专利名称：人工合成的熊果苷中对苯二酚含量的分析方法
技术领域：
本发明涉及熊果苷中对苯二酚含量的分析，具体的说，是用高效液相色谱分析熊果苷中对苯二酚的含量。
背景技术：
熊果苷(p-hydroxyphenyl-β-D-glucopyranoside，arbutin)是从植物中分离得到的一种成分，其结构为 它具有镇咳、利尿、抗菌、消毒等生物活性。近年来还发现熊果苷能有效抑制皮肤细胞中的酪氨酸酶，从而显著地减少皮肤中的色素沉积，可以祛除色斑和雀斑。目前，以熊果苷作为化妆品添加剂是一个新的热点，但从植物中提取熊果苷工艺复杂、产率低、成本高。以葡萄糖和对苯二酚为原料，用人工合成的方法制得的熊果苷克服了以上缺点。熊果苷作为一种有效的化妆品添加剂，应用非常广泛，定量测定熊果苷的方法有较多报道[参见徐卫.定量测定熊果苷含量的HPLC方法[J].北京日化，1998，(1)19-22；邱东方，郭应臣，王宏伟.反相HPLC法测定化妆品中熊果苷的含量[J].化学研究，2000，11(4)34-35]。但测定熊果苷中对苯二酚含量的方法未见报道。
酚类物质对人体有很大的危害，由于渗透性强，可以通过皮肤、呼吸道粘膜、口腔等多种途径进入人体，并深入到内部组织，侵犯神经中枢，刺激骨髓，严重时可导致全身中毒和致癌，长期接触酚类物质还会出现皮肤疡痒、皮疹、贫血、记忆力减退等症状。国际市场上对熊果苷中对苯二酚的残留量有着严格的限制。因此，解决人工合成的熊果苷中对苯二酚含量的分析方法就显得十分重要。

发明内容
本发明的目的是提供一种准确、简易的人工合成的熊果苷中对苯二酚含量的分析方法。
本发明的技术方案如下
一种人工合成的熊果苷中对苯二酚含量的分析方法，它是高效液相色谱分析法，其特征是高效液相色谱的条件为色谱柱C18，5μm，(4.6×250mm)；柱温30℃；流动相甲醇/水/乙酸水溶液(体积浓度为1％)＝5∶45∶50(体积比)，或甲醇/水/高氯酸水溶液(体积浓度为0.2％)＝5∶45∶50(体积比)；流动相流速0.8mL/min；检测波长287nm；进样量5-10μL。
本发明的高效液相色谱测定人工合成熊果苷中对苯二酚含量的方法，操作简单，结果准确可靠，适合同时测定熊果苷及其中对苯二酚和其他杂质的含量。


图1为人工合成的熊果苷样品的色谱图，其中峰1为未知杂质峰，2为熊果苷，峰3为对苯二酚；图2为对苯二酚的标准曲线；图3为紫外光谱图 3a熊果苷，3b对苯二酚。
具体实施例方式
仪器与试剂采用Waters Alliance 2695型高效液相色谱仪，配备真空脱气机，四元梯度泵，自动进样器，996型二极管阵列(PDA)检测器。色谱分离系统的控制和记录由Waters Millinium32色谱工作站完成。
熊果苷对照品和人工合成样品江苏鑫源生化科技发展有限公司提供；对苯二酚为分析纯(上海联试化工试剂有限公司提供)；甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司提供)；冰乙酸为分析纯(中国医药集团上海化学试剂公司提供)；高氯酸为优级纯(天津市化学试剂三厂提供)；水为娃哈哈纯净水。
实施例1.高效液相色谱条件的选择色谱柱Waters公司Symmetry C18，5μm，(4.6×250mm)；柱温30℃。
流动相的选择考虑到熊果苷和对苯二酚在结构上都有酚羟基，在水溶液中容易电离导致峰型畸变，无法分离，因此用1％的乙酸溶液或0.2％的高氯酸溶液抑制其离解，效果均比较好，峰形比较尖锐。经过试验，当V甲醇∶V水∶V1％乙酸水溶液或(V0.2％高氧酸水溶液)＝5∶45∶50时，各成分能在适宜时间内得到清晰的分离。因此选择流动相为甲醇/水/乙酸水溶液(体积浓度为1％)＝5∶45∶50，或甲醇/水/高氯酸水溶液(体积浓度为0.2％)＝5∶45∶50；流速0.8mL/min。
进样量5-10μL。
检测波长的确定对照熊果苷和对苯二酚的紫外吸收图(见图3)，考虑到待测对苯二酚的含量较低，选择对苯二酚吸收较强的波长287nm作为检测波长。
实施例2.对苯二酚标准曲线的制作准确称取对二苯酚标准品10mg于10-mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，得标准储备液(浓度为1mg/mL)。分别精密移取储备液适量用水配成标准溶液系列(浓度为0.00004～0.01mg/mL)，各取10μL进样。以峰面积为纵坐标对浓度作图，得线性良好的标准曲线，相关系数为0.99992，回归方程为A(area)＝-638.4307+1.49498E7 C。当信噪比S/N＝3时，测得对苯二酚的最低检测限为0.00002mg/mL。对苯二酚的标准曲线见图2。
实施例3.人工合成熊果苷样品的色谱图在人工合成熊果苷样品的色谱图(见图1)中，通过标准品对照可知峰2为熊果苷，峰3为对苯二酚，峰1为未知杂质。
实施例4.人工合成熊果苷样品中对苯二酚含量的测定准确称取五份人工合成熊果苷样品约10mg，分别置于10-mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，制成五份样品溶液。每份溶液分别取10μL各进样5次，单份溶液分析结果见表1。五份熊果苷样品中对苯二酚的平均含量为0.0127％，相对标准偏差(RSD)为4.2％。
表1人工合成熊果苷中对苯二酚的测定结果(n＝5)样品溶液序号 质量百分含量 RSDNo w(％) (％)1 0.01271.12 0.01254.33 0.01261.74 0.01372.95 0.01211.8
权利要求
1.一种人工合成的熊果苷中对苯二酚含量的分析方法，它是高效液相色谱分析法，其特征是高效液相色谱的条件为色谱柱C18，5μm，(4.6×250mm)；柱温30℃；流动相甲醇/水/乙酸水溶液(体积浓度为1％)＝5∶45∶50(体积比)，或甲醇/水/高氯酸水溶液(体积浓度为0.2％)＝5∶45∶50(体积比)；流动相流速0.8mL/min；检测波长287nm；进样量5-10μL。
全文摘要
一种人工合成的熊果苷中对苯二酚含量的分析方法，它是高效液相色谱分析法，高效液相色谱的条件为色谱柱C
文档编号G01N30/26GK1614414SQ20041006532
公开日2005年5月11日 申请日期2004年11月26日 优先权日2004年11月26日
发明者练鸿振, 韦玉娜, 李丹妮 申请人:南京大学