专利名称：一种快速检测髓过氧化物酶的试纸的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及临床免疫学检测技术领域，具体涉及ー种快速检测髓过氧化物酶的试纸。
背景技术：
急性冠脉综合征(ACS)是ー组由急性心肌缺血引起的临床综合征，包括急性心肌梗死(AMI)及不稳定型心绞痛(UA)。心肌梗死是全球范围内致死和致残的主要疾病之一。在中国，冠心病患者超过2千万人，而每年有超过100万人被急性心肌梗死夺去生命。因此，预测及识别出早期急性心肌梗死患者并及时治疗是提高其存活率的关键。髓过氧化物酶(MPO)存在于嗜中性粒细胞和巨噬细胞中。有文献报道在AMI和UA患者的动脉损伤处可大量发现嗜中性粒细胞和巨噬细胞，并释放ΜΡ0。已有ー些用MPO 作为急性冠脉综合征(ACS)危险性分层标志物的研究。并有研究显示在传统心血管危险因素发出疾病信号之前，血浆中MPO水平就已经升高了，标志着损伤斑块的形成。目前的研究表明，MPO是ACS患者发生心血管不良事件的预测因子，特别是在肌钙蛋白T水平较低的患者，MPO能够识别心血管事件危险性较高的患者。近来，有关胸痛和心脏病患者的早期研究也显示，心脏病患者血中MPO的平均水平明显高于健康人。另有研究显示MPO与心肌梗死和胸痛患者30天和6个月发生心血管事件的指标有较高的相关性。检测MPO意味着在更早的阶段发现并及时干预冠心病的发展成为可能。目前髓过氧化物酶检测主要采用酶联免疫方法，操作繁琐且耗时。免疫层析法标本用量少，操作简便快捷。将免疫层析法引入髓过氧化物酶的检测中将会大大缩短检测时间，为临床带来更多的便捷。

实用新型内容(一 )要解决的技术问题本实用新型要解决的技术问题是提供一种可以方便快捷地进行髓过氧化物酶检测的试纸。( ニ )技术方案为了解决上述技术问题，本实用新型提供ー种快速检测髓过氧化物酶的试纸，该试纸包括包被膜、抗体垫；所述抗体垫位于包被膜的ー侧，抗体垫上具有经过标记的抗髓过氧化物酶抗体；所述包被膜上具有检测线和质控线；所述包被膜上的检测线位置具有抗髓过氧化物酶抗体；所述包被膜上的质控线位置具有兔抗鼠抗体。其中，抗体垫上具有胶体金标记的抗髓过氧化物酶抗体，胶体金的粒径为IOnm IOOnm0其中，抗体垫上具有荧光微球标记的抗髓过氧化物酶抗体，荧光微球的粒径为90nm 300nm。其中，抗体垫部分与包被膜重叠、粘贴在包被膜的一端；还包括样品垫，所述样品垫部分与抗体垫重叠，粘贴在抗体垫上。其中，包被膜的另一端连接有吸水垫；所述吸水垫部分与包被膜重叠、粘贴在包被膜上。[0013]其中，包被膜为硝酸纤维素膜。其中，快速检测髓过氧化物酶的试纸整体粘贴在底板上。其中，底板为PVC材料。(三)有益效果上述技术方案具有如下优点使用本实用新型检测试纸进行髓过氧化物酶的检测，简化了检测步骤，缩短了髓过氧化酶的检测时间。

图I是本实用新型试纸的正面示意图；图2是本实用新型试纸的侧面示意图；图3至图5是采用本实用新型试纸进行髓过氧化物酶检测结果示意图。其中，图3中T、C两条线显色为阳性；图4中C 一条线显色为阴性；图5中T、C两条线均未显色为无效。其中，I :样品垫；2 :抗体垫；3 :包被膜；4 :吸水垫；5 :底板；T :涂覆抗髓过氧化物酶抗体测试线；(涂覆兔抗鼠抗体质控线。
具体实施方式
以下结合附图和实施例，对本实用新型的具体实施方式
