且被染色 后产卵孔清晰可见，并有90%以上被染色斑是桔小实蝇产卵孔。实施例5将被桔小实蝇产卵后的西柚用70 %的酒精冲洗，风干后，放入浓度为0. 5 %的甲 基蓝水溶液浸泡3min，取出西柚用清水冲洗干净即可观察结果。整个过程操作简单，而且被 染色后产卵孔清晰可见，并有90%以上被染色斑是桔小实蝇产卵孔。实验结果见表1。表1不同染色剂在3种寄主水果上桔小实蝇产卵孔的染色率
权利要求
一种桔小实蝇产卵孔的检测方法，其特征在于是采用体积比浓度为70％的酒精清洁待测水果后，使用染色剂对水果进行浸泡染色处理后辨认统计；所述染色剂为刚果红、藏红或甲基蓝。
2.根据权利要求1所述桔小实蝇产卵孔的检测方法，其特征在于所述浸泡时间为3分钟。
3.根据权利要求1所述桔小实蝇产卵孔的检测方法，其特征在于包括以下步骤(1)根据水果种类、按照0.5 1. Og染色剂100ml水配制染色剂溶液；(2)采用体积比浓度为70%的酒精冲洗待测水果，风干；(3)将步骤(2)处理后的水果放入染色剂溶液浸泡3分钟，取出用清水冲洗干净即可观察。
4.一种权利要求1或2所述方法的应用，其特征在于采用70%的酒精冲洗芒果，风干 后，放入浓度为0.5%的甲基蓝水溶液中浸泡3min，取出芒果用清水冲洗干净即可观察结^ ο
5.一种权利要求1或2所述方法的应用，其特征在于采用70%的酒精冲洗番石榴，风 干后，放入浓度为1.0%的藏红水溶液浸泡3min，取出番石榴用清水冲洗干净即可观察结^ ο
6.一种权利要求1或2所述方法的应用，其特征在于采用70%的酒精冲洗桔或柑橘， 风干后，放入浓度为0. 5%的藏红水溶液浸泡3min，取出桔或柑橘用清水冲洗干净即可观察结果。
7.—种权利要求1或2所述方法的应用，其特征在于采用70%的酒精冲洗橙，风干后， 放入浓度为0. 8%的刚果红水溶液浸泡3min，取出橙用清水冲洗干净即可观察结果。
8.—种权利要求1或2所述方法的应用，其特征在于采用用70%的酒精冲洗西柚，风 干后，放入浓度为0. 5%的甲基蓝水溶液浸泡3min，取出西柚用清水冲洗干净即可观察结
全文摘要
本发明公开了一种桔小实蝇产卵孔的检测方法及应用。本发明采用适当的处理方法和不同染色剂对受桔小实蝇危害的不同水果进行染色处理后辨认统计，使本来难以辨认的桔小实蝇产卵孔清晰可见，方便进行统计；整个检测过程操作简单，快速，染色剂容易获得，可应用于进出境水果中桔小实蝇产卵孔的检测，也可用于田间桔小实蝇发生情况的调查，容易推广应用。
文档编号G01N1/30GK101923048SQ20101905002
公开日2010年12月22日 申请日期2010年2月2日 优先权日2010年2月2日
发明者周春梦, 张佩芬, 徐玲玲, 汤滢, 肖盈, 许益镌 申请人:华南农业大学