专利名称：用于肝癌诊断的甲胎蛋白异质体分离试剂盒及其组成试剂与应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药制剂领域，具体涉及基于磁性微粒分离技术的用于肝癌诊断的甲胎蛋白异质体分离试剂盒及其组成试剂与应用。
背景技术：
一般认为，甲胎蛋白(AFP)是HCC (hepatocellular carcinoma,肝细胞癌)相对特异的肿瘤标志物，AFP持续升高是发生HCC的危险因素。目前，有些欧美学者认为AFP的敏 感性和特异度不高，2010版美国肝病研究学会(AASLD)指南已不再将AFP作为筛查指标，但是我国的HCC大多与HBV (乙肝病毒)感染相关，与西方国家HCC致病因素不同(多为HCV、酒精和代谢性因素)，结合国内随机研究(RCT)结果和实际情况，对HCC的常规监测筛查指标中继续保留AFP。血清AFP及其异质体是诊断肝癌的重要指标和特异性最强的肿瘤标记物，国内常用于肝癌的普查、早期诊断、术后监测和随访。对于AFP彡400 μ g/L超过I个月，或^ 200 μ g/L持续2个月，并能排除其他原因引起的AFP升高，包括妊娠、生殖系胚胎源性肿瘤、活动性肝病及继发性肝癌等。但是尚有30%-40%的肝癌病人AFP检测呈阴性，包括ICC、高分化和低分化HCC，或HCC已坏死液化者，AFP均可不增高。因此，仅靠AFP不能诊断所有的肝癌，AFP对肝癌诊断的阳性率一般为60%-70%，有时差异较大。近年来，国内外临床观察和研究结果均提示，血清AFP在部分ICC和胃肠癌肝转移患者中也可升高，并且ICC也多伴有肝硬化。尽管ICC的发病率远低于HCC，但两者均常见于肝硬化患者，因此，肝占位性病变伴AFP升高并不一定就是HCC，仍需进一步鉴别。AFP是一个单链糖蛋白，不同的肝病患者产生的血清AFP的糖链结构不同，根据与小扁豆凝集素亲和力不同，AFP可以分成3种类型=AFP-Ll由良性病变肝细胞分泌，AFP-L2，来自孕妇，而AFP-L3则为恶性癌细胞产生，即通常所说的甲胎蛋白异质体。AFP-L3是肝癌诊断的高特异指标，被称为新一代肝癌标志物。FDA于2005年批准该指标应用于肝癌预警，并把AFP-L3诊断肝癌的阳性界定值为10%。1999年第四届全国癌症学术会议将AFP-L3列为原发性肝癌临床诊断标准的肝癌标记物之一。被公认为是比单纯的AFP更为特异的原发性肝癌指标。鉴别肝癌与良性肝病。原发性肝癌患者AFP常升高，但许多良性肝脏疾病也可有AFP升高，单凭AFP结果有时很难区分良、恶性病变。此时AFP异质体检测就具有良好的临床意义，尤其对于AFP在30-400ng/ml之间者具有较好的价值。Yozhiaki对361例肝硬化进行了前瞻性研究，在53例AFP在30ug几以上的患者中，2年以后21例发展为肝癌，确诊肝癌时39%的患者AFP在400ug/L以下。对比研究开始时肝细胞肝癌(HCC)组与非HCC组AFP测定值，未发现差异有显著性，研究发现病变时AFP异质体的类型有所不同，对HCC诊断LCA阳性率87. 12%，假阳性率21. 5%，ConA阳性率89. 17%，假阳性率17. 15%。目前的研究结果把AFP-L3含量大于10%作为肝癌的阳性指标。
