专利名称：一种检测皮寒药药材质量的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测皮寒药药材质量的方法，属于药物领域。
背景技术：
皮寒药为四川攀西地区安宁河流域治疗感冒的民间草药，当地百姓又称其为“皮伤寒”、“鸡大腿”，来源于豆科米ロ袋属植物川滇米ロ袋Gueldenstaedtia de lavayiFranch.的干燥全草，全草入药，四季可采；性寒，味辛苦，清热解毒、镇痛。“皮寒药”ー词始见于《西昌中草药》，在该书中称其来源于蝶形花科米ロ袋属植物康滇米ロ袋Amblytropsisde lavayi (Fr. )C. Y. Wu的全草。康滇米ロ袋，即为《中国植物志》收载的川滇米ロ袋Gueldenstaedtia de lavayi Franch.。但是,皮寒药与《中药大辞典》及中医院校中药学教材所载的米ロ袋Gueldenstaedtia multiflora Bgun.不是同一植物。迄今，国内外对皮寒药的研究报道较少，文献记载也不够详尽。在对皮寒药治疗感冒的研究上，何德昭总结和验证了四川省凉山彝族自治州民间使用“皮寒药”——即康滇米ロ袋治疗感冒的经验，用皮寒药加陈皮治疗符合感冒诊断和感冒患者72例，观察其临床疗效，结果痊愈46例，占63. 89%，显效21例，占29. 17%，有效5例，占6. 94% (何德昭，凉山州民间草药“皮寒药”加陈皮治疗感冒72例，成都中医药大学学报，2004年27卷3期)。目前，还未见对皮寒药中有效成分的报道，也未见对皮寒药的质量检测方法。

发明内容
本发明的目的在于提供一种检测皮寒药药材质量的方法。本发明提供了一种检测皮寒药药材质量的方法，它是同时以芒柄花素、高丽槐素为指标成分进行含量測定，它包括如下步骤(I)取皮寒药药材，加水或有机溶剂提取后，制备得到供试品溶液；(2)取芒柄花素、高丽槐素对照品，制备成对照品溶液；(3)分别将供试品溶液、对照品溶液注入液相色谱仪中，以甲醇水=68-72 28-32V/V为流动相，在305-315nm紫外波长下，通过反相高效液相色谱法进行測定，即得皮寒药药材中芒柄花素、高丽槐素的含量。进ー步地，步骤(I)中，以こ酸こ酷、甲醇或95%こ醇为提取溶剂进行提取；步骤(3)中，具体色谱条件如下色谱柱C18键合硅胶柱；检测波长为310nm。更进ー步地，步骤(I)中，供试品溶液的具体制备方法如下取皮寒药药材，加入提取溶剂超声或回流提取后，提取液回收溶剂，再加甲醇或步骤(3)的流动相溶解，定容，即得供试品溶液。进ー步优选地，步骤(I)中，所述提取溶剂为こ酸こ酯进ー步优选地，超声提取的条件为超声功率为300W，频率为50KHz，超声时间为Ih0进ー步地，步骤(3)中，流动相为甲醇水=70 :30V/V。
其中，皮寒药药材中含有芒柄花素不低于O. 5mg/g，含有高丽槐素不低于O. Olmg/g°其中，皮寒药药材中含有芒柄花素O. 573mg/g"O. 803mg/g,含有高丽槐素
O.0124mg/g O. 0311mg/g。其中，所述的皮寒药来源于豆科米ロ袋属植物川滇米ロ袋Gueldenstaedtiadelavayi Franch.的干燥全草。本发明首次从皮寒药中分离鉴定出了芒柄花素、高丽槐素两个有效化学成分，其中，芒柄花素具有增强免疫、抗氧化的药效活性，高丽槐素具有抗菌作用，与皮寒药治疗感冒和抗菌活性相关，因此，可以将芒柄花素、高丽槐素的两者的含量作为皮寒药质量控制的指标。本发明对皮寒药的检测方法中，通过对流动相等色谱条件的筛选，使得芒柄花素、 高丽槐素色谱峰的分离度良好，同吋，该测定方法重复性好，稳定可靠，适用于对皮寒药中芒柄花素、高丽槐素进行含量測定，且实验表明，经本发明方法检测合格的皮寒药药材，其药效活性良好，充分说明本发明检测方法有利于实现对皮寒药药材的质量控制。


图I芒柄花素对照品色谱2高丽槐素对照品色谱3供试品溶液色谱图
