专利名称：药品、保健食品中掺杂氨基比林的快速测定方法
技术领域：
本发明涉及一种氨基比林成分的检测方法，具体是检测药品和保健食品中，尤其 是用于检测抗风湿类中药制剂和保健食品中是否添加氨基比林成分的方法。
背景技术：
氨基比林(Aminophenazone)，又名匹拉米洞、二甲氨基安替比林，其化学名称为 4- 二甲氨基-1，5- 二甲基-2-苯基-3-吡唑啉酮，分子式为C13H17N3O15氨基比林解热镇痛作用较强，缓慢而持久，消炎抗风湿作用与阿司匹林相似。通 过抑制下视丘前列腺素的合成和释放，恢复体温调节中枢感受神经元的反应性而起退热作 用；通过抑制环氧化酶，选择性抑制下丘脑体温调节中枢前列腺素的合成，导致外周血管 扩张、出汗而达到解热的作用；通过抑制前列腺素等的合成和释放，提高痛阈而起到镇痛作 用，属于外周性镇痛药。氨基比林因能引起骨髓抑制以及能形成亚硝胺致癌物质，故单用制 剂已淘汰，临床常用的是其复方制剂。目前临床常用的含氨基比林的复方制剂多为处方药，患者需要在医生的指导下方 能服用，国家相关部门对此类药品的生产、经营及使用进行了严格的规定，对于氨基比林引 起的药物不良反应如恶心、呕吐、过敏性皮炎等也曾有过报道。但近年来，一些抗风湿类中 成药和保健食品中非法添加氨基比林的情况却日趋严重，各相关机构也为此加大了监察力 度，打击非法添加氨基比林样品。非法添加氨基比林的中药制剂和保健食品主要在广大的 农村和经济欠发达的中小城市销售，由于这些地区技术监管能力薄弱，缺少必要的检验仪 器和技术，导致非法添加药品的滥用，给人民群众的用药安全带来隐患。目前检验药品和保健食品中非法添加氨基比林的方法主要有如下三种1、薄层色谱法样品中的待测成分用三氯甲烷提取，所得的供试品溶液和对照品溶液点在同一块 薄层板上(薄层板通常由硅胶制成)，用展开剂展开，晾干后，薄层板在紫外灯下检示。不同 物质在薄层色谱板不同的位置上以斑点的形式出现(原因是不同的物质有不同的迁移速 度，常以色谱迁移值表示展开后斑点到原点之间的距离)，根据待测样品是否在与对照品相 应位置上出现斑点这一实验所得现象来判断待测样品中是否含有目标成分。氨基比林对照 品溶液和样品提取所得的供试品溶液在同一块薄层色谱板上点样，展开剂展开，晾干后，薄 层色谱板在紫外灯下检示，如果供试品溶液薄层色谱图在与氨基比林对照品相应的位置上 出现斑点，则提示样品中可能含有氨基比林。方法取氨基比林适量，以三氯甲烷溶解配制成10mg/ml的溶液，吸取10 μ 1，点于 硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙醚-丙酮-氨水(9 6 1 0.01)为展开剂，展 距为15. 5cm。展开后，晾干，置紫外灯下(254nm)检视，Rf = 0. 57。薄层色谱法的优点是不需要使用昂贵的分析仪器。该方法缺点是(1)色谱分辨 率较低，中药制剂成分复杂，干扰因素较多，易将某些成分误判为氨基比林，某些共存成分 如果量较大且色谱迁移值与氨基比林接近则会干扰目标成分的检出。(2)色谱展开和晾干
3的时间长，不能满足快速测定的要求。(3)薄层色谱板需要干燥存放，环境的温度和湿度对 分离效果的影响大。(4)要求实验人员有较好的经验。(5)需要有固定的场所，不适合做流 动性大的现场检测。
2、高效液相色谱法 高效液相色谱是现代常用的分析方法。在相同的色谱条件下，不同的物质有不同 的色谱保留时间。在相同的色谱条件下氨基比林对照品溶液和样品提取所得的供试品溶液 分别进样，根据色谱保留时间可判断待测样品中是否含有氨基比林。色谱条件色谱柱C18(25(kimX4.6謹，5μπι)流动相甲醇-1%醋酸溶液(以二乙胺调节ρΗ至3. 7) 34 66流速L0ml/min检测波长260nm柱温30°C进样体积20 μ 1理论塔板数11458保留时间13.35min高效液相色谱法的优点是色谱分离效率高，灵敏度高。缺点是(1)仪器价格昂 贵，样品前处理时间长，色谱柱易受污染，分析成本高。(2)当共存成分的色谱保留时间与氨 基比林的色谱保留时间接近时容易作出错误的判断。(3)仪器对使用环境要求高，需要固定 摆放，不适合做流动性大的现场检测。