专利名称：百日咳IgG抗体检测卡的制作方法
技术领域：
本实用新型属于免疫检测技术领域，特别涉及一种用于快速检测接种百日咳苗后人体内是否产生抗百日咳杆菌的IgG抗体的百日咳IgG抗体检测卡。
背景技术：
百日咳疫苗是用百日咳杆菌类毒素(Pertussis Toxin，PT)和百日咳杆菌的一种表面蛋白丝状血凝素(Filamentous Hemagglutinin, FHA)制成的无细胞组分疫苗,用于预
防百曰咳。目前用于检测接种百日咳疫苗后人体内是否产生抗百日咳杆菌IgG抗体多采用酶联免疫法(市售试剂盒，百日咳IgG抗体测定试剂盒(酶联免疫法))，该方法是将免疫接种百日咳疫苗的人血清进行稀释后，加到包被百日咳组分抗原的微孔板中，37°C孵育I小时后，洗涤数次，加抗人IgG酶标记物，再经过洗涤、加底物显色，根据样品OD值的大小，判断人血清中是否含有抗百日咳杆菌的IgG抗体。该方法存在的技术问题1、操作繁琐试验步骤较多。待检血清或血浆需进行稀释，前两个反应步骤需进行数次洗涤，最后酶标仪读取OD值；2、耗时长试验过程中三个步骤(加样品、酶标记物、底物)均需37°C孵育，加上洗涤时间，整个试验需要耗时3小时。

实用新型内容本实用新型所要解决的技术问题是提供一种百日咳IgG抗体检测卡，它能快速检测接种百日咳疫苗后人体内是否产生抗百日咳的IgG抗体，检测操作简便，生产成本低。本实用新型解决上述技术问题所采用的技术方案是一种百日咳IgG抗体检测卡，包括衬垫、样品垫、玻璃纤维垫、层析膜和吸收垫；所述样品垫、玻璃纤维垫、层析膜和吸收垫以水平方向顺序相接并固定在所述衬垫上；并且所述玻璃纤维垫上喷涂有带标记的彩色胶乳颗粒；所述层析膜上设置试验线，所述试验线是将百日咳杆菌毒素或者百日咳杆菌丝状血凝素固定在层析膜上形成。作为优选，所述层析膜上还设置对照线，并且所述试验线位于所述样品垫和所述对照线之间。作为优选，所述衬垫的主体为塑料垫。作为优选，所述样品垫长度为20mm,宽度为5mm ;所述玻璃纤维垫长度为IOmm,宽度为5mm ;所述层析膜长度为25mm,宽度为5mm ;所述吸收垫长度为20mm,宽度为5mm ;所述衬垫长度为30mm,宽度为5mm,厚度为1mm。上述技术方案中，所述样品垫和吸收垫均采用具有吸水性能的材料制备而成，可以均为市售的滤纸制成，优选吸水性能较强的定性滤纸，这样利于检测，增加检测速度。所述层析膜为市售硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜又称NC膜，在胶体金试纸中用做C/T线的承载体，同时也是免疫反应的发生处。米用的硝酸纤维素膜型号135s、170s或180s (以秒为单位的定义每4cm膜，水的层析时间是多少秒)。玻璃纤维垫是玻璃纤维制品的一种。玻璃纤维是一种性能优异的无机非金属材料。英文原名为Glassfiber，成分为二氧化硅、氧化铝、氧化钙、氧化硼、氧化镁、氧化钠等。它是以玻璃球或废旧玻璃为原料经高温熔制、拉丝、络纱、织布等工艺，最后形成各类产品，玻璃纤维单丝直径从几个微米到二十几个微米，相当于一根头发丝的1/20-1/50，每束纤维原丝都有数百根甚至上千根单丝组成，通常作为复材料中的增强材料、电绝缘材料和绝热保温材料，电路基板等，广泛用于国民经济各个领域。所述玻璃纤维垫上均匀喷涂有带标记的彩色胶乳颗粒，彩色胶乳颗粒一般采用红色的胶乳颗粒，这样显色明显；胶乳颗粒上进行标记的方法在本领域为常规技术手段，发明人在此不做赘述。彩色胶乳颗粒带的标记可以与人血清中的IgG抗体结合，试验线上是抗原。作为优选,所述玻璃纤维垫为喷涂有带金黄色葡萄球菌A蛋白(StaphylococalProtein A, SPA)标记的彩色胶乳颗粒的玻璃纤维垫。金黄色葡萄球菌A蛋白是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。由于SPA能与人、鼠、兔等的IgG的Fe端结合，成为免疫学上一种极为有用的工具。所述对照线是将SPA固定在层析膜上形成的对照线。所述对照线与标记物对应。作为优选，所述玻璃纤维垫为喷涂有带鼠抗人IgG单克隆抗体标记的彩色胶乳颗粒的玻璃纤维垫。