肝癌术后的监测。肝癌切除术后，血清AFP含量随之下降，其下降速度取决于体内残留AFP量及半衰期，一般2月内转阴，转阴时AFP异质体随之消失。如果AFP明显下降但不转阴，异质体变化不明显，则提示手术不彻底，可能还存在边缘残留、血管癌检、卫星结节或转移等。如果异质体下降至25%以下，AFP和异质体浓度相对恒定，则可能是患者有肝炎或肝硬化所致。胚胎异常发育及胎儿先天性疾患。正常妊娘期母体血清中AFP与胚胎中AFP处于平衡状态，一旦胎儿畸形或胎盘屏障发生异常，可导致胎儿血清渗入羊水中或羊水渗入母体血清，造成母体羊水或血清AFP急剧升高。但仅仅测定AFP总量有一定的局限性。实验表明神经管缺损、无脑儿或脊柱裂等。儿童肝母细胞瘤、胆道闭锁、性腺肿瘤、恶性崎胎瘤等可有AFP和/或AFP异质体的阳性。AFP-L3是唯一由患者肝脏中癌细胞生成的蛋白。在加拿大和美国的一项多中心、前瞻性、双盲、长期临床试验中，对该检测方法进行了研究。结果显示AFP-L3%升高(15%以上)的患者，在接下来的21个月中，发生肝细胞癌的危险增加7倍之多。根据已有的肝细胞癌肿瘤学实践指南，这些患者肝细胞癌发生率极端增高。 目前，AFP-L3检测方法有检测方法有植物凝集素亲和免疫电泳技术、pTASWako 30检测系统技术及热景生物糖基捕获离心柱前处理技术。其中植物凝集素亲和免疫电泳技术和pTASWako 30检测系统技术要求高、操作繁琐、试剂昂贵，限制了其临床应用。而糖基捕获离心柱，由于采用非均相反应体系，从而限制了其分离纯化效率和特异性。免疫磁珠分离反应免疫磁珠分离技术是将目标分子的亲和配基如抗体、蛋白等共价连接于磁珠表面获得活性磁珠。当活性磁珠与含有目标分子的溶液混合后，由于目标分子与其配基的亲和结合而形成磁珠-配基-目标分子复合物，然后利用磁珠分离器(磁力架或磁棒)与磁珠之间的磁性将磁珠-配基-目标分子复合物分离，经过洗涤液洗涤去除非特异性结合杂质后，最后用洗脱液将目标分子与磁珠分离，进而实现目标分子的分离纯化。由于免疫磁珠分离技术具备了固相化试剂特有的优点以及免疫学反应的高度专一性，并且分离速度快、效率高、可重复性好；同时操作简单，不需要昂贵的仪器设备，已经广泛用于DNA和RNA的分离纯化。如果该技术用于AFP-L3检测方法将是不错的选择，该反应是在均相中进行，所以反应时间短、充分，提高工作效率大幅提升，若与全自动提取仪配套使用，可进一步提高反应通量和工作效率。但是，由于磁颗粒本身的均一性、表面疏水性、张力以及表面包被蛋白等特性，在实际应用过程中会产生聚集沉降，从而影响凝集素包被磁珠对AFP-L3的捕获效率和灵敏度，有待于改进。

发明内容
根据上述领域存在的缺陷和需求，本发明提供一种以甲胎蛋白异质体为目标蛋白的分离试剂盒及其组成试剂。一种用于肝癌诊断的甲胎蛋白异质体分离试剂盒，包括磁性微粒，其特征在于，所述磁性微粒为植物凝集素与活性磁珠通过1-(3- 二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺法共价偶联而得，所述植物凝集素为小扁豆凝集素，包被活性磁珠所用的小扁豆凝聚素的投料浓度为每毫克磁珠70 μ g。
所述甲胎蛋白异质体分离试剂盒还包括保护液,所述保护液指在pH7. 510mMPBS、pH8. 550mM Tris-HCl或pH5. OlOOmM柠檬酸缓冲液中按质量体积比溶有以下组份1 3%BSA、0. 5 1%明胶、O 2%蔗糖或O 5%海藻糖、O 5%酪蛋白，O. 03%NaN3>0. 01 O. 05%Tween-20而得的溶液。所述保护液指在pH7. 510mM PBS、pH8. 550mM Tris-HCl 或 ρΗ5· OlOOmM 柠檬酸缓冲液中按质量体积比溶有以下组份1%BSA、1% 明胶、2% 蔗糖、O. 03%NaN3、0. 01%Tween_20 ；
