专利名称：一种布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型属于免疫检测技术领域，特别是涉及一种布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒。
背景技术：
目前，布鲁氏菌(Brucella)是一种革兰氏阴性、细胞内寄生菌，能引起人和多种动物的急性和慢急性感染，被感染的人和动物表现为流产及不孕不育等症状。人或动物感染布鲁氏菌后，体内会产生抗布鲁氏菌抗体。因此，通过检测体液或血液中是否含有布鲁氏菌抗体便可诊断出该机体是否感染或接种过布鲁氏菌。现行的布鲁氏菌感染检测方法有I)，细菌培养法，该法需要在特殊实验中进行，且需几天的实验时间，还得由经过特殊培训的技术人员执行，不适合在一般实验室或诊所里进行。2)，酶联免疫检测(ELISA)法，该法 适合在一般实验室或诊所里进行，但检测程序复杂还需要特殊的读盘仪器，得由专业技术人员执行；不适合现场快速检测。3)，试纸条检测法，该法适合现场快速检测，但因灵敏度低且没有同时进行阳性和阴性对照，容易造成假阳性或假阴性的结果。4)虎红检测法该法虽然简单，不需要特殊仪器，但，该法检测灵敏度低，对没有经验的人很难判断试验结果是阴性还是阳性。5)荧光定量PCR检测法该法虽然检测灵敏度高，但需要特殊的仪器，还得由专业技术人员执行；不适合现场快速检测。
发明内容本实用新型为解决公知技术中存在的技术问题而提供一种布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒。本实用新型的目的是提供一种操作简单，准确快速，灵敏度高，而且又能进行阳性和阴性对照检测的现场用布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒。本实用新型布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，包括一个测试条，反应液，阳性对照液，阴性对照液、显色液和塑料吸管；所述的反应液、阳性对照液，阴性对照液、显色液是装在液滴瓶内；所述的测试条含有多个反应槽，所述的反应槽是事先经布鲁氏菌抗原包被，封闭液封闭过的；所述的反应液含有预标记的抗体能特异识别抗布鲁氏菌的抗体而不影响待测抗体与抗原结合。本实用新型布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒所采取的技术方案是—种布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特征是检测试剂盒包括测试条和液滴瓶；液滴瓶内装有反应液，阳性对照液，阴性对照液，显色液；测试条有反应槽，反应槽是经布鲁氏菌抗原包被，封闭液封闭过的；反应液含有预标记的抗体，能特异识别抗布鲁氏菌的抗体。本实用新型布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒还可以采用如下技术方案所述的布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特点是检测试剂盒有塑料吸管。所述的布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特点是布鲁氏菌抗原包括，但不局限于，灭活布鲁氏菌或布鲁氏菌蛋白。所述的布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特点是反应液含有预标记的抗体是能直接或间接产生肉眼可见颜色的标记物。所述的布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特点是标记物为碱性磷酸酶、过氧化氢酶或胶体金。所述的布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特点是显色液是反应液中的特异抗体标记酶的底物。所述的布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特点是阳性对照液含特异性抗体能识别包被在反应槽中的布鲁氏菌抗原。所述的布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特点是阴性对照液含有阴性血清；阴性血清不能识别包被在反应槽中的布鲁氏菌抗原。 本实用新型具有的优点和积极效果是布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒由于采用了本实用新型全新的技术方案，与现有技术相比，具有结构简单，使用方便，不需要仪器就能检测，检测灵敏度比免疫层析试纸条高出十倍以上等优点。本实用新型实现了在一次现场用免疫检测实验中，能同时测定样品，阳性对照和阴性对照，避免了使用免疫层析试纸条时可能隐藏的假阳性和假失效的结果(现行的免疫层析试纸条是“单份”测定试纸条，因此无法实现同时测定一组阳性和阴性的对照物)，因此，能正确地界定检测结果及有效性。