3、高效液相色谱_质谱联用法高效液相色谱_质谱联用法是一种分析成本比高效液相色谱法更高，操作比高效 液相色谱法更复杂的分析方法。以高效液相色谱仪作为分离器，质谱仪作为分析器的高效 液相色谱-质谱联用法适用于分析成分复杂、背景干扰严重的样品，可提高检测结果的可靠性。液质联用条件使用十八烷基键合硅胶为填充剂的液相色谱柱(柱头加装相同规 格填料的预色谱柱)，以含有0.02mol/L乙酸铵-0. 乙酸水溶液/乙腈(30 70)为流 动相，检测波长为280nm，进样量10 μ 1，理论塔板数不小于1000，柱温25°C，质谱装配电喷 雾电离源(ESI)，源电压5kV，毛细管温度275°C，毛细管电压15V，鞘气流速40arb，正离子检 测，扫描方式采用全扫描一级质谱、全扫描二级质谱(MS/MS)，质量采集范围100 1000。高效液相色谱_质谱联用法的缺点是仪器对使用环境的要求更高，需要固定摆 放，不适合做流动性大的现场检测。此外，氨基比林部颁标准中规定了三种鉴别方法，具体如下取本品约0. 6g，加水15ml溶解后，照下述方法试验(1)取溶液5ml，加稀盐酸3滴与三氯化铁试液1ml，即显紫堇色；再加稀硫酸数 滴，变为紫红色。(2)取溶液5ml，加硝酸银试液5滴，即显紫堇色，渐析出灰黑色的金属银。(3)取溶液5ml，加稀铁氰化钾试液，即显深蓝色或发生沉淀。以上方法用于药品和保健食品中氨基比林成分的快速测定，都存在灵敏度不高、 专属性较差等缺点。对于方法(1)，当取用量达到临床最低药用剂量的十分之一时，显色反应现象几乎观察不到，且中药基质中很多物质都能发生类似反应，提示该方法的灵敏度和 专属性均较低。方法(2)反应的灵敏度可以满足要求，但由于中药基质中许多成分能同银 离子生成沉淀，给反应现象的观察带来较大干扰。对于方法(3)，当取用量达到临床最低药 用剂量的十分之一时，反应现象几乎观察不到。提示该方法的灵敏度较低。目前在实际检测中采用的主要方法是高效液相色谱法和高效液相色谱_质谱联 用法。这两种方法的分辨率和灵敏度均较高，但由于所需仪器价格昂贵，实验操作复杂，且 仪器对使用环境的要求高等原因并不适合于快速筛查及流动性大的现场检测。

发明内容
本发明的目的在于提供一种克服现有检测技术的缺陷，分析成本低、不需要使用 贵重分析仪器、专属性强、灵敏度高、适用于现场检验药品和保健食品中是否添加氨基比林 的快速检验方法。本发明的另一目的在于提供上述方法在制备氨基比林快速试验试剂盒的应用。本发明的另一目的在于提供上述方法在检验药品、保健食品中是否添加氨基比林 的筛查检验中的应用。本发明药品、保健食品中掺杂氨基比林的快速测定方法，依次由以下步骤组成(1)提取药品和保健食品中的氨基比林成分，得到提取液；(2)用溶剂萃取所述提取液，分离萃取液，浓缩得残渣；(3)将所述残渣再次溶解，得供试品溶液；(4)向所述供试品溶液中加入检测剂。其中，步骤⑴中用水提取药品和保健食品中的氨基比林成分；步骤(2)中用乙酸 乙酯萃取提取液；步骤(3)中的残渣用水溶解；步骤(4)中的检测剂为三氯化铁试液和铁 氰化钾试液。氨基比林结构基团具有极强的还原性，可将铁离子还原为亚铁离子，而所生成的 亚铁离子可与铁氰化钾中的六氰合铁酸根络合生成深蓝色络合物六氰合铁酸亚铁钾。针对目前市场上的大多数药品或保健食品，推荐取样量如下 具体的技术方案如下对于固体样品，应将其研细或剪碎，以5 IOml水溶解，振摇使其提取充分，静置片刻，过滤除去不溶物，收集滤液。将滤液用等体积乙酸乙酯萃取，振摇后静置片刻，转移乙 酸乙酯层萃取液，浓缩得残渣，向残渣中加入3 5ml水，振荡溶解，所得溶液即为供试品溶 液。对于液体样品，应量取适量样品溶液，置于分液漏斗中，加入等体积乙酸乙酯萃 取，转移乙酸乙酯层萃取液，浓缩得残渣，向残渣中加入3 5ml水，振荡溶解，所得溶液即 为供试品溶液。其中，将固体样品加水溶解的目的是把氨基比林及样品中的水溶性成分从基质中 提取出来。乙酸乙酯萃取的目的是在保留氨基比林的基础上除去中药制剂中的色素，以除 去样品本身颜色给实验结果观察带来的干扰。