3%BSA、0. 5% 明胶、2% 蔗糖、O. 03%NaN3、0. 05%Tween_20 ；1%BSA、1% 明胶、5% 海藻糖、0. 03%NaN3、0. 01%Tween_20 ；3%BSA、0. 5% 明胶、5% 海藻糖、0. 03%NaN3,0. 05%Tween-20 ；1%BSA、1% 明胶、5% 酪蛋白、0. 03%NaN3,0. 01%Tween-20 ;或3%BSA、0. 5% 明胶、5% 酪蛋白、0. 03%NaN3、0. 05%Tween_20 而得的溶液所述甲胎蛋白异质体分离试剂盒还包括洗脱液，所述洗脱液为250mM Tris-HCl,I IOM岩藻糖，pH7.4。所述洗脱液为溶于pH7. 4250mM Tris-HCl中所得的IOM岩藻糖溶液。所述甲胎蛋白异质体分离试剂盒还包括反应液,所述反应液为含O. 05% (w/v)Tween-20 的 IOmM ρΗ7· 4Tris_HCl 缓冲液。一种用于甲胎蛋白异质体分离的磁性微粒，其特征在于，所述磁性微粒为植物凝集素与超顺强磁性颗粒通过I-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺法共价偶联而得，所述植物凝集素为小扁豆凝集素，包被活性磁珠所用的小扁豆凝聚素的投料浓度为每毫克磁珠 70 μ g。一种与所述磁性微粒配合使用的保护液，指在pH7. 510mM PBS、pH8. 550mMTris-HCl或pH5. OlOOmM柠檬酸缓冲液中按质量体积比溶有以下组份1 3%BSA、0. 5 1%明胶、O 2%蔗糖或O 5%海藻糖、O 5%酪蛋白，O. 03%NaN3、0. 01 O. 05%Tween_20而得的溶液。所述甲胎蛋白异质体分离试剂盒还包括保护液，指在pH7. 510mM PBS、pH8. 550mMTris-HCl或pH5. OlOOmM柠檬酸缓冲液中按质量体积比溶有以下组份1%BSA、1% 明胶、2% 蔗糖、O. 03%NaN3、0. 01%Tween_20 ；3%BSA、0. 5% 明胶、2% 蔗糖、O. 03%NaN3>0. 05%Tween-20 ；1%BSA、1% 明胶、5% 海藻糖、O. 03%NaN3、0. 01%Tween_20 ；3%BSA、0. 5% 明胶、5% 海藻糖、O. 03%NaN3>0. 05%Tween_20 ；1%BSA、1% 明胶、5% 酪蛋白、O. 03%NaN3>0. 01%Tween-20 ;或3%BSA、0. 5% 明胶、5% 酪蛋白、O. 03%NaN3>0. 05%Tween_20 而得的溶液。一种与所述磁性微粒配合使用的洗脱液，成分为250mM Tris-HCl, IOM岩藻糖，ρΗ7· 4。上述任一试剂盒在岩藻糖基化蛋白分离纯化中的应用。AFP-L3是一种糖链上含岩藻糖的糖基化蛋白，由于其糖链含有岩藻糖，因此可以与植物、微生物凝集素亲和结合。试剂盒选用小扁豆凝集素(LCA)与超顺强磁性颗粒用I-(3- 二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)法共价偶联，形成稳定的共价化学键，获得活性磁珠。将一定浓度活性磁珠与血清样本混合，包被有凝集素的磁珠会与AFP-L3亲和结合，然后通过洗涤、洗脱步骤将AFP-L3与AFP-L1、AFP-L2分离，最后获得的AFP-L3溶液用AFP定量试剂盒进行检测。本发明基于免疫磁珠分离技术及AFP-L3与肝癌的特异相关性提供一种改进的甲胎蛋白异质体分离试剂盒为了提高AFP-L3提取分离效果，实验从包被凝集素种类和浓度选择，调节凝集素与磁珠偶联工艺获得了结合能力及特异性都优良的磁性微粒。为了提高本发明的试剂盒的性能稳定性，本发明通过对pH值、离子强度、表面活性物质、密度、保护蛋白种类及浓度等因素的选择成功的获得了均一性良好、分散性良好的能够是磁性微粒结合性能持久稳定的保护液。此外还通过调整成分及pH获得了优选的洗脱液，反应液等试剂盒优化组件，与改进的磁性微粒及保护液配合使用，使试剂盒在应用中每个步骤都发挥最优的效果，综合上提高试剂盒特异及高效的分离纯化效果。本发明的试剂盒还能用于其他岩藻糖基化蛋白的分离纯化。


