专利名称：一种快速定量检测hcg的试纸条的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及生物应用技术领域，特别涉及一种快速定量检测HCG的试纸条。
背景技术：
当受精卵植入子宫后，孕妇体内就会分泌一种新激素，称为人绒毛膜促性腺激素 (Human Chorionic Gonadotrophin,简称 HCG)。HCG 于 1927 年被 Aschheim 和 zondek 在孕妇尿中首次发现。HCG是细胞滋养层及合体滋养层分泌的一种激素，它首先存在于胎盘中，通过血液循环而排泄到尿中。在胎盘、血液和尿中均存在HCG及其代谢产物。在受孕后 10天左右，就可以在孕妇的晨尿中检测到HCG。正常妊娠妇女血清中，HCG浓度在黄体达到峰值后的7 10天或受精卵植入子宫后的4 7天后开始增加，并以指数形式增长，平均每1. 5 2天浓度就翻倍，不过增加速率也因人而异。妊娠7 10周后HCG浓度就可达 20，000 100，000IU/L，在妊娠13 15周时浓度有所降低，之后又开始缓慢增加直至妊娠 30 33周，接着又缓慢降低直至妊娠结束。异位妊娠HCG上升则较缓慢，或怀孕的3 6 周，HCG不能持续翻倍增加，应考虑异位妊娠或先兆流产的可能。HCG是早期妊娠中的主要信号，特异性标志，已成为临床上诊断早期妊娠的常用指标。定量动态监测HCG量也作为异位妊娠的监控指标。早期检测妊娠的方法主要有三种超声检测、基础体温测定和免疫层析检测。超声检测由于只能检测妊娠6周后子宫的情况，而通常被用于临床上胎儿的监测。基础体温测定虽然简单易行却又比较繁琐。免疫层析检测由于它的操作简便、具有直观、快速、检测效率高、方法简便、无污染、费用低廉、灵敏度高、特异性强等优点，被广泛应用于临床诊断、野外现场及家庭自我检测。免疫层析检测HCG的试剂运用双抗体夹心法。当测试液浸泡或滴入试纸条的样品垫后，通过吸水纤维的毛细作用，测试液迅速湿透金标结合垫，金标结合垫上的胶体金结合物被溶解，并随测试液一起沿层析材料向前移动。若测试液中存在待测抗原Ag，则它就会和胶体金结合物中的抗体发生特异性免疫反应，形成胶体金结合物-待测抗原的免疫复合物。然后随测试液一起流经固定在Nc膜上T线的捕获试剂。T线的捕获试剂捕获胶体金结合物-待测抗原免疫复合物，即与该免疫复合物发生特异性免疫反应，形成胶体金结合物-待测抗原-捕获试剂的免疫复合物，从而使胶体金结合物-待测抗原免疫复合物滞留在T线处。测试液继续前移，在流经Nc膜上固定有羊抗鼠IgG抗体的C线时，未与待测抗原 Ag发生反应的胶体金结合物与C线上羊抗鼠抗体发生免疫反应，从而使得游离的胶体金结合物滞留在C线处。此时T线和C线处均有胶体金结合物滞留，即T线和C线处均能观察到颜色(红色或紫色)，则表示检测结果为阳性结果，即测试液中有待测抗原；若仅C线处观察到颜色，而T线处未观察到颜色，则表示检测结果为阴性结果，即测试液中无待测抗原； 待测液中HCG含量不同，所产生的T线颜色深浅也不相同，随着HCG含量的增加，T线颜色就会越深。然而，在一些样品中高浓度HCG则可导致高水平的“钩状效应(hook effect)
