专利名称：农产品镉污染快速检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型属于化学技术领域，涉及ー种检测试剂盒，特别涉及ー种农产品镉污染快速检测试剂盒。
背景技术：
目前公认的农产品重金属的污染的检测中主要采用检测重金属的方法，如原子吸收光谱法(AAS)，原子荧光光度法(AFS)，电感藕合等离子体质谱(ICP-MS)分析技术，电感藕合等离体原子发射光谱(ICP-AES)，高效液相色谱法，但均需要进行长时的样品前处理，耗费大量的氧化性强酸或电，检测方法中所用到的仪器也需要有专业人员操作，且仪器昂贵，日常维护费用高，此外还具有上述的各种局限性，不适用于快速、大量样本的检测。 大量研究表明，MT也可作为重金属污染物、潜在重金属污染暴露和毒性效应早期预警的主要生物标志物，以及作为环境中重金属污染胁迫与风险评价以及监测的分子生态毒理学诊断指标，植物组织中MT的检测至今没有统ー的标准，已有的MT的检测方法主要金属亲和分析法，电化学法，色谱分析法，蛋白质分析法/免疫法，这些检测方法原理较为复杂，对人员技术的要求也相对较高。且仪器的维护费用昂贵，操作过程周期长，不适合批量检测。而酶联免疫分析(ELISA)测定也仅限于应用动物MT抗体检测动物血液及动物组织中MT的含量且对低MT浓度的体液測定有困难。

实用新型内容为了解决现有技术存在的不足，本实用新型提供一种农产品镉污染快速检测试剂盒，采用免疫学方法建立了快速、高效的重金属残留检测方法，并制定试剂盒的制备、检验及检测标准。其技术方案为一种农产品镉污染快速检测试剂盒，包括盒体、试剂瓶、框格，试剂瓶分别嵌于框格的每个单格内，所述的试剂瓶为4个标准MT试剂瓶、抗MT IgG试剂瓶、AP-羊抗兔IgG试剂瓶和NBT/BCIP试剂瓶，还包括杂交盒、硝酸纤维素膜，试剂盒内部设有PVC隔板7、底部设有生物冰袋8。优选地，所述标准MT试剂瓶I中试剂的浓度为50 μ g/mL。优选地，所述抗MT IgG试剂瓶中试剂的浓度为lmg/mL。优选地，所述AP-羊抗兔IgG试剂瓶中试剂的浓度为I. 5mg/mL。优选地，所述硝酸纤维素膜的尺寸为2cmX5cm。进ー步优选，所述硝酸纤维素膜的数量为5张。本实用新型农产品镉污染快速检测试剂盒的使用过程具体如下取Ig被检样品，液氮研磨,加O. 01moL/L,pH 8. O7Tris-HCl 4mL充分研磨后，离心并取上清液，4°C保藏；将植物MT提取液进行5-125倍稀释，标准MT稀释为50、30、10、1、0· 5,0. 2,0. Ing/μ L ；[0014]将稀释后的各种溶液分别吸取IuL点于硝酸纤维素膜上，并且设定阳性及空白对昭.点样后的硝酸纤维素膜加入封闭剂、温育并吸去封闭剂后，加入I 800倍稀释的一抗即抗MT IgG ；用洗涤液振洗3次X5min，后再加入I : 1000倍稀释的AP-羊抗兔IgG ；倒入NBT/BCIP液经过I : 200倍稀释，约3ml，室温避光孵育5_30分钟，用蒸馏水洗涤1-2次终止显色反应。本实用新型的原理MT具有很强的可诱导性，由于Cd诱导MT的能力强，环境中Cd
浓度与植物MT含量在一定范围内成正相关，免疫法可通过蛋白质含量測定来计算MT浓度，用Cd诱导的MT免疫家兔产生抗体，用碱性磷酸酶标记IgG，对MT进行免疫印迹检测，方法简单准确，标记的IgG最低检出量为Ing/mL。本实用新型的有益效果与传统检测方法相比，本实用新型农产品镉污染快速检测试剂盒的技术方案，第一次用动物免疫的方法来检测植物MT含量，具有省时、省力、灵敏、费用低廉、便于携带、易于现场操作等优点，适宜推广应用。

图I是本实用新型的结构示意图；图2是本实用新型实验操作结果分析图。
具体实施方式
以下结合附图与具体实施方式
对本实用新型作进ー步详细地说明。參见图1，一种农产品镉污染快速检测试剂盒，包括盒体、试剂瓶、框格，试剂瓶分别嵌于框格的每个单格内，所述的试剂瓶为4个标准MT试剂瓶I、抗MT IgG试剂瓶2、AP-羊抗兔IgG试剂瓶3和NBT/BCIP试剂瓶6，还包括杂交盒4、硝酸纤维素膜5，试剂盒内部设有PVC隔板7、底部设有生物冰袋8。所述标准MT试剂瓶I中试剂的浓度为50 μ g/mL。所述抗MT IgG试剂瓶2中试剂的浓度为lmg/mL。所述AP-羊抗兔IgG试剂瓶3中试剂的浓度为I. 5mg/mL。所述硝酸纤维素膜5的尺寸为2cmX 5cm。所述硝酸纤维素膜5的数量为5张。本实用新型的使用者需自备的试剂和物品研钵，用液氮研磨效果更好提取液0.01moL/L, pH 8. O, Tris-HCl封闭液5%的脱脂奶粉洗涤液0.OlmoL ·じ1 pH 7. 4 Tris-HCL 缓冲液，内含 O. 05% Tween-20显色缓冲液0.IM Tris HCL(含 O. IM NaCL, 50mM MgCL2) pH 9. 5。一抗稀释液0. 01M, PH7. 2-7. 4PBS磷酸盐缓冲液AP-羊抗兔稀释液0. 01M, PH7. 2-7. 