图I是本实用新型布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒结构示意图。图中，I、测试条，2、反应液，3、显色液，4、阳性对照液，5、阴性对照液。
具体实施方式
为能进一步了解本实用新型的内容、特点及功效，兹例举以下实施例，并配合附图详细说明如下参阅附图I。实施例I一种布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，包括测试条和液滴瓶；液滴瓶内装有反应液，阳性对照液，阴性对照液，显色液；测试条有反应槽，反应槽是经布鲁氏菌抗原包被，封闭液封闭过的；反应液含有预标记的抗体，能特异识别抗布鲁氏菌的抗体。显色液是反应液中的特异抗体标记酶的底物。测试条的反应槽是事先经布鲁氏菌抗原，包括但不限于灭活布鲁氏菌或布鲁氏菌蛋白(比如BLS-L7/L12重组亚单位，布鲁氏菌0抗原多糖，BP26蛋白，P39，L7/L12核蛋白，夕卜膜蛋白 0mp2, OmplO, Omp 19, Omp 16, 0mp39, 0mpl4, Omp25 和 0mp31 等)包被过的。反应液中所含标记物是能直接或间接产生肉眼可见颜色的标记物(如碱性磷酸酶，过氧化氢酶，胶体金)；所述的标记抗体可特异性地识别待测布鲁氏菌抗体。阳性对照液含特异性抗体能识别包被在反应槽中的布鲁氏菌抗原。阴性对照液含有阴性血清；阴性血清不能识别包被在反应槽中的布鲁氏菌抗原。本实施例的具体实施过程如图I所示，一种新型羊布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，包括装在塑料真空袋里的4条测试条I和装在液滴瓶里的反应液2，及显色液3，阳性对照液4及阴性对照液5各I瓶。测试条是成形塑胶条，每个测试条含有8个反应槽可用于同时测定阳性对照，阴性对照以及1-6个待测样品。反应槽是事先经灭活布鲁氏菌裂解液包被后，用2% BSA封闭液封闭过的。反应液含有过氧化氢酶标记的羊抗体探针可特异性地识别待测布鲁氏菌羊抗体而不影响其与抗原结合。阳性对照液含羊特异性抗体能识别布鲁氏菌抗原。阴性对照液含有羊阴性血清。该阴性血清不能识别包被在反应槽中布鲁氏菌抗原。显色液是过氧化氢酶的底物TMB-H202混合液。实施例2一种布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，包括一个测试条，反应液，阳性对照液，阴性对照液，显色液、洗涤液、终止液和塑料吸管；测试条含有多个反应槽，所述的反应槽是事先经布鲁氏菌抗原包被，封闭液封闭过的；反应液含有预标记的抗体能特异识别抗布鲁氏菌的抗体而不影响待测抗体与抗原结合。能够在一次现场检测实验中同时测定样品，阳性对照和阴性对照，从而能正确地界定检测结果和有效性。还可以同时测定未知浓度的样品和一组已知浓度的阳性对照和阴性对照，从而能进行定量地分析被检样品中所含布鲁氏菌抗体的浓度。布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒具体实施过程测试条制备选择具有固定形状，含有可盛装液体的多个反应槽，常温常压下化学性质稳定不与待测的样品及检测系统中的物质发生化学反应的成形板。所述的反应槽与蛋白类分子有高亲和力。用IOOmM Tris-HCl (pH8)缓冲液将布鲁氏菌抗原稀释至l_10ug/ml，取100微升(每个槽)添加于测试条的槽中，静置I小时或以上；洗槽后用150微升(每个槽)2%牛血清蛋白-PBS缓冲液封闭I小时或以上，再洗槽后，于45度。C烘干，用铝箔袋真空包装，置于冰箱备用。所述的布鲁氏菌抗原可以是单一的细菌菌株也可以是不同菌株的混合(如B. abortus 544A和B. melitensis 16M的混合)，可以是灭活布鲁氏菌或减毒细菌株也可以是布鲁氏菌蛋白亚单位(比如BLS-L7/L12重组亚单位，布鲁氏菌0抗原多糖，BP26 蛋白，P39，L7/L12 核蛋白，外膜蛋白 0mp2，OmplO, Omp 19, Omp 16, 0mp39, 0mpl4, 0mp25和 0mp31 等)。