将乙酸乙酯萃取液浓缩并以水复溶的目的是 为了除去萃取剂乙酸乙酯，使氨基比林从乙酸乙酯中分散出来，并使水溶性显色剂与供试 品溶液混溶，便于显色。向所得供试品溶液中依次滴加三氯化铁试液及铁氰化钾试液各2 5滴，观察显 色反应。滴加三氯化铁试液是为了提供充足的铁离子，从而与强还原性的氨基比林反应生 成亚铁离子，为下一步的络合显色反应提供充足的物质基础，提高反应的灵敏度。Fe3+e — Fe2+滴加铁氰化钾的目的是提供六氰合铁酸根离子，与亚铁离子络合生成深蓝色络合 物。Fe2++ [Fe (CN) 6] 3^ — Fe [Fe (CN) 6]“在结果的判断上，若待测样品中含有氨基比林，会立即生成深蓝色络合物。而阴性 对照则变为绿色悬浊液。根据本发明，可以制成氨基比林快速检验试剂盒。根据本发明，可以应用于药品、保健食品是否掺入氨基比林的筛查检验中。同现有技术相比，本发明具有如下优点快速、简便。整个操作过程包括水浸提3分钟、过滤2分钟、乙酸乙酯萃取3分钟， 萃取液吹干2分钟、残渣复溶2分钟、然后加入显色剂，整个操作过程在12分钟完成。相比 于液相色谱、液质联用方法简便快捷，且无需对照品。专属性强、准确率高。根据方法验证结果，片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、口服液等剂 型的常用辅料对氨基比林的检出均无干扰。反应灵敏迅速。氨基比林的临床使用剂量为0. 1 0. 15g，本发明待检物质氨基比 林的最低检出限已达到临床最低有效剂量的十分之一，且在加入显色剂后立即发生显色反 应。因此用该方法检查药品、保健食品中是否添加氨基比林具有足够的灵敏度。适用范围广。该方法可以用于固体制剂和液体制剂，并且无论是中药制剂还是保 健食品均可使用本方法。本发明提供的方法对氨基比林部颁标准的方法进行了改进，将原方法中的稀铁氰 化钾试液改为分别加入三氯化铁试液和铁氰化钾试液，提高了反应的灵敏度。本发明提供的药品和保健食品中擅自添加氨基比林的快速筛查方法可有助于及 时快速筛查出非法添加药品，便于流动性大的现场操作，可有效防止非法添加药品的滥用， 给群众的用药安全提供可靠的保障。
具体实施例方式以下实施例将有助于本领域的普通技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式 限制本发明。以下实施例中，各种试液的配制方法如下三氯化铁试液取三氯化铁9g，加水溶解成100ml，即得。铁氰化钾试液取铁氰化钾lg，加水IOml使溶解，即得。实施例1天麻胶囊(吉林吉春制药有限公司，胶囊剂，标示服用量2粒/次)取1粒内容物，加入氨基比林0. Olg(相当于临床最低有效剂量的十分之一)，置 于IOml样品管中，加入5ml水，振荡使之充分溶解，过滤，收集滤液，向滤液中加入5ml乙酸 乙酯，振摇2min，静置，得乙酸乙酯层萃取液，转移萃取液用电吹风吹干，向残渣中加入5ml 水，振摇使溶解，得供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰化钾试液2滴，立 即生成深蓝色络合物。阴性对照样品试验取相同样品的1粒内容物，置于IOml样品管中，加水溶解，此 后操作同上，过滤、萃取，制备供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰化钾试 液2滴，溶液变为绿色悬浊液。实施例2风湿关节炎片(沈阳东新药业有限公司，片剂，黄色包衣，标示服用量4片/次)取样品2片，除去包衣，于研钵中研碎，加入氨基比林0.01g(相当于临床最低有效 剂量的十分之一)，置于IOml样品管中，加入5ml水，振荡使之充分溶解，过滤，收集滤液，向 滤液中加入5ml乙酸乙酯，振摇2min，静置，得乙酸乙酯层萃取液，转移萃取液用电吹风吹 干，向残渣中加入5ml水，振摇使溶解，得供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴， 铁氰化钾试液2滴，立即生成深蓝色络合物。