图ILCA包被磁珠效率；其中横坐标为LCA加入量(ugLCA/mg MB)，纵坐标为磁珠LCA结合量(ugLCA/mgMB)图2不同洗脱液洗脱效果；其中横坐标为样本AFP-L3浓度(ng/ml )，纵坐标为洗脱液AFP-L3浓度(ng/ml)图3不同pH值反应液；其中横坐标为样本AFP-L3浓度(ng/ml )，纵坐标为洗脱液AFP-L3浓度(ng/ml)图4不同种类凝集素对AFP-L3结合特性。其中横坐标为样本AFP-L3浓度(ng/ml )，纵坐标为洗脱液AFP-L3浓度(ng/ml)
具体实施例方式以下实施例用于进一步详细说明本发明。所用试剂活性磁珠(MB)Invitrogen, Dynal-Myone25mM MES :2_(N_ 吗啉基)乙磺酸(sigma，M3671)缓冲液，称取 4. 88gMES 于 900mL超纯水中，完全溶解后调节pH5. 0，定容至1L。EDC (I-(3-二甲基氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺)溶液sigma，39391洗脱液10M岩藻糖洗脱液(Sigma，F2252)小扁豆凝聚素LCA :lmg/ml，溶于 25mM MES 缓冲液中，ρΗ5· O (Sigma_L9627)；反应液含O. 05% (w/v) Tween-20 的 IOmM ρΗ7· 4Tris_HCl 缓冲液pH7. 510mM PBS :称取 0. 27g 磷酸二氢钾(KH2P04)(国药，10017608)、I. 42g 磷酸氢二钠(Na2HP04)(国药，100203008)，8g 氯化钠(NaCl)(国药，10019308),0. 2g 氯化钾(KCl)(国药，10016308)于900mL超纯水中，完全溶解后调节pH至7. 5，然后用容量瓶定容至1L。IOmM Tris-HCl :称取 I. 576g Tris-HCl (国药，xw020034)于 900mL 超纯水中，完全溶解后调节到所需的pH值，然后定容至1L。pH8. 550mM Tris-HCl :称取 7. 88g Tris-HCl (国药，xw020034)于 900mL 超纯水中，完全溶解后调节PH值到8. 5，然后定容至1L。IOOmM Tris-HCl :称取 15. 76g (国药，xw020034)于 900mL 超纯水中，完全溶解后调节到所需的pH值，然后定容至1L。250mM Tris-HCl :称取39. 4g (国药，xw020034)于900mL超纯水中，完全溶解后用调节到所需的pH值，然后定容至1L。pH5. OlOOmM柠檬酸缓冲液称取I. 47g柠檬酸(国药，10007108),27. 35g柠檬酸三钠(国药，10019428)于900mL超纯水中，完全溶解后用浓盐酸调节pH值到5. 0，然后定容至
IL0(一)活性磁珠(MB,Dynal-Myone)制备步骤I、磁珠活化。取Img 活性 MB (Invitrogen, Dynal-Myone),用 lmL25mM MES (ρΗ5· O) (sigma,M3671)缓冲液洗涤3次(每次混匀IOmin)；I)配制 10mg/mL EDC (Μ=191· 7g/mol, C=52mM)溶液(EDC 溶解于冷的 25mMMES，ρΗ5· O)；(EDC,sigma,39391)2).将 MB 用 440 μ L25mM MES (ρΗ5· 0)重悬。3) ·加入10 μ L EDC溶液，充分混匀，缓慢振摇，30min，RT ；4).