作进ー步详细描述。以下实施例用于说明本实用新型，但不用来限制本实用新型的范围。实施例I髓过氧化物酶胶体金试纸及其制备方法(參见图I)髓过氧化物酶抗体制备选用商品化的MPO抗体(Hytest公司，cat :4M43)，在IOmM PBS, pH7. 2，4°C条件下透析过夜。包被膜3 (硝酸纤维素膜2. 5cmX0. 6cm)的制备包被缓冲液的配制10mM pH7. 2的磷酸缓冲液，O. 22 μ m微孔滤膜过滤除菌后置
于4°C保存备用。用包被缓冲液将抗髓过氧化物酶抗体和兔抗鼠抗体分别稀释到O. 5mg/mL和
O.5mg/mL,使用Biodot三维喷点平台以I. 5 μ L/cm的量将两者以I. 5cm的间隔均匀喷印于
3.5cm宽度的硝酸纤维素膜上，于25 40°C烘干2小时，加入干燥剂封存备用。胶体金标记抗髓过氧化物酶抗体金标垫的制备本实施例中的抗体垫2中的抗髓过氧化物酶抗体采用胶体金进行标记。用碳酸钾调节颗粒粒径40nm的胶体金溶液的pH值为7. 2，加入抗髓过氧化物酶抗体，室温搅拌30min后，加入终浓度O. 8%的BSA溶液終止，离心后，用洗液清洗后再次离心，加入复溶液后，4°C保存备用。使用Biodot三维喷点平台将金标记抗髓过氧化物酶抗体以3 μ L/cm的速度喷洒于聚酯膜(O. 8cmXO. 6cm)上，于25°C烘干5小吋。加入干燥剂封存备用；样品垫I (聚酯膜2. 7cmX0. 6cm)的处理[0033]将样品垫I放入样品垫处理溶液(O. IM Tris缓冲液含O. 05% S9 (购自杭州隆基生物技术有限公司)，1% BSA)中浸泡I小时后取出于37°C烘干5小时；试纸条的组装及切割(下列所有操作必须在湿度小于38%，温度18 26°C的房间内进行)按照要求手工将包被膜3、吸水垫4 (2. 8cmX O. 6cm)、抗体垫2和样品垫I装于PVC材质的底板5上，组装成试纸板。使用Biodot CM4000型切条刀将组装好的试纸板切成4mm宽的成品试纸条。将本实用新型所述的切割好的单人份试纸条置于塑料底卡上的卡槽内，盖上上盖，使用压卡机将上下两片塑料卡压紧，加入干燥封存于铝箔袋即可。实施例2髓过氧化物酶胶体金试纸及其制备方法(參见图I)包被膜3 (硝酸纤维素膜2. 5cmX O. 6cm)的制备包被缓冲液的配制10mM pH7. 2的磷酸缓冲液，O. 22 μ m微孔滤膜过滤除菌后置
于4°C保存备用。用包被缓冲液将实施例I制备的抗髓过氧化物酶抗体和兔抗鼠抗体分别稀释到
I.Omg/mL和I. 5mg/mL,使用Biodot三维喷点平台以I μ L/cm的量将两者以Icm的间_均匀喷印于3. 5cm宽度的硝酸纤维素膜上，于37°C烘干2小时，加入干燥剂封存备用。采用胶体金标记抗髓过氧化物酶抗体的抗体垫2的制备用碳酸钾调节颗粒粒径IOOnm的胶体金溶液的pH值为7. 5，加入抗髓过氧化物酶抗体，室温搅拌30min后，加入终浓度O. 05%的PEG20000溶液終止，离心后，用洗液清洗后再次离心，加入复溶液后，4°C保存备用。使用Biodot三维喷点平台将复溶液以4 μ L/cm的速度喷洒于玻璃纤维素膜(O. 8cmX0. 6cm)上，于37°C烘干I小吋。加入干燥剂封存备用；样品垫玻璃纤维素膜2. 7cmXO. 6cm)的处理将样品垫放入样品垫处理溶液(O. IM Tris缓冲液含O. 