即HCG浓度远远大于胶体金试纸条的检测上限时，HCG测得结果反而随浓度的增加而下降，T线颜色反而变浅，在临床诊断中造成HCG低水平的假象，使诊断结果出现不真实的问题。 发明内容鉴于现有技术的不足，本实用新型的目的在于提供一种快速定量检测HCG的试纸条，尤其提供一种能快速定量检测尿液或血液中HCG的试纸条。该试纸条不但能够克服现有检测试剂因HCG含量过高而产生的钩状效应，而且能够对血液或尿液中的HCG定量监测， 定量范围为10 15000mIU/ml，避免了样本稀释所带来的麻烦和误差。简便、准确、快速定量、灵敏度和特异性高、经济实用且与其它激素无交叉，可以更好的满足临床要求。为了实现本实用新型的目的，发明人通过大量试验研究，获得了如下技术方案一种快速定量检测HCG的试纸条，包括上样垫、标记物垫、NC膜、吸样垫和塑料板， 其特征在于所述的上样垫、标记物垫、NC膜和吸样垫依次粘附于塑料板，标记物垫上包被有胶体金标记的鼠抗HCG-β单克隆抗体，NC膜上分别包被有鼠抗HCG-α抗体构成的检测线T线和羊抗鼠IgG抗体构成的质控线C线，同时在NC膜上检测线T线靠近标记物垫一侧划有用于标示加样位置的加样指示线。本实用新型针对目前临床上缺乏快速定量HCG的简便快速方法，采用双抗体夹心法的免疫原理，硝酸纤维膜检测区(Τ线)包被有鼠抗HCG-α ；在检测卡加样的一端固定有配对的鼠抗HCG-β单克隆抗体标记的胶体金颗粒。检测时在NC膜标示线上加入3 5ul 被检样品(血液或尿液)，再向加样垫上加入适量样本稀释液，当样本中存在HCG抗原时，则被NC膜上的鼠抗HCG-α抗体捕获，并与扩散到NC膜上的鼠抗HCG-β单克隆抗体-胶体金的抗体相结合，形成包被抗体-抗原-金标抗体复合物，当被捕获的胶体金复合物达到一定数量时，则在检测区上形成一条肉眼可见的红色色带。5分钟内肉眼直接观察C、T线的出现情况，即可判断定性检测结果。红色色带强度可用配套的免疫层析判读仪定量测试，定量范围为10 15000mIU/ml。与现有技术相比，本实用新型涉及的快速定量检测HCG的试纸条具有如下优点和显著的进步(1)多功能性本实用新型既可定性，又可定量检测出尿液或血液中HCG的含量；(2)快速定量配套的免疫层析判读记录仪将人肉眼观察到检测区反应显色的颜色深浅程度进行了量化，根据仪器内存标准曲线，在一定的范围内，反应线条颜色的深浅与被测物的浓度可以呈现出一定的关系，可准确对样本中HCG浓度进行定量；(3)克服了钩状效应本实用新型不但能够克服现有检测试剂因HCG含量过高而产生的钩状效应，而且能够对血液或尿液中的HCG定量监测。具体为，检测时加样方式为先在NC膜上加入3 5ul被检样本，然后向上样垫上加入适量稀释液，既克服了现有检测试剂因HCG含量过高而产生的钩状效应，避免了由此产生的误判、假阴性结果，又提高了试剂的检测灵敏度，灵敏度可达10mIU/ml ；

图1为快速检测HCG的胶体金试纸条结构示意图；1、上样垫；2、标记物垫；3、硝酸纤维素(NC)膜；4、吸样垫；5、加样指示线；6、检测线T线；7、质控线C线；8、塑料板。
具体实施方式
