专利名称：一种快速的醒脑静注射液中控检测方法
技术领域：
本发明属于近红外检测领域，具体涉及一种醒脑静注射液蒸馏过程多指标快速测定方法。
背景技术：
醒脑静注射液为一种复方中药制剂，是由中医学传统名方“安宫牛黄丸”经科学蒸馏精制而成的水溶性静脉注射液，静脉给药后可通过血脑屏障直接作用于中枢神经系统。该药主要由麝香、冰片、郁金和桅子四味药组成，其中麝香气味芳香，善于走窜，能通诸窍不利，为通窍醒脑之要药；冰片辛香走窜，助麝香通诸窍，具有清热解毒之功；郁金性苦寒，能清热泻火，凉血解毒，化痰开郁，并能协同二药开窍通络；桅子性味苦寒，芳香开窍，清热解毒，清理三焦、痰瘀热邪。诸药相配，起到醒脑止痉、清热凉血，行气活血和解毒止痛等功效。醒脑静注射液始于20世纪70年代中期，先收载于地方标准，1998年收载于《卫生部药品标准》，2003年再次提高为国家药品监督管理局国家药品标准，并已被卫生部确定为临床急救常用中成药品之一。醒脑静注射液由以下重量配比的中药制备而成桅子30g、郁金30g、麝香(人工麝香)7. 5g、冰片Ig ;以上四味，郁金、桅子加水约1500ml进行蒸馏，收集蒸馏液IOOOml ;将麝香加入上述蒸馏液中，并加蒸馏水250ml进行蒸馏，收集蒸馏液1000ml，备用；取冰片，加入5g聚山梨酯80，研匀，加入蒸馏液中，混匀，加入注射用氯化钠Sg，搅拌使溶解，混匀，放置，冷藏过夜，滤过，灌封，灭菌，即得。上述的蒸馏过程包括一次蒸馏过程和二次蒸馏过程，具体方法如下I. 一次蒸馏过程是按照法定工艺将桅子、郁金、分别粗粉碎置于蒸馏锅内，加入适量纯化水，进行蒸馏，蒸馏时间不得少于20小时，收集蒸馏液至规定量，将蒸馏桶密闭，挂上标签，冷减备用。2. 二次蒸馏过程是按照法定工艺称取麝香，加入上述一次蒸馏液中，再加注射用水适量，进行蒸馏，蒸馏时间不得少于20小时，收集二次蒸馏液至规定量。将二次蒸馏液密封，挂上标签，冷藏备用。上述过程可以得到两次蒸馏液，在此称为醒脑静注射液中间产物，该中间产物中含有一定量的莪术二酮、莪术醇、吉马酮以及麝香酮成分，通过检测这些成分在中间产物中的含量，可以判断生产过程是否符合标准。因蒸馏过程是醒脑静注射液生产过程的关键环节，得到的中间产物蒸馏液的质量直接关系到药材利用率，同时影响后续生产环节和最终产品的质量均一性和稳定性。目前，蒸馏过程的质量控制主要依靠经验和传统质量分析方法，耗时费力，故研究发展醒脑静蒸馏过程中关键质控指标的快速无损测定方法，有助于解决醒脑静蒸馏过程中关键控制指标的质量控制问题，对于中药工业技术进步和产品质量升级具有重大现实意义。近红外(NIR)光谱技术作为一种快速无损的绿色分析技术，具有快速分析、样品处理简单、无需消耗试剂等特点。近年来，近红外光谱技术已经越来越多的被应用于中药研究，包括药材产地鉴别、有效组分含量测定和制药过程的在线检测和监控。近红外光谱技术的引入为解决复杂中药体系蒸馏过程的质量快速评价及在线检测提供了可能。在中药质量控制及生产应用领域，将近红外光谱技术应用于原药材、成品以及蒸馏、浓缩、醇沉、层析等过程中关键指标的检测已有相关专利文献，如专利(专利申请号200510130631.6,200810050095. 2,201010125515. 6,200910228468. 5,201010577454. 7)等，然而，将近红外光谱技术用于醒脑静注射液蒸馏过程中关键指标的测定仍未见相关报道。

发明内容
本发明提供一种用近红外光谱法测定醒脑静注射液制备过程中的中间产物蒸馏液中莪术二酮、莪术醇、吉马酮以及麝香酮四种成分含量的方法。本发明的目的在于提供一种醒脑静注射液蒸馏过程多指标快速测定方法。采用近红外光谱技术能够快速测定醒脑静注射液蒸馏过程中莪术二酮、莪术醇、吉马酮、麝香酮浓度和液相总峰面积，实现蒸馏液质量的快速评价。该方法准确，快速，稳定，操作简单，适应工业化生产。本发明的测定方法，包括方法的建立和应用，因此本发明提供近红外光谱法的建立方法，该方法包括以下步骤(I)蒸馏液样品收集采集多个批次的醒脑静注射液生产过程中药材蒸馏后的一次蒸馏液和二次蒸馏液样品；如采集5-200个批次的样品，批次越多越能反映准确度。