鼠抗人IgG单克隆抗体是一种较好的标记物。所述对照线是将羊抗鼠IgG抗体固定在层析膜上形成的对照线。羊抗鼠IgG抗体又称羊抗鼠IgG多克隆抗体。羊抗鼠IgG (免疫球蛋白)多克隆抗体在胶体金法快速抗体诊断产品中用来固定于硝酸纤维素膜上，与胶体金标记的单克隆抗体发生特异性免疫反应并显示一定的颜色，形成对照线进行免疫诊断。本实用新型的检测原理是本实用新型的检测是在层析作用的推动下完成的。当血清样品被添加至样品垫上后，通过层析作用到达玻璃纤维垫，血清样品中的IgG抗体与标记的彩色胶乳颗粒结合形成结合颗粒，然后进一步至层析膜上，在层析膜的层析作用下，结合颗粒向前移动，如血清中含有抗水痘带状疱疹病毒的抗体时(即接种水痘疫苗后应产生此抗体)，与相应的试验线结合，呈现颗粒的颜色线条，未结合的颗粒会继续向前移动，与对照线结合呈现颗粒的颜色线条，即显示试验线和对照线两条颜色线；如血清中不含有抗水痘带状疱疹病毒的抗体时，颗粒与相应的试验线的抗原无法结合，试验线不显色，为结合的颗粒会继续向前移动，与对照线结合呈现颗粒的颜色线条，即只显示对照线一条颜色线。因膜层析速度较快，几分钟内带标记彩色胶乳颗粒即可移动完整个层析膜条，立刻可以判读结果，如试验线和对照线均显色，血清抗体为阳性；只有对照线一条线显色，血清抗体为阴性。综上所述，本实用新型的有益效果是(I)抗百日咳IgG抗体是接种百日咳疫苗后人体内产生的一种特异性保护抗体。人体内只有具有这种特异性保护抗体时，才能在人体接触到百日咳杆菌时将百日咳杆菌及其产生的毒素中和掉而不被感染。本实用新型百日咳IgG抗体检测卡能快速、有效的检测人接种疫苗后体内是否产生了这种特异性保护抗体。(2)本实用新型使用时，只需将待检样品用生理盐水1:1稀释，直接加到本实用新型样品垫上即可，操作十分简便；样品加到本实用新型样品垫上，10分钟肉眼即可观测检测结果，进行判定，整个检测耗时约15分钟，耗时短。(3)本实用新型所述样品垫长度为20mm，宽度为5mm ;所述玻璃纤维垫长度为IOmm,宽度为5mm ;所述层析膜长度为25mm,宽度为5mm ;所述吸收垫长度为20mm,宽度为5mm ;所述衬垫长度为30mm,宽度为5mm,厚度为1mm。这种大小规格,不仅提高本实用新型使用时的检测效率，而且方便产品包装和运输。

图1是实施例1的俯视图；图2是实施例1的剖视图。图中标记相对应的部件名称是1-样品垫，2-玻璃纤维垫，3-试验线，4-对照线，5-层析膜，6-吸收垫，7-衬垫。
具体实施方式
下面通过具体实施例，并结合附图，对本实用新型的技术方案作进一步的具体说明。实施例1如图1和2所示，一种百日咳IgG抗体检测卡，包括衬垫7，衬垫7的主体为塑料垫，塑料垫的表面涂覆有不干胶，所述衬垫7上沿水平方向依次固定具有吸水性能的样品垫I (滤纸，上海金标生物技术有限公司)、玻璃纤维垫2 (Ahlstrom8964玻纤,上海杰一生物技术有限公司，型号JY-JlOl)、层析膜5 (硝酸纤维素膜，Millipore公司，型号135s)和具有吸水性能的吸收垫6 (滤纸，上海金标生物技术有限公司)。所述玻璃纤维垫2为均匀喷涂有带SPA标记的红色胶乳颗粒(红色聚苯乙烯胶乳颗粒，上海杰一生物技术有限公司，型号PSR030N)的玻璃纤维垫，胶乳颗粒进行标记的方法为本领域公知技术，在此不作赘述。所述层析膜5上设置试验线3和对照线4，所述试验线3和对照线4平行；并且试验线3位于样品垫I和对照线3之间。所述试验线3是将灭活的纯化的百日咳杆菌毒素(兰州生物制品研究所有限责任公司)或者百日咳杆菌丝状血凝素(兰州生物制品研究所有限责任公司)固定在层析膜5上形成。所述对照线4是将SPA (市售，郑州百基生物技术有限公司)固定在层析膜5上形成。纯化百日咳杆菌毒素及百日咳杆菌丝状血凝素、SPA固定方法均为本领域公知技术，在此不作赘述。本实用新型中，所述样品垫1、玻璃纤维垫2、层析膜5和吸收垫6以水平方向顺序相接。具体地，所述样品垫1、玻璃纤维垫2、层析膜5和吸收垫6顺序相接的方式是部分重叠的，即样品垫I的尾端搭接在玻璃纤维垫2上，玻璃纤维垫2的尾端搭接在层析膜5的首端上，吸收垫6的首端搭接在层析膜5的尾端上。