以下是本实用新型涉及的快速定量检测血液中毒品的方法的具体实施例，对本实用新型的技术方案做进一步作描述，但是本实用新型的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本实用新型构思的改变或等同替代均包括在本实用新型的保护范围之内。实施例1 HCG检测试纸条的制备及检测应用(1)试纸条的装配在干燥室内温度20 25°C，湿度小于30 %，取塑料支撑板，将已包被的NC膜放置在塑料支撑板的中部粘贴，在NC膜T线一侧搭接标记物垫，在标记物垫另一侧搭接粘贴上样垫；在NC膜C线一侧距边缘搭接吸样垫。然后用裁剪机将贴好的塑料板切成适当宽度的试纸条。切好的试纸条也可以装入塑料卡内，形成检测试剂卡。装配后的试纸条包括上样垫1、标记物垫2、NC膜3、吸样垫4和塑料板8，其中上样垫1、标记物垫2、NC膜3和吸样垫4依次粘附于塑料板8，标记物垫2上包被有胶体金标记的鼠抗HCG-β单克隆抗体，NC膜3上分别包被有鼠抗HCG-α抗体构成的检测线T线6 和羊抗鼠IgG抗体构成的质控线C线7，同时在NC膜3上检测线T线6靠近标记物垫2 — 侧划有用于标示加样位置的加样指示线5。具体参见附图1。(2)临床样本检测检测时先在NC膜上加样指示线位置加入3 5ul被检样品，再向上样垫上加入适量稀释液，静置5分钟内可肉眼直接观察检测线T线、质控线C线的出线情况，即可判断定性检测结果；10 15分钟可通过配套的免疫层析判读仪定量测试，定量范围为10 15000mIU/ml。免疫层析判读仪综合应用机械、电子、光学、微机以及心理物理学的原理和方法， 达到智能人眼识别判读功能，对免疫层析试剂反应线的视觉信号自动定位，背景剔除，颜色分辨，量化处理，通过一个量化的GOD值表现出来。即在一定的范围内，线条颜色的深浅与被测物的浓度可以呈现出一定的关系，在测试反应过程中只要做一条标准曲线储存在仪器自带IC卡中，就能够对免疫层析试剂条进行定量测试。按照上述检测方法检测临床样本30份，以奥普HCG定量试剂为对照，结果表明本产品灵敏度达10mIU/ml，特异性100%，和奥普HCG定量试剂结果符合率为98. 1%。
权利要求1.一种快速定量检测HCG的试纸条，包括上样垫(1)、标记物垫0)、NC膜(3)、吸样垫 (4)和塑料板(8)，其特征在于，所述的上样垫(1)、标记物垫(2)、NC膜(3)和吸样垫(4)依次粘附于塑料板(8)，标记物垫(2)上包被有胶体金标记的鼠抗HCG-β单克隆抗体，NC膜 (3)上分别设置有检测线T线(6)和质控线C线(7)，同时在NC膜(3)上检测线T线(6) 靠近标记物垫( 一侧划有用于标示加样位置的加样指示线(5)。
2.根据权利要求1所述的试剂条，其特征在于，所述的检测线T线(6)是由鼠抗HCG-α 抗体包被制成。
3.根据权利要求1所述的试剂条，其特征在于，所述的质控线C线(7)是由羊抗鼠IgG 抗体包被制成。
专利摘要本实用新型公开了一种快速定量检测HCG的试纸条，该试纸条包括上样垫、标记物垫、NC膜、吸样垫和塑料板，所述的上样垫、标记物垫、NC膜和吸样垫依次粘附于塑料板，标记物垫上包被有胶体金标记的鼠抗HCG-β单克隆抗体，NC膜上分别包被有鼠抗HCG-α抗体构成的检测线T线和羊抗鼠IgG抗体构成的质控线C线，同时在NC膜上检测线T线靠近标记物垫一侧划有用于标示加样位置的加样指示线。本实用新型的试纸条通过膜上加样方式不但能够克服现有检测试剂因HCG含量过高而产生的钩状效应，且通过配套的免疫层析判读仪能够对血液或尿液中的HCG进行定量检测。
文档编号G01N33/76GK202159067SQ20112025648
公开日2012年3月7日 申请日期2011年7月20日 优先权日2011年7月20日
发明者李洲, 许俊艳 申请人:天津中新科炬生物制药有限公司