将反应完成的离心管放置在磁力架上4min后，去除上清，并用lmL25mMMES, ρΗ5· O 洗涤 3 次；2、磁珠包被 I)用 300 μ L25mM MES, ρΗ5· O 重悬 MB ；2) ·加入 20ul 设定浓度的 LCA (Sigma_L9627，25mM MES, ρΗ5· O)溶液；3).用25mM MES, pH5. 0使反应体系定容为500 μ L，充分混匀；4).缓慢振摇，室温30_120min或4°C 2小时；5).将反应完成的离心管放置在磁力架上4min后，去除上清；3、磁珠洗涤和保存I)用 500 μ L25mM MES (ρΗ5· O)洗涤 4 次；2).加入 100 μ L0. 1-0. 5%BSA (amresco，0332)，30_60min，RT (室温)。3).用 100 μ L50mM Tris-HCl (ρΗ6· 8，含 l%Tween_20) (sigma，44112)洗涤 4 次；4).加入 ImL 保存液(ρΗ8· O, IOOmM Tris-HCl、1%BSA、0. 01%Tween_20、0. 03%NaN3(sigma, 71289))保存(二)磁珠包被凝集素量选择I、磁珠活化活化方法同上2、磁珠包被I)将 MB 用 300 μ L25mM MES, ρΗ5· O 重悬；2)加入 20 μ L 不同浓度的小扁豆凝聚素 LCA (sigma, L9267) (O. 5mg/ml、I. Omg/ml>I. 5mg/ml、2. 0mg/ml、2. 5mg/ml、3. 0mg/ml、3. 5mg/ml、4. Omg/ml>4. 5mg/ml、5. Omg/ml,25mM MES，ρΗ5· 0)溶液；3)用25mM MES, pH5. O使反应体系为500 μ L，充分混匀；4)缓慢振摇，30_120min，RT 或 2h，4°C ；5)将反应完成的离心管放置在磁力架上4min后，去除上清；6)用 500 μ L25mM MES (ρΗ5· O)洗涤 4 次；7)用BCA蛋白定量试剂盒(Thermo，23225)进行定量检测磁珠包被的蛋白量(小扁
豆凝聚素)。本发明通过在反应体系中加入不同浓度的LCA，选择偶联效率[(偶联量/投料 量)X 100%]为80%以上的投料量和包被量，最佳投料浓度为70 μ g LCA/mg MB，最佳包被量为60 μ g LCA/mg MB,如图I所示。(三)不同保护液对磁珠稳定性影响制备好的包被LCA (sigma，L9267)的磁珠用以下不同的稀释液稀释50倍，37°C加速试验6天，记录磁珠的沉降和聚集情况，以下稀释液中的成分为质量/终体积百分比。在pH7. 510mM PBS、pH8. 550mM Tris-HCl 或ρΗ5· OlOOmM柠檬酸缓冲液中溶以下成分Xl 1%BSA (Amaresco,0332)、1% 明胶(sigma,6144)、2% 鹿糖(sigma,84097)、
O.03%NaN3 (sigma,71289),0. 01%Tween-20 ；X2 :3%BSA、0. 5% 明胶、2% 蔗糖、0. 03%NaN3、0. 05%Tween_20 ；X3 :1%BSA、1% 明胶、5% 海藻糖(sigma，Τ9531)、0· 03%NaN3、0. 01%Tween_20 ；X4 :3%BSA、0. 5% 明胶、5% 海藻糖、0. 03%NaN3、0. 05%Tween_20 ；X5 :1%BSA、1% 明胶、5% 酪蛋白(sigma，11615),0. 03%NaN3、0. 01%Tween-20 ;或X6 :3%BSA、0. 5% 明胶、5% 酪蛋白、0. 03%NaN3、0. 05%Tween_20 ；表I不同保护液对磁珠稳定性的影响