进一步的，本实用新型所述样品垫I长度为20mm，宽度为5mm ;所述玻璃纤维垫2长度为IOmm,宽度为5mm ;所述层析膜5长度为25mm,宽度为5mm ;所述吸收垫6长度为20mm,宽度为5mm ;所述衬垫7长度为30mm,宽度为5mm,厚度为1mm。[0032]实施例2本实施例与实施例1基本相同，其不同部分仅在于所述玻璃纤维垫2为均匀喷涂有带鼠抗人IgG单克隆抗体标记的彩色胶乳颗粒的玻璃纤维垫，所述对照线4为将羊抗鼠IgG抗体固定在层析膜5上形成。实施例3本实施例与实施例1基本相同，其不同部分仅在于所述样品垫1、玻璃纤维垫2、层析膜5和吸收垫6的顺序相接的方式是首尾连接并且没有重叠的。实施例4本实施例与实施例3基本相同，其不同部分仅在于所述玻璃纤维垫2为喷涂有带鼠抗人IgG单克隆抗体标记的彩色胶乳颗粒的玻璃纤维垫，所述对照线4为将羊抗鼠IgG抗体固定在层析膜5上形成。本实用新型使用时，只需将待检样品用生理盐水1:1稀释，直接加到本实用新型的样品垫上即可，操作十分简便；样品加到本实用新型样品垫上，10分钟肉眼即可观测检测结果，进行判定，如试验线3和对照线4均显色，血清抗体为阳性；只有对照线4 一条线显色，血清抗体为阴性。整个检测耗时约15分钟，耗时短。以上所述的实施例只是本实用新型的一种较佳的实施方案，并非对本实用新型任何形式上的限制，在不超过权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体以及改型。
权利要求1.一种百日咳IgG抗体检测卡，其特征在于，包括衬垫(7)、样品垫(I)、玻璃纤维垫(2)、层析膜(5)和吸收垫￠);所述样品垫(I)、玻璃纤维垫(2)、层析膜(5)和吸收垫(6)以水平方向顺序相接并固定在所述衬垫(7)上；并且所述玻璃纤维垫(2)上喷涂有带标记的彩色胶乳颗粒；所述层析膜(5)上设置试验线(3)，所述试验线(3)是将百日咳杆菌毒素或者百日咳杆菌丝状血凝素固定在层析膜(5)上形成。
2.根据权利要求1所述的百日咳IgG抗体检测卡，其特征在于，所述层析膜(5)上还设置对照线(4)，并且所述试验线(3)位于所述样品垫(I)和所述对照线(4)之间。
3.根据权利要求1或2所述的百日咳IgG抗体检测卡，其特征在于，所述衬垫(7)的主体为塑料垫。
4.根据权利要求3所述的百日咳IgG抗体检测卡，其特征在于，所述样品垫(I)长度为20mm,宽度为5mm ;所述玻璃纤维垫(2)长度为IOmm,宽度为5mm ;所述层析膜(5)长度为25mm,宽度为5mm ;所述吸收垫(6)长度为20mm,宽度为5mm ;所述衬垫(7)长度为30mm,宽度为5mm,厚度为1mm。
5.根据权利要求3所述的百日咳IgG抗体检测卡，其特征在于，所述玻璃纤维垫(2)为喷涂有带SPA标记的彩色胶乳颗粒的玻璃纤维垫(2)，所述对照线(4)为SPA固定在层析膜(5)上形成的对照线。
6.根据权利要求3所述的百日咳IgG抗体检测卡，其特征在于，所述玻璃纤维垫(2)为喷涂有带鼠抗人IgG单克隆抗体标记的彩色胶乳颗粒的玻璃纤维垫(2)，所述对照线(4)为羊抗鼠IgG抗体固定在层析膜(5)上形成的对照线(4)。
专利摘要本实用新型公开了一种百日咳IgG抗体检测卡，包括衬垫(7)、样品垫(1)、玻璃纤维垫(2)、层析膜(5)和吸收垫(6)；所述样品垫(1)、玻璃纤维垫(2)、层析膜(5)和吸收垫(6)以水平方向顺序相接并固定在所述衬垫(7)上；并且所述玻璃纤维垫(2)上喷涂有带标记的彩色胶乳颗粒；所述层析膜(5)上设置试验线(3)，所述试验线(3)是将百日咳杆菌毒素或者百日咳杆菌丝状血凝素固定在层析膜(5)上形成。本实用新型百日咳IgG抗体检测卡能快速、有效的检测人接种疫苗后体内是否产生了特异性保护抗体。
文档编号G01N33/569GK202854142SQ201220591890
公开日2013年4月3日 申请日期2012年11月9日 优先权日2012年11月9日
发明者范亚民, 李晓霞 申请人:宁波天润生物药业有限公司