(2)含量测定对第一次蒸馏液中莪术二酮、莪术醇、吉马酮各自的含量和它们的总含量测定，含量用峰面积表示，测定采用液相色谱法，测定方法如下取第一次蒸馏过程的蒸馏液样品10ml，加Iml正己烷萃取，分离正己烷层于2ml的容量瓶中，水层再加Iml正己烷充分萃取，分离正己烷层汇入容量瓶中，定容至刻度。加O. 5g无水Na2SO4，摇匀，取上清，微孔滤膜过滤，取续滤液用于液相色谱分析。液相色谱法条件为Agilent SB-C18 色谱柱(100mm*4. 6mm, I. 8um)。乙腈:0. 1% 磷酸水溶液(55 45)等度洗脱。柱温35°C，流速I. Oml/min，检测波长:214nm，进样量5ul，运行时间25分钟。对第二次蒸馏液中莪术二酮、莪术醇、吉马酮各自的含量和它们的总含量进行测定，含量用峰面积表示，测定采用液相色谱法，测定方法如下取第二次蒸馏过程的蒸馏液样品10ml，加Iml正己烷萃取，分离正己烷层于2ml的容量瓶中，水层再加Iml正己烷充分萃取，分离正己烷层汇入容量瓶中，定容至刻度。加无水Na2SO4O. 5g，摇匀，取上清，微孔滤膜过滤，取续滤液用于液相色谱分析。液相色谱法条件为Agilent SB-C18 色谱柱(100mm*4. 6mm, I. 8um)。乙腈0· 1% 磷酸水溶液(55 :45)等度洗脱。柱温35°C，流速I. Oml/min，检测波长:214nm，进样量5ul，运行时间25分钟。对第二次蒸馏液中麝香酮的含量进行测定，含量用峰面积表示，测定采用气相色谱法，测定方法如下取二次蒸馏过程的蒸馏液样品10ml，加Iml正己烷萃取，分离正己烷层于2ml的容量瓶中，水层再加Iml正己烷充分萃取，分离正己烷层汇入容量瓶中，定容至刻度。加无水Na2SO4O. 5g，摇匀，取上清，微孔滤膜过滤，取续滤液用于气相色谱分析。气相色谱条件为Agilent DB-624 (柱长为30m，内径为O. 25mm，膜厚度为I. 40um);柱温为210°C ;载气为氮气，流速I. lml/min ;进样口温度220°C ;检测器温度240°C ;分流进样，分流比为5:1。通过以上方法可以得到一次蒸馏液中的莪术二酮、莪术醇、吉马酮峰面积和液相总峰面积这4个质控指标数据。以及二次蒸馏液中的莪术二酮、莪术醇、吉马酮、麝香酮峰面积和液相总峰面积这5个质控指标数据。( 3 )近红外光谱数据采集采用透射法采集上述一次蒸馏液和二次蒸馏液样品的近红外光谱，扫描次数为32，分辨率为ScnT1，光纤透射式探头光程2mm，以空气为参比，扫描光谱范围为4000"l0000cm_1 ；(4)定量模型的建立采用δθΟΟ^ΙΟΟΟΟαιΓ1波段区间的近红外数据,选择一阶导数、Savitzky-Golay平滑和数据归一化算法用于预处理近红外光谱数据。采用偏最小二乘回归(PLSR)建立近红外数据与莪术二酮、莪术醇、吉马酮、麝香酮峰面积和液相总峰面积这5个质控指标数据之间的定量校正模型。一次蒸馏过程和二次蒸馏过程独立建模。采用相关系数R、校正集均方差RMSEC和主成分数Factor优化建模参数，考察模型性能。模型对未知样品的预测效果用预测均方差RMSEP、相对偏差RSEP和相关系数R来考核。当R值接近于1，RMSEC和RMSEP值较小而且互相接近时，评价模型稳定性好、预测精准度高。当RSEP值小于10%时评价模型具有较好的预测能力，能够满足蒸馏过程实时分析的预测精度要求。以下为相关系数R、校正集均方差RMSEC、预测均方差RMSEP和相对偏差RSEP的具体计算公式
权利要求
1.一种醒脑静注射液中间产物的检测方法，其特征在于，经过以下步骤实现 (1)蒸懼液样品收集 采集多个批次的醒脑静注射液生产过程中药材蒸馏后的一次蒸馏液和二次蒸馏液样品; (2)含量测定 对第一次蒸馏液中莪术二酮、莪术醇、吉马酮各自的含量和它们的总含量测定，含量用峰面积表示，测定采用液相色谱法； 对第二次蒸馏液中莪术二酮、莪术醇、吉马酮各自的含量和它们的总含量进行测定，含量用峰面积表示，测定采用液相色谱法； 对第二次蒸馏液中麝香酮的含量进行测定，含量用峰面积表示，测定采用气相色谱法; 通过以上方法可以得到一次蒸馏液中的莪术二酮、莪术醇、吉马酮峰面积和液相总峰面积这4个质控指标数据。