阴性对照样品试验取相同样品2片，除去包衣，于研钵中研碎，置于IOml样品管 中，加水溶解，此后操作同上，过滤、萃取，制备供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液 2滴，铁氰化钾试液2滴，溶液变为绿色悬浊液。实施例3复方风湿宁片(广东罗浮山药业有限公司，片剂，标示服用量2片/次)取样品2片，于研钵中研碎，加入氨基比林0. Olg (相当于临床最低有效剂量的十 分之一)，置于IOml样品管中，加入5ml水，振荡使之充分溶解，过滤，收集滤液，向滤液中加 入5ml乙酸乙酯，振摇2min，静置，得乙酸乙酯层萃取液，转移萃取液用电吹风吹干，向残渣 中加入5ml水，振摇使溶解，得供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰化钾 试液2滴，立即生成深蓝色络合物。阴性对照样品试验取相同样品2片，于研钵中研碎，置于IOml样品管中，加水溶 解，此后操作同上，过滤、萃取，制备供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰 化钾试液2滴，溶液变为绿色悬浊液。实施例4骨刺消痛胶囊(中山市中智制药有限公司，胶囊剂，标示服用量4粒/次)
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取2粒内容物，加入氨基比林0. Olg(相当于临床最低有效剂量的十分之一)，置 于IOml样品管中，加入5ml水，振荡使之充分溶解，过滤，收集滤液，向滤液中加入5ml乙酸 乙酯，振摇2min，静置，得乙酸乙酯层萃取液，转移萃取液用电吹风吹干，向残渣中加入5ml 水，振摇使溶解，得供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰化钾试液2滴，立 即生成深蓝色络合物。阴性对照样品试验取相同样品2粒内容物，置于IOml样品管中，加水溶解，此后 操作同上，过滤、萃取，制备供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰化钾试液 2滴，溶液变为绿色悬浊液。实施例5万通筋骨片(通化万通股份有限公司，片剂，标示服用量2片/次)取样品2片，于研钵中研碎，加入氨基比林0. Olg (相当于临床最低有效剂量的十 分之一)，置于IOml样品管中，加入5ml水，振荡使之充分溶解，过滤，收集滤液，向滤液中加 入5ml乙酸乙酯，振摇2min，静置，得乙酸乙酯层萃取液，转移萃取液用电吹风吹干，向残渣 中加入5ml水，振摇使溶解，得供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰化钾 试液2滴，立即生成深蓝色络合物。阴性对照样品试验取相同样品2片，于研钵中研碎，置于IOml样品管中，加水溶 解，此后操作同上，过滤、萃取，制备供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰 化钾试液2滴，溶液变为绿色悬浊液。实施例6麝香风湿胶囊(江西药都仁和制药有限公司，胶囊剂，标示服用量4粒/次)取2粒内容物，加入氨基比林0. Olg(相当于临床最低有效剂量的十分之一)，置 于IOml样品管中，加入5ml水，振荡使之充分溶解，过滤，收集滤液，向滤液中加入5ml乙酸 乙酯，振摇2min，静置，得乙酸乙酯层萃取液，转移萃取液用电吹风吹干，向残渣中加入5ml 水，振摇使溶解，得供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰化钾试液2滴，立 即生成深蓝色络合物。阴性对照样品试验取相同样品2粒内容物，置于IOml样品管中，加水溶解，此后 操作同上，过滤、萃取，制备供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰化钾试液 2滴，溶液变为绿色悬浊液。