专利名称：：一种害虫的生物测定方法
技术领域：
：本发明属于植物保护
技术领域：
，特别是涉及一种害虫的生物测定方法
背景技术：
：药剂是防治蓟马等r-对策小虫最快捷有效的方法，也是害虫综合治理(IPM)的重要组成部分。任何药剂投放到田间使用前必须经过室内的筛选过程，因此探索出简便实用有效的生物测定方法就成为药剂防治的基础。目前常用的药剂生物测定的方法包括点滴法、浸叶法、浸虫法、玻璃药膜法等，这些方法适合针对体积较大的害虫测试药剂的有效剂量，但是上述方法对于最大体长仅1毫米的害虫来讲均不适用。比如近年来，在蔬菜和花卉上的危害呈逐年上升的趋势的蓟马，2001年棕榈蓟马在我国北方首次发现，并对保护地蔬菜造成严重威胁。2003年一种新的入侵害虫一西花蓟马入侵我国，由于其入侵性强，危害广泛而引起各界的广泛关注。欧晓明1996年(《测定蓟马抗药性的一种新技术》.农药科学与管理，1996(4):23-24)提出了一种玻璃残留处理法，用于测定蓟马的抗药性，但该方法步骤多，还需要Potter喷雾塔作为辅助设备，Potter喷雾塔因价格昂贵、操作复杂而不易被大多数单位采用。Ru6daandSheHon2003年(RuedaAandSheltonAM.DevelopmentofabioassaysystemformonitoringsusceptibilityinThripstabaci.PestManag.Sci.2003,59:553-558.)提出了一种针对蓟马的生物测定方法一TIBS(thripsinsectcidebioassaysystem),该方法设备简单、便于操作，适用于对田间蓟马种群的生物测定，通过药剂处理容器内部，使用真空泵吸取害虫到容器中，使害虫接触到容器内避上的药膜而起触杀作用，其对具有触杀活性的药剂能够很准确地进行药效评价，适合于小虫子的药剂生物测定。但是该方法虽然解决了小体积害虫的药剂生物测定中存在的困难，却与上述的其他方法都存在一个缺陷没有考虑到很多药剂对于害虫不仅仅具有触杀活性，对于同时具有触杀、胃毒作用的药剂，不能真实地测出该类药剂的有效活性，导致测试出来的剂量大大超过致死剂量，环境污染严重，也浪费药剂，还给害虫施加了较大的选择压力。对于体积较大一点的害虫，不存在难以操作的问题，测试人员一般会直接将虫子浸泡在药剂中测试药物的触杀活性，或者直接给害虫喂药剂浸泡过的植物组织以测试药剂的胃毒活性，但仍然没有兼顾到触杀与胃毒同时起作用的情况，导致在防治体积较大一点的害虫时给的药剂量也大大高于所需，施药时给环境造成污染更是不言而喻。
发明内容针对上述领域中的缺陷，本发明提供了适用广泛，对触杀、胃毒同时作用的药剂均能够进行有效测定的新方法-一命名为叶管药膜法，该方法能准确测定出一种药剂对于害虫的最低有效剂量，既能有效毒杀害虫，又最高程度地减轻了环境污染和药剂浪费。一种害虫的生物测定方法，其特征是在内置有害虫的且内壁附着有药剂的容器中放置经相同浓度药剂处理过的害虫喜食的植物组织。所述内壁附着药剂的容器是通过药剂浸泡容器内部得到。所述药剂处理指药剂浸泡植物组织。所述内置的害虫可以用镊子或毛笔等器具移入。所述容器底部有小孔，内置的害虫可以采用真空泵产生的气流吸入容器中。所述容器为塑料离心管。所述塑料离心管为0.5ml或1.5ML的有封口盖的离心管。所述害虫为蓟马类害虫。所述植物为害虫的寄生植物。本发明提供的药剂测定方法以药物对害虫的综合作用方式测出被试药剂的最低有效剂量，在内壁附着有药剂的容器中放置经药剂处理过的害虫喜食的植物组织，放入害虫后，害虫通过接触容器内壁的药膜而使药剂对其触杀作用起效，放入的植物材料一方面起到喂养害虫的作用，另一方面通过被食用而使药剂发挥胃毒作用。