05% S9,l% BSA)中浸泡I小时后取出于37°C烘干5小时；试纸条的组装及切割(下列所有操作必须在湿度小于38%，温度18 26°C的房间内进行)按照要求手工将包被膜、吸水垫(2. 8cmX0. 6cm)、金标垫和样品垫装于PVC底板上，组装成试纸板。使用Biodot CM4000型切条刀将组装好的试纸板切成4mm宽的成品试纸条。将本实用新型所述的切割好的单人份试纸条置于塑料底卡上的卡槽内，盖上上盖，使用压卡机将上下两片塑料卡压紧，加入干燥封存于铝箔袋即可。实施例3髓过氧化物酶胶体金试纸条灵敏度测试随机抽取按照上述实施例I或2制作的新型髓过氧化物酶胶体金试纸30条。将髓过氧化物酶(8M80，购自Hytest公司)溶解于无髓过氧化物酶血清中，并使用该血清稀释到 500ng/mL, 250ng/mL, 100ng/mL, 25ng/mL, lOng/mL,阴性血清，姆个样品浓度测试 5 条,通过肉眼判读结果，当血清中髓过氧化物酶含量低于10ng/mL，胶体金试纸条未能检测。这ー实验结果表明，胶体金试纸条的最低检出限在10ng/mL。下表I本实用新型试纸条的灵敏度检测
权利要求1.一种快速检测髓过氧化物酶的试纸，其特征在于，包括包被膜、抗体垫；所述抗体垫位于包被膜的一侧，抗体垫上具有经过标记的抗髓过氧化物酶抗体；所述包被膜上具有检测线和质控线；所述包被膜上的检测线位置具有抗髓过氧化物酶抗体；所述包被膜上的质控线位置具有兔抗鼠抗体。
2.如权利要求I所述的快速检测髓过氧化物酶的试纸，其特征在于，所述抗体垫上具有胶体金标记的抗髓过氧化物酶抗体，胶体金的粒径为IOnm lOOnm。
3.如权利要求I所述的快速检测髓过氧化物酶的试纸，其特征在于，所述抗体垫上具有突光微球标记的抗髓过氧化物酶抗体，突光微球的粒径为90nm 300nm。
4.如权利要求I所述的快速检测髓过氧化物酶的试纸，其特征在于，所述抗体垫部分与包被膜重叠、粘贴在包被膜的一端；还包括样品垫，所述样品垫部分与抗体垫重叠，粘贴在抗体垫上。
5.如权利要求4所述的快速检测髓过氧化物酶的试纸，其特征在于，所述包被膜的另一端连接有吸水垫；所述吸水垫部分与包被膜重叠、粘贴在包被膜上。
6.如权利要求I所述的快速检测髓过氧化物酶的试纸，其特征在于，所述包被膜为硝酸纤维素膜。
7.如权利要求1-6任意一项所述的快速检测髓过氧化物酶的试纸，其特征在于，所述快速检测髓过氧化物酶的试纸整体粘贴在底板上。
8.如权利要求7所述的快速检测髓过氧化物酶的试纸，其特征在于，所述底板为PVC材料。
专利摘要本实用新型涉及临床免疫学检测技术领域，具体涉及一种快速检测髓过氧化物酶的试纸。本实用新型包括包被膜、抗体垫；所述抗体垫位于包被膜的一侧，抗体垫上具有经过标记的抗髓过氧化物酶抗体；所述包被膜上具有检测线和质控线；所述包被膜上的检测线位置具有抗髓过氧化物酶抗体；所述包被膜上的质控线位置具有兔抗鼠抗体。使用本实用新型检测试纸进行髓过氧化物酶的检测，简化了检测步骤，缩短了髓过氧化酶的检测时间。
文档编号G01N33/573GK202404100SQ201120513019
公开日2012年8月29日 申请日期2011年12月9日 优先权日2011年12月9日
发明者侯建玲, 周轶, 张静, 邱笑违, 黄莎 申请人:北京乐普医疗科技有限责任公司