实施例7腰痛宁胶囊(承德颈复康药业集团有限公司，胶囊剂，标示服用量4粒/次)取2粒内容物，加入氨基比林0. Olg(相当于临床最低有效剂量的十分之一)，置 于IOml样品管中，加入5ml水，振荡使之充分溶解，过滤，收集滤液，向滤液中加入5ml乙酸 乙酯，振摇2min，静置，得乙酸乙酯层萃取液，转移萃取液用电吹风吹干，向残渣中加入5ml 水，振摇使溶解，得供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰化钾试液2滴，立 即生成深蓝色络合物。阴性对照样品试验取相同样品2粒内容物，置于IOml样品管中，加水溶解，此后 操作同上，过滤、萃取，制备供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰化钾试液 2滴，溶液变为绿色悬浊液。实施例8
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风湿关节炎片(吉林跨海生化药业公司，片剂，标示服用量4片/次)取样品2片，于研钵中研碎，加入氨基比林0. Olg (相当于临床最低有效剂量的十 分之一，)，置于IOml样品管中，加入5ml水，振荡使之充分溶解，过滤，收集滤液，向滤液中 加入5ml乙酸乙酯，振摇2min，静置，得乙酸乙酯层萃取液，转移萃取液用电吹风吹干，向残 渣中加入5ml水，振摇使溶解，得供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰化 钾试液2滴，立即生成深蓝色络合物。阴性对照样品试验取相同样品2片，于研钵中研碎，置于IOml样品管中，加水溶 解，此后操作同上，过滤、萃取，制备供试品溶液。向该溶液中滴加三氯化铁试液2滴，铁氰 化钾试液2滴，溶液变为绿色悬浊液。
权利要求
一种药品、保健食品中掺杂氨基比林的快速测定方法，依次由以下步骤组成(1)提取药品和保健食品中的氨基比林成分，得到提取液；(2)用溶剂萃取所述提取液，分离萃取液，浓缩得残渣；(3)将所述残渣再次溶解，得供试品溶液；(4)向所述供试品溶液中加入检测剂。
2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中用水提取药品和保健食 品中的氨基比林成分。
3.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中的萃取溶剂为乙酸乙
4.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(3)中的残渣用水溶解。
5.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤⑷中的检测剂为三氯化铁试 液和铁氰化钾试液。
6.如权利要求1所述的测定方法，依次由以下步骤组成(1)取药品或保健食品，加水溶解，振摇使分散，静置片刻，过滤除去不溶物，收集滤液；(2)用乙酸乙酯萃取所述滤液，振摇后静置片刻，分离乙酸乙酯萃取液，浓缩得残渣；(3)将所述残渣用水溶解，得供试品溶液；(4)向所述供试品溶液中依次加入检测剂三氯化铁试液和铁氰化钾试液。
7.权利要求1所述的测定方法在制备氨基比林快速检验试剂盒中的应用。
8.权利要求1所述的测定方法在药品和保健食品是否掺入氨基比林的筛查检验中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种药品、保健食品中掺杂氨基比林的快速测定方法。该方法由以下步骤组成(1)提取药品和保健食品中的氨基比林成分，得到提取液；(2)用溶剂萃取所述提取液，分离萃取液，浓缩得残渣；(3)将所述残渣再次溶解，得供试品溶液；(4)向所述供试品溶液中加入检测剂。本发明检验方法快速、简便，专属性强、准确率高，反应灵敏，适用范围广，适用于现场检验药品、保健食品是否掺入了氨基比林。根据本发明可制成氨基比林快速检验试剂盒，将能满足广大农村地区和检验技术条件落后的中小城市开展药品、保健食品监督检验的需要。
文档编号G01N31/22GK101907617SQ201010226488
公开日2010年12月8日 申请日期2010年7月13日 优先权日2010年7月13日
发明者周寿林, 宋曼铜, 李军, 殷果, 王珏, 王铁杰, 石兴红, 肖丽和 申请人:深圳市药品检验所