4PBS磷酸盐缓冲液台式小型离心机研钵[0036]使用前准备样本的采集与处理随机采取各植物全株，先用自来水冲洗，然后用蒸馏水冲洗，凉干后，称取样本叶片 Ig,用液氮研磨，再加 O. 01moL/L, pH 8. O, Tris-HCL 4mL 充分研磨后,4°C, 4000r/min 离心20min,取上清液,放在4°C冰箱中保藏。本实用新型的具体操作步骤用O. OlmoL ·じ1 pH 8. 6 Tris-HCL按情况分别将每种植物MT提取液进行5-125倍稀释，将稀释后的各种溶液分别吸取IuL点于硝酸纤维素膜上，并且设定阴性、阳性及空白对照；空白，即在加样品时硝酸纤维素膜上只加入样品稀释液，其他步骤相同，目的是去掉硝酸纤维素膜本底，结果是无色。阳性对照，既在加样品时，加入标准品MT，其它步骤不变，结果是阳性。将加样后的硝酸纤维素膜加入封闭剂，在37°C杂交袋中温育30min ;吸去封闭剂(勿冲洗)后加入抗MT IgG，37°C60min杂交袋中温育；用洗涤液0.01mOL·じ1 PH7. 4Tris-Hcl 缓冲液，内含 O. 05% Tween-20，洗涤 3X 5min ;加入 AP-羊抗兔 IgG，37°C 30min 杂交袋中温育，洗涤同上；加入NBT/BCIP液，室温避光孵育5_30分钟或更长时间，可长达24小时，，直至显色至预期深度，用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应MT含量的測定根据阳性对照(标准MT含量)在NC膜上的图谱和稀释倍数，可计算出各种植物MT的大致含量。实验结果分析，如图2所示。结果计算样品IMT 含量=O. 2ng* 稀释倍数(1)*4000UL = O. 8ng/g样品2MT 含量=O. 2ng* 稀释倍数(5)*4000UL = 4ng/g(污染)样品3MT 含量=O. 2ng* 稀释倍数(10)*4000UL = 8ng/g(污染)样品4MT 含量=O. 2ng* 稀释倍数(50)*4000UL = 40ng/g(污染)样品5MT 含量=O. 2ng* 稀释倍数(1)*4000UL = O. 8ng/g样品6MT 含量=O. 2ng* 稀释倍数(10)*4000UL = 8ng/g(污染)样品7MT 含量=O. 2ng* 稀释倍数(5)*4000UL = 4ng/g(污染)样品8MT 含量=O. 2ng* 稀释倍数(1)*4000UL = O. 8ng/g由上计算可知，样品2、3、4、6、7为污染样品，其样品中MT含量> 2· 388μ g/g。以上所述，仅为本实用新型较佳的具体实施方式
，本实用新型的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本实用新型披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本实用新型的保护范围内。
权利要求1.一种农产品镉污染快速检测试剂盒，包括盒体、试剂瓶、框格，试剂瓶分别嵌于框格的每个单格内，其特征在于，所述的试剂瓶为4个标准MT试剂瓶(I)、抗MT IgG试剂瓶(2)、AP-羊抗兔IgG试剂瓶(3)和NBT/BCIP试剂瓶￠)，还包括杂交盒(4)、硝酸纤维素膜(5)，试剂盒内部设有PVC隔板(7)、底部设有生物冰袋(8)。
2.根据权利要求I所述的农产品镉污染快速检测试剂盒，其特征在于，所述标准MT试剂瓶⑴中试剂的浓度为50μ g/mL。
3.根据权利要求I所述的农产品镉污染快速检测试剂盒，其特征在于，所述抗MTIgG试剂瓶(2)中试剂的浓度为lmg/mL。
4.根据权利要求I所述的农产品镉污染快速检测试剂盒，其特征在于，所述AP-羊抗兔IgG试剂瓶(3)中试剂的浓度为1.5mg/mL。
5.根据权利要求I所述的农产品镉污染快速检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜(5)的尺寸为2cmX5cm。
6.根据权利要求4所述的农产品镉污染快速检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜(5)的数量为5张。
专利摘要本实用新型公开了一种农产品镉污染快速检测试剂盒，包括盒体、试剂瓶、框格，试剂瓶分别嵌于框格的每个单格内，所述的试剂瓶为4个标准MT试剂瓶(1)、抗MT IgG试剂瓶(2)、AP-羊抗兔IgG试剂瓶(3)和NBT/BCIP试剂瓶(6)，还包括杂交盒(4)、硝酸纤维素膜(5)，试剂盒内部设有PVC隔板(7)、底部设有生物冰袋(8)。本实用新型具有省时、省力、灵敏、费用低廉、便于携带、易于现场操作等优点，适宜推广应用。
文档编号G01N33/53GK202471706SQ20112053325
公开日2012年10月3日 申请日期2011年12月20日 优先权日2011年12月20日
发明者安建平, 李一婧, 焦成瑾, 王廷璞, 袁毅君, 赵菲佚, 邹亚丽, 马伟超 申请人:天水师范学院