具体实施例方式以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进ー步的详细说明。但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。实施例I皮寒药中的化学成分鉴定I仪器、试剂超导高分辨核磁共振谱仪BrukerAvance 600 probe: 13C-1H DUL TE:300K高分辨质谱仪MicromassZabspec柱层析填料硅胶H (200 300目)，青岛海洋化工厂；层析硅胶版HPTLC板，青岛海洋化工厂；薄层色谱(TLC)硅胶硅胶G、硅胶GF-254，青岛海洋化工厂；色谱溶剂系统石油醚丙酮(不同比例)；氯仿丙酮(不同比例)；ニ氯甲烷甲醇(不同比例)；ニ氯甲烷こ酸こ酯(不同比例)；TLC显色剂10%硫酸こ醇液；碘蒸气；紫外灯(254nm、365nm)；所用溶剂均为分析纯，由成都市科龙化工试剂厂生产。2植物材料皮寒药全草于2008年4月采自凉山州冕宁县漫水湾镇，经成都中医药大学药学院蒋桂华教授鉴定，为豆科米ロ袋属植物川滇米ロ袋Gueldenstaedtia de lavayi Franch.的干燥全草。植物标本现存于成都中医药大学药学院标本馆。
3化学成分的提取分离皮寒药干燥全草12kg，切成小段，水煎3次(药材10倍量水/次，30min /次)，合并煎液，浓缩至30し水提液分次(每次2000ml)置于分液漏斗(5000ml)中，用こ酸こ酯2000ml/次萃取数次，合并こ酸こ酯萃取液，以旋转蒸发仪减压浓缩，减压回收溶剂至浸膏状，转移至已恒重的蒸发皿中，再置减压干燥器中(50°C)烘至干粉状，称重得こ酸こ酯部位干粉重64. lg。干粉低温保存，待柱层析分离使用。萃取后的水相残留液保留，待正丁醇萃取用。こ酸こ酯部位(64. Ig)，以硅胶柱层析初歩分离，2500g(200_300目)硅胶装柱(直径 10cm，长度 80cm)，依次用ニ氯甲烷-甲醇(1:0,20:1,15:1,10:1,7:1,5:1,2:1)梯度洗脱，收集洗脱液，共收集流分243份，其中，ニ氯甲烷-甲醇I :0为1-49份、ニ氯甲烷-甲醇20:1为50-97份、ニ氯甲烷-甲醇15:1为98-159份、ニ氯甲烷-甲醇7:1为160-243份，每份为500ml，通过TLC检测合并相同流分，共得以下流分； (I)收集50-84号流分(18. 4g)，薄层硅胶G拌样后，经过反复硅胶常压柱(直径2. 5cm,长度35cm，薄层硅胶G)快速层析，石油醚-丙酮6 :1进行梯度洗脱，合并各流分后，再经葡聚糖凝胶柱Sephadex G-25 (50 — 100目)2. 6*80cm层析，以甲醇冲洗,收集流分5ml/份，共收集流份25份，合并10-21号流分，回收溶剂后，以甲醇重結晶，即得化合物V (20. 4mg)；(2)收集85-90号流分(4. 9g)，薄层硅胶G拌样后，经过反复硅胶常压柱(直径
I.5cm，长度25cm，薄层硅胶G)快速层析，ニ氯甲烷-甲醇(20 :1 10 :1)进行梯度洗脱，其中，ニ氯甲烷-甲醇20:1为1-22份；ニ氯甲烷-甲醇16:1为23-44份；ニ氯甲烷-甲醇14:1为45-51份；ニ氯甲烷-甲醇12:1为52-76份；ニ氯甲烷-甲醇10:1为77-90份，合并16 :1的流分，回收溶剂后結晶，过滤，滤得固体物经こ酸こ酯纯化得到化合物VDI(25mg)。2. 6化合物的结构鉴定经理化常数測定和光谱分析，鉴定出上述2个化合物的结构。化合物V无色针晶(甲醇、吡啶)；FeCl3显色反应呈阳性，紫外灯(254nm)下为紫红色暗斑，mpl80 181°C ；IHNMR: δ 7. 53 (1Η, d, J=8. 82Hz, H_l)，6. 90 (1H, dd, J=8. 46，2. 16Hz, H_2)，6. 84 (1H，s, H-7) ; δ 6. 83 (1H, d, J=2. 22Hz, H_4)，6. 64 (1H, s, H_10), 5. 91 (1H, d, J=L 14Hz, -0CH20_aH) ;5. 88 (1H, d, J=L 14Hz, -0CH20_bH)，5. 57 (1H, d, J=7. 32Hz, H-Ila, 4. 25 (1H, dd, J=Il. 04，4. 74Hz, H-6 β )，3. 77 (1H, t, J=IO. 62Hz, H_6 a )，3. 48 (1H, m, H_6a).13C NMR: δ 40. 5 (C_6a)，66. 5 (C_6)，79. 0 (C-lla)，93. 7 (C-10)，101. 5 (-0CH2-0)