对于具有熏蒸作用的药剂，可以采用密闭容器，即可保证触杀作用、胃毒作用、熏蒸作用同时有效，因而能准确有效地评价被试剂药剂的效果。本方法所用的容器可以用很多方式使其内壁附着药膜，是药剂剂型而定，本发明采用药剂浸泡容器内部使内壁附着一层药膜。对于植物材料的处理也可以采用很多方式使其成为药剂的载体，例如喷雾、浸泡，本发明中用最简单的浸泡方法。对于被试害虫，体积若较大，大至用镊子或者柔软毛笔可以将其转移到容器中而不会对起生命力造成损伤的，则直接用镊子或毛笔将其移入容器中，而对于体积小至肉眼难以逐个分辨的害虫，如蓟马类害虫，本发明采用了真空泵的气流将虫子吸入容器的方法，此时所用的容器是底部有小孔的管子，虫子被气流经小孔送入容器内，然后用封口膜将小孔封住。这样避免了传统方法中用毛笔或者镊子直接挑取害虫时对害虫的生命力造成损伤而影响准确测定，操作方便。本发明采用实验室常用的塑料带密封盖的离心管，这类管子使用成本低，易于获得，且方便在其底部穿刺出吸虫的小孔。本发明提供的药剂生物测定方法所用的容器视被试的害虫的体积而定，对于蚜虫、蓟马类微小体积的害虫，1.5ML或者0.5ML的塑料离心管就可以达到要求，而不必使用玻璃或塑料的培养皿、试管或三角瓶等作为实验容器，这些需占用较大空间，而且许多玻璃器皿容易破损，刷洗不便，费工费力。本发明的生物测定方法对于防治r-对策小虫是一种快捷有效的方法，特别是蓟马这种危害严重，难以防治的害虫，因此本发明以蓟马作为试虫，试验证明本发明的药剂生物测试方法对于防治种类害虫能快速提供有效的用药标准。本发明提供的药物测定方法中使用了害虫食用的植物材料，该植物材料最好是被试害虫的寄主植物且是其喜欢食用的组织，这样能最大程度地接近实际生产中防治害虫的环境条件，对于准确测定药剂的效果非常重要。具体实施方式实施例1叶管药膜法步骤l:浸管药剂配制6-7个浓度如表1，另加l个空白对照，将每个浓度药液分别注满1.5mL离心管4只，每只为1重复，用记号笔标记好相应对照和处理浓度，放置4h。然后倒掉药液，将离心管置于实验台上晾千，待用。步骤2:浸叶将采集的新鲜甘蓝叶洗干净，晾干。分别在每个浓度药液中浸渍10秒钟，药剂处理后的叶片置实验台上晾干，待用。用剪刀将晾干的甘蓝叶片剪成2cmX4cm的长方形小条，用小镊子夹入相应药液浓度的离心管中，每管1片，放置平整。步骤3:吸虫将长约10cm左右的细针针尖经酒精灯加热，刺晾干的离心管管底，烫直径约2-3mm的孔。真空泵的接口用纱布封好，套在以上处理好的离心管管口，打开真空泵，调节气流大小(以刚好能够吸起试虫为宜)，把离心管管底的烫孔对准蓟马，使虫顺气流吸入离心管。先对照后处理，每管吸2龄若虫10-20头，然后盖好管盖，用封口膜封好烫孔。最后置于25。C恒温箱内，光照16L:8D，于48h后检查结果。步骤4:检查结果将离心管内虫子及叶片倒出于白纸上，先对照后处理。判断死亡标准为，用毛笔轻触虫体，不能爬行视为死亡。记录相应浓度下每管内的虫子总数、活虫数和死虫数。试验数据参照机率值Finney分析法，求出毒力回归方程和LCs。等值。计算各处理的虫子的死亡率并应用SAS软件分析不同处理(不同方法和不同浓度)之间的差异显著性。表1比较了用叶管药膜法和TIBS方法测定10%除尽SC对西花蓟马的毒杀效果，除尽的主要作用方式是胃毒作用。