以及二次蒸馏液中的莪术二酮、莪术醇、吉马酮、麝香酮峰面积和液相总峰面积这5个质控指标数据； (3)近红外光谱数据采集 采用透射法采集上述一次蒸馏液和二次蒸馏液样品的近红外光谱，扫描次数为32，分辨率为8CHT1，光纤透射式探头光程2mm，以空气为参比，扫描光谱范围为^OCTlOOOOcnT1 ； (4)定量模型的建立 采用δθΟ Γ ΟΟΟΟαιΤ1波段区间的近红外数据,选择一阶导数、Savitzky-Golay平滑和数据归一化算法用于预处理近红外光谱数据，采用偏最小二乘回归建立近红外数据与莪术二酮、莪术醇、吉马酮、麝香酮和液相总峰面积这5个质控指标之间的定量校正模型，一次蒸馏过程和二次蒸馏过程独立建模， 采用相关系数R、校正集均方差RMSEC和主成分数Factor优化建模参数，考察模型性能，模型对未知样品的预测效果用预测均方差RMSEP、相对偏差RSEP和相关系数R来考核； (5)采集供试品近红外光谱数据 采集醒脑静注射液生产过程中一次蒸馏过程和二次蒸馏过程中蒸馏液样品，作为供试品，按建模样品相同近红外光谱采集参数采集供试品的近红外光谱数据，选择相同的建模波段和光谱预处理方法，把特征光谱分别输入已经建立的一次蒸馏和二次蒸馏模型，计算得到供试品中莪术二酮、莪术醇、吉马酮、麝香酮的含量。
2.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述的蒸馏液样品预处理方法为取蒸馏液样品10ml，加Iml正己烷萃取，分离正己烷层于2ml的容量瓶中，水层再加Iml正己烷充分萃取，分离正己烷层汇入容量瓶中，定容至刻度。加无水Na2SO4O. 5g，摇匀，取上清，微孔滤膜过滤，取续滤液用于气、液相色谱分析。
3.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述的液相色谱法条件为Agilent SB-C18 色谱柱(100mm*4. 6mm, I. 8um)。乙腈:0. 1%磷酸水溶液(55 :45)等度洗脱。柱温35°C，流速I. Oml/min，检测波长214nm，进样量5ul，运行时间25分钟。
4.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述的气相色谱条件为AgilentDB-624 (柱长为30m，内径为0. 25mm，膜厚度为I. 40um);柱温为210°C ;载气为氮气，流速I. lml/min ;进样口温度220°C ;检测器温度240°C ;分流进样，分流比为5 :1。
5.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述的液相总峰面积设定为5^25min之间色谱峰的峰面积之和。
6.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，其中，相关系数R、校正集均方差RMSEC、预测均方差RMSEP和相对偏差RSEP的具体计算公式
7.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于，其中，所述采集多个批次的醒脑静注射液生产过程中药材蒸馏后的一次蒸馏液和二次蒸馏液样品；是采集5-200个批次。
全文摘要
本发明涉及一种快速的醒脑静注射液中控检测方法，包括以下步骤(1)采集不同批次醒脑静注射液制备过程中的一次蒸馏液和二次蒸馏液样品；(2)采用液相色谱法测定蒸馏液样品中的莪术二酮、莪术醇、吉马酮峰面积和液相总峰面积，采用气相色谱法测定蒸馏液样品中的麝香酮峰面积；(3)蒸馏液样品近红外光谱数据采集；(4)模型的建立；(5)未知蒸馏液样品中莪术二酮、莪术醇、吉马酮、麝香酮的含量测定。
文档编号G01N21/25GK102928352SQ20121038523
公开日2013年2月13日 申请日期2012年10月11日 优先权日2012年10月11日
发明者周福康, 金叶, 朱俊峰, 甘国峰, 刘薇薇, 叶祖光 申请人:无锡济民可信山禾药业股份有限公司, 江西济民可信金水宝制药有限公司