专利名称：一种福建药材马蓝的hplc指纹图谱构建方法
技术领域：
本发明属于中药成分检测领域。本发明涉及中药鉴别和质量控制的方法，更具体地涉及一种福建马蓝的HPLC指纹图谱构建方法。
背景技术：
马嚴Baphicacanthuscusia (Nees) Bremek.为爵床科(Acanthaceae)植物，叶经加工成干叶入药称为大青叶，茎、叶加工成一种深蓝色的粉末入药称为青黛，根可以加工成南板蓝根。主要分布于中国华南和西南地区，是我国常用中药，而且是福建特有的地道性中药材之一。中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。世界卫生组织(WHO)、美国食品与药物管理局(FDA)以及中国食品药品监督管理局(SFDA)等机构已经把指纹图谱作为一种可靠的质量控制方法。中药指纹图谱越来越多的应用于中草药的鉴别和质量控制，而HPLC指纹图谱是应用最为广泛的方法之一。

发明内容
本发明的目的在于构建一种福建药材马蓝HPLC指纹图谱的方法，以解决福建马蓝药材鉴别和质量控制的问题。本发明采取的技术方案如下
一种福建药材马蓝HPLC指纹图谱的方法，HPLC色谱条件为WatersC18柱5μπι，4. 6 X 250mm,流速0. 8mL/min,乙腈A-0. 05% (V/V)磷酸溶液B梯度洗脱，洗脱程序O-lOmin, A 10% -30% ；10-25min,A 30%-40% ；25-30min,A 40%—50% ；30-50min, A 50%—65% ；50-80min, A 65%—85% ；80-85min, A :85% — 90%，检测波长 254nm，柱温25°C，进样量20μ L，在此条件下分析供试品溶液，得到了福建马蓝的特征指纹图谱。所述供试品溶液的制备如下精确称取福建马蓝的叶、茎或根样品O. 5g，用三氯甲烷提取至提取液无色，挥干三氯甲烷，提取物用甲醇溶解，定容，过O. 45 μ m的微孔滤膜，滤液作为供试品溶液。结果表明本方法精密度良好(相对保留时间和相对峰面积分别为O. 03% O. 23%、
O.9% I. 89%),重复性良好(相对保留时间和相对峰面积分别为O. 09% O. 52%、I. 26%
2.45%)，稳定性良好(相对保留时间和相对峰面积分别为O. 05% O. 52%,O. 94% 2. 98%)。本发明具有操作简单、精确可靠、重复性好等优点。可以用于福建马蓝药材的鉴定和质量控制。


图I为靛蓝、靛玉红、色胺酮标样对照品图谱。图2为LX马蓝叶HPLC指纹图谱。、
图3为不同产地马蓝叶HPLC指纹图谱。图4为XZ马蓝茎HPLC指纹图谱。图5为不同产地马蓝茎HPLC指纹图谱。图6为XZ马蓝根HPLC指纹图谱。图7为不同产地马蓝根HPLC指纹图谱。
具体实施例方式本发明使用的高效液相仪为岛津LC-10A，SPD-10A紫外检测器，色谱柱为WatersC18 柱(5 μ m, 4. 6X250mm)。原料来源14种福建不同产地马蓝种质资源分别为XZ—仙游栽培、BY—本地野生、PT—莆田大洋、NJ—南靖和溪、FS—福州森林公园、LZ—龙岩紫金山、MH—闽侯善恩园、LX一龙岩新罗、YC一永泰赤壁、BZ一福州栽培、XB一仙游榜头、YQ一永泰青z 山、ZP—潭平、NP—南平茫荡山。对照品分别为靛蓝标准品(中国药品生物制品鉴定所)，靛玉红标准品(中国药品生物制品鉴定所)，色胺酮标准品(中国药品生物制品鉴定所)
本发明的优选实施例如下
提取分别精确称取福建14个产地马蓝叶片或茎或根的粉末各O. 5g，置50mL带塞锥形瓶中，加入氯仿40mL,超声(40°C、100HZ下)提取40min,过滤,残洛再加氯仿IOmL萃取，重复2次提至无色，将氯仿液合并。用旋转蒸发仪抽干氯仿。所得提取物加甲醇超声溶解，定容到IOmL,过O. 45 μ m的滤膜，备用。HPLC 条件WatersC18 柱(5μ m, 4. 6X250mm),流速:0· 8mL/min,乙臆(A)-O. 05%磷酸(B)梯度洗脱(洗脱程序0-10min, A 10% -30% ； 10-25min, A 30%-40% ;25_30min，A 40%—50% ；30-50min, A 50%—65% ;50_80min, A 65%—85% ;80_85min, A 85%—90% ),检测波长254nm，柱温25°C，进样量20yL，检测时间为85min。对得到的HPLC色谱图，用中药色谱相似度评价系统(2004A版)计算软件进行分析，标定共有峰，得到福建马蓝的特征图谱。得到的结果如图I到图7，分别建立了福建马蓝叶、茎和根的HPLC指纹图谱，分别标定了马蓝叶指纹图谱的16个共有峰(其中9号峰为色胺酮、11号峰为靛蓝、12号峰为靛玉红);标定了茎的13个共有峰(其中8号峰为色胺酮，10号峰为靛蓝，11号峰为靛玉红);标定了根的11个共有峰(其中7号峰为靛蓝，8号峰为靛玉红比)，得到了福建马蓝的特征指纹图谱，可以对福建马蓝药材进行鉴别和质量控制。叶、茎和根的共有峰保留时间见表I。表I叶、茎和根共有峰保留时间(min)
权利要求
1.一种福建马蓝的HPLC指纹图谱构建方法，其特征在于HPLC色谱条件为WatersC18 柱5 μ m,4. 6X250mm,流速:0. 8mL/min,乙腈 A-0. 05% 磷酸 B 梯度洗脱，洗脱程序0-10min，A :10% -30% ; 10_25min，A 30%-40% ；25-30min, A40%—50% ；30-50min,A 50%—65% ；50-80min, A 65%—85% ；80-85min, A :85% — 90%，检测波长 254nm，柱温25°C，进样量20 μ L，在此条件下分析供试品溶液，得到了福建马蓝的特征指纹图谱。
2.根据权利要求I所述的福建马蓝的HPLC指纹图谱构建方法，其特征在于所述供试品溶液的制备如下精确称取福建马蓝的叶、茎或根样品O. 5g，用三氯甲烷提取至提取液无色，挥干三氯甲烷，提取物用甲醇溶解，定容，过O. 45 μ m的微孔滤膜，滤液作为供试品溶液。
全文摘要
本发明提供了一种福建药材马蓝的HPLC指纹图谱构建方法，属于中药成分检测领域，以解决福建马蓝药材鉴别和质量控制的问题。所述方法包括HPLC色谱条件为WatersC18柱5μm，4.6×250mm，流速0.8mL/min，乙腈A-0.05%磷酸B梯度洗脱，洗脱程序0-10min，A10%-30%；10-25min，A30%-40%；25-30min，A40%—50%；30-50min，A50%—65%；50-80min，A65%—85%；80-85min，A85%—90%，检测波长254nm，柱温25℃，进样量20μL，在此条件下分析供试品溶液，得到了福建马蓝的特征指纹图谱。本发明具有操作简单、精确可靠、重复性好等优点。
文档编号G01N30/02GK102628838SQ20121012557
公开日2012年8月8日 申请日期2012年4月26日 优先权日2012年4月26日
发明者周以飞, 朱秋强, 潘大仁, 王少铭 申请人:福建农林大学