表1西花蓟马在10%除尽sc不同处理浓度和不同处理方法下的死亡率药剂浓度(mg/L)TIBS叶管药膜法1004.7士1.2aA89.4士4.5aB507.0士0.8aA7L5士3.1bB258.3士2.4aA65.3士2.3cB12.511.5士3.3aA58.4士2.4cB6.255.5士1.0aA50.3士4.0cBCK5.0士0.9aA1.6士0.1dA注小写字母表示西花蓟马在不同处理浓度之间；大写字母表示西花蓟马在药剂不同处理方法之间可以看出，采用叶管药膜法处理西花蓟马的死亡率随处理浓度的提高而提高，而TIBS法不同浓度之间无差异，且没有规律性，不能真实反映除尽的实际杀虫活性。实施例2叶管药膜法的验证试验药剂有机磷类:40%毒死蜱EC(山东大成农药股份有限公司)，拟除虫菊酯类:4.5%高效氯氰菊酯EC(上海正华农药有限公司)、20%杀灭菊酯EC(江苏粟阳农药厂)，微生物类杀虫剂1.8%爱福丁(阿维菌素)EC(北京中农大生物技术股份有限公司)2.5y。菜喜(多杀菌素)SC(美国陶氏益农公司)甲氨基阿维菌素苯甲酸盐ME，植物源农药0.3y。苦参碱AS(银川市满春工业园集真路58号)，新型杀虫剂35%吡虫啉SC(江苏常隆化工有限公司)10%吡虫啉WP(苏州华源集团有限公司)、25y。阿克泰(噻虫嗪)WDGS(先正达(中国)投资有限公司)、1oy。除尽(溴虫腈)sc(氰胺国际)、5呢锐劲特(氟虫腈)SC(拜耳作物科学公司)。结果如表2所示，24小时后40%毒死蜱EC、4.5%高效氯氰菊酯EC、20%杀灭菊酯EC、1.8%爱福丁(阿维菌素)EC、2.5。/。菜喜(多杀菌素)SC、3。/。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐ME，0.3%苦参碱AS、10。/。除尽(溴虫腈)SC、5。/。锐劲特(氟虫腈)SC毒力效果较好，LCs。分别为7.0、13.0、13.0、2.0、0.2、0.5、3.5、25.6和1.6mg/L，可以作为防治西花蓟马有效药剂。各种药剂的对照死亡率均在0-6.9%，符合生物测定要求的对照死亡率控制在10%以内的要求，进一步说明了本方法的可靠性和有效性。表2不同药剂对西花蓟马的室内生测结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>权利要求1、一种害虫的生物测定方法，其特征是在内置有害虫的且内壁附着有药剂的容器中放置经相同浓度药剂处理过的害虫喜食的植物组织。2、根据权利要求1所述的害虫的生物测定方法，所述内壁附着药剂的容器是通过药剂浸泡容器内部得到。3、根据权利要求1所述的害虫的生物测定方法，所述药剂处理指药剂浸泡植物组织。4、根据权利要求1所述的害虫的生物测定方法，所述内置的害虫可以用镊子或毛笔等器具移入。5、根据权利要求1所述的害虫的生物测定方法，所述容器底部有小孔，内置的害虫可以采用真空泵产生的气流吸入容器中。6、根据权利要求5所述的害虫的生物测定方法，所述容器为塑料离心管。7、根据权利要求6所述的害虫的生物测定方法，所述塑料离心管为0.5ml或1.5ML的有封口盖的离心管。8、根据权利要求5所述的害虫的生物测定方法，所述害虫为蓟马类害虫。9、根据权利要求l所述的害虫的生物测定方法，所述植物为害虫的寄生植物。全文摘要本发明属于植物保护
技术领域：
，特别是涉及一种害虫的生物测定方法。一种害虫的生物测定方法，其特征是在内置有害虫的且内壁附着药剂的容器中放置经相同浓度药剂处理过的害虫喜食的植物组织。本发明提供的方法适用广泛，对触杀、胃毒同时作用的药剂均能够进行有效测定，能准确测定出药剂对于害虫的最低有效剂量，既能有效毒杀害虫，又最高程度地减轻了环境污染和药剂浪费。文档编号G01N33/00GK101315360SQ20081011711公开日2008年12月3日申请日期2008年7月24日优先权日2008年7月24日发明者吴青君,张友军,张治军,徐宝云申请人:中国农业科学院蔬菜花卉研究所