反应液制备将预先标记好的抗人、羊、牛等抗体探针(如美国哥哥伦比亚生物公司的抗体探针Probe-G、Probe-H等)，一种或多种混合,用2%牛血清蛋白-PBS缓冲液释至0. l-10ug/ml，无菌过滤后装在液滴瓶里，置于冰箱备用。所述的抗体探针标记物是能直接或间接产生肉眼可见颜色的一种标记物(如碱性磷酸酶，过氧化氢酶，胶体金)。阳性对照液制备所述的阳性对照液含特异性抗体血清能识别包被在反应槽中的布鲁氏菌抗原。将布鲁氏菌阳性血清用2%牛血清蛋白-PBS缓冲液释100-900，000倍，无菌过滤后装在液滴瓶里，置于冰箱备用。所述的特异性抗体血清可以按公知的多克隆抗体制备方法来获得。既将布鲁氏菌抗原纯化，然后与弗氏完全佐剂(CFA)(第一次免疫)或与弗氏不完全佐剂(IFA)(后续免疫)一起乳化后用于免疫接种羊或其它动物后获得的抗血清。所述的布鲁氏菌抗原可以从专门机构购得；布鲁氏菌抗原可以是灭活细菌或细菌蛋白亚单位。阴性对照液制备所述的阴性对照液含有阴性血清。该阴性血清不能识别包被在反应槽中的布鲁氏菌抗原。将没有被布鲁氏菌感染，也没有接种过布鲁氏菌疫苗的正常人或动物血清用I %牛血清蛋白-PBS缓冲液稀释100-900，000倍，无菌过滤后装在液滴瓶里，置于冰箱备用。显色液制备所述的显色液是反应液中所含抗体标记酶的底物混合液。将反应液中所含抗体标记酶的底物用适当的缓冲液稀释成工作浓度，无菌过滤后装在避光液滴瓶里，置于冰箱备用。例过氧化氢酶显色液制备将TMB溶解于用50mM朽1檬酸缓冲液(pH4. 5)，调浓度至0. 2mg/ml，再加过氧化氢至0. 03% (此TMB-过氧化氢混合液即为过氧 化氢酶显色液)，无菌过滤后装在避光液滴瓶里，置于冰箱备用。本实施例新型布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒的检测过程，包含下述几个步骤I)加样反应取一测试条，给每个反应槽作记号，如反应槽1-8 ;在各反应槽中加A 5滴反应液，再分别在反应槽I和反应槽2中加入2滴阳性对照液和阴性对照液，用不同的塑料吸管分别吸取不同待测样品，在反应槽3-8中分别滴加2滴待测样品，轻晃混匀后室温下静置5-30分钟。2)洗涤倒掉反应槽中液体并用过滤水(或自来水)冲洗反应槽5次或以上；每次冲洗后，将反应槽倒向摔在吸水纸(如卫生纸)上以除去反应槽内水珠。3)显色在每个反应槽内加入6滴显色液，轻晃测试条并观察反应槽中颜色变化，直至阳性反应槽内有清晰的颜色出现，4)结果分析比较各反应槽(阳性对照，阴性对照和各样品)的颜色深浅程度以确定该被检样品是阳性还是阴性。正常情况下，如果被检样品的颜色明显比阴性对照深，说明该被检样品为阳性；如果被检样品的颜色与阴性对照相同或更浅说明该被检样品为阴性。如果被检样品的颜色比阴性对照稍深说明该被检样品为拟似阳性。如果阳性对照的颜色与阴性对照相同或更浅说明该实验失败。本实施例具有结构简单，快捷方便，检测灵敏度高等特点，实现在一次实验中同时测定样品，阳性对照和阴性对照，从而能正确地界定检测结果和有效性。
权利要求1.一种布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特征是检测试剂盒包括测试条和液滴瓶；液滴瓶内装有反应液，阳性对照液，阴性对照液，显色液；测试条有反应槽，反应槽是经布鲁氏菌抗原包被，封闭液封闭过的。
2.根据权利要求I所述的布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特征是检测试剂盒含有塑料吸管。
3.根据权利要求I所述的布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特征是显色液是反应液中的特异抗体标记酶的底物。
专利摘要本实用新型涉及一种布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒。本实用新型属于免疫检测技术领域。一种布鲁氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特点是检测试剂盒包括测试条和液滴瓶；液滴瓶内装有反应液，阳性对照液，阴性对照液，显色液；测试条有反应槽，反应槽是经布鲁氏菌抗原包被，封闭液封闭过的；反应液含有预标记的抗体，能特异识别抗布鲁氏菌的抗体。本实用新型具有结构简单，快捷方便，现场操作，准确快速，检测灵敏度高，实现在一次实验中同时测定样品、阳性对照和阴性对照，从而能正确地界定检测结果和有效性等优点。
文档编号G01N33/569GK202548133SQ201220125288
公开日2012年11月21日 申请日期2012年3月29日 优先权日2012年3月29日
发明者邹潮 申请人:哈德逊(天津)生物技术有限责任公司