，104. 0(C-4), 105. 3(C-7), 110. 7(C_2), 111. 8 (C-Ilb), 118. 7 (C_6b)，132. 5 (C-I), 141. 9(C-8)，148. 3 (C-9)，154. 7 (C-IOa)，157. 3 (C_4a)，160. 4 (C_3)。MS:m/z 307[M+Na], m/z :285[M+H]。根据上述信息确定该化合物为已知化合物高I 槐素(马卡因，maackiain)。其结构见式I。
权利要求
1.一种检测皮寒药药材质量的方法，其特征在于它是同时以芒柄花素、高丽槐素为指标成分进行含量測定，它包括如下步骤 (1)取皮寒药药材，加水或有机溶剂提取后，制备得到供试品溶液； (2)取芒柄花素、高丽槐素对照品，制备成对照品溶液； (3)分别将供试品溶液、对照品溶液注入液相色谱仪中，以甲醇水=68-7228-32V/V为流动相，在305-315nm紫外波长下，通过反相高效液相色谱法进行測定，即得皮寒药药材中芒柄花素、高丽槐素的含量。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于 步骤(I)中，以こ酸こ酷、甲醇或95%こ醇为提取溶剂进行提取； 步骤(3)中，具体色谱条件如下色谱柱C18键合硅胶柱；检测波长为310nm。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(I)中，供试品溶液的具体制备方法如下 取皮寒药药材，加入提取溶剂超声或回流提取后，提取液回收溶剤，再加甲醇或步骤(3)的流动相溶解，定容，即得供试品溶液。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤(I)中，所述提取溶剂为こ酸こ酷。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于超声提取的条件为超声功率为300W，频率为50KHz，超声时间为Ih。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(3)中，流动相为甲醇水=7030V/V。
7.根据权利要求I所述的方法，其特征在于皮寒药药材中含有芒柄花素不低于O. 5mg/g,含有高丽槐素不低于O. 01mg/go
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于皮寒药药材中含有芒柄花素O.573mg/g O. 803mg/g,含有高丽槐素 O. 0124mg/g O. 0311mg/g。
9.根据权利要求1-8任意一项所述的方法，其特征在于所述的皮寒药来源于豆科米ロ袋属植物川漠米ロ袋Gueldenstaedtia delavayi Franch.的干燥全草。
全文摘要
本发明公开了一种检测皮寒药药材质量的方法。本发明对皮寒药的检测方法中，通过对流动相等色谱条件的筛选，使得芒柄花素、高丽槐素色谱峰的分离度良好，同时，该测定方法重复性好，稳定可靠，适用于对皮寒药中芒柄花素、高丽槐素进行含量测定，且实验表明，经本发明方法检测合格的皮寒药药材，其药效活性良好，充分说明本发明检测方法有利于实现对皮寒药药材的质量控制。
文档编号G01N30/88GK102645497SQ20121015086
公开日2012年8月22日 申请日期2012年5月16日 优先权日2011年5月16日
发明者于忠强, 兰群, 宋岚, 彭腾, 杨莎, 蒋桂华, 赵芙蓉, 邓晶晶, 陈佳妮, 陈孝雨 申请人:成都中医药大学