10mMpBS (pH7_5) 50mM Tris-HCl (pH8:5) IOOmM 柠樣酸(ρΗ5.0)
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Χ6ο* #-ο注沉降等级，代表无沉降、代表有沉降但较轻、“**”代表沉降较为严重；聚集程度，“O”代表没有聚集、“#”代表有聚集但较轻代表聚集较为严重。通过选择不同pH条件下、保护剂和去污剂浓度以及溶液的密度，使保护液不仅能增加磁珠稳定性，保护凝聚素的活性，而且能降低磁性的聚集和沉降，提高保护液的效果。本发明通过大量的筛选试验，获得了如表I所示的使磁珠稳定性提高的稀释液，使LCA-MB磁性微粒在有效期内的稳定性大大提升,如表2，磁珠制备180天之后重复上述试验，沉降和聚集的程度都没有发生改变，结果如下，说明本发明提供的保护液对于磁珠及其表面包被的凝聚素具有优良的稳定作用。表2不同稀释液对磁珠稳定性的影响(180天后)
权利要求
1.一种用于肝癌诊断的甲胎蛋白异质体分离试剂盒，包括磁性微粒，其特征在于，所述磁性微粒为植物凝集素与活性磁珠通过1-(3- 二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺法共价偶联而得，所述植物凝集素为小扁豆凝集素，包被活性磁珠所用的小扁豆凝聚素的投料浓度为每毫克磁珠70 μ g。
2.根据权利要求I所述的甲胎蛋白异质体分离试剂盒，还包括保护液，所述保护液指在pH7.510mM PBS、ρΗ8· 550mM Tris-HCl或ρΗ5· OlOOmM柠檬酸缓冲液中按质量体积比溶有以下组份1 3%BSA、0. 5 1%明胶、O 2%蔗糖或O 5%海藻糖、O 5%酪蛋白，O.03%NaN3、0. 01 O. 05%Tween_20 而得的溶液。
3.根据权利要求2所述的甲胎蛋白异质体分离试剂盒，所述保护液指:在pH7.510mMPBS、pH8. 550mM Tris-HCl或pH5. OlOOmM柠檬酸缓冲液中按质量体积比溶有以下组份1%BSA、1% 明胶、2% 蔗糖、O. 03%NaN3、0. 01%Tween-20 ；3%BSA、0. 5% 明胶、2% 蔗糖、O. 03%NaN3、0. 05%Tween-20 ；1%BSA、1% 明胶、5% 海藻糖、0. 03%NaN3>0. 01%Tween_20 ；3%BSA、0. 5% 明胶、5% 海藻糖、0. 03%NaN3、0. 05%Tween-20 ；1%BSA、1% 明胶、5% 酪蛋白、0. 03%NaN3、0. 01%Tween-20 ;或3%BSA、0. 5% 明胶、5% 酪蛋白、0. 03%NaN3、0. 05%Tween_20 而得的溶液。
4.根据权利要求2或3所述的甲胎蛋白异质体分离试剂盒，还包括洗脱液，所述洗脱液为250mM pH7. 4Tris_HCl，IOM 岩藻糖。
5.根据权利要求2或3所述的甲胎蛋白异质体分离试剂盒，还包括反应液，所述反应液为含 O. 05% (w/v) Tween-20 的 IOmM ρΗ7· 4Tris_HCl 缓冲液。
6.一种用于甲胎蛋白异质体分离的磁性微粒，其特征在于，所述磁性微粒为植物凝集素与超顺强磁性颗粒通过I- (3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺法共价偶联而得，所述植物凝集素为小扁豆凝集素，包被活性磁珠所用的小扁豆凝聚素的投料浓度为每毫克磁珠70 μ g。
7.一种与权利要求6所述的磁性微粒配合使用的保护液，指在pH7. 510mM PBS、pH8. 550mM Tris-HCl或pH5. OlOOmM柠檬酸缓冲液中按质量体积比溶有以下组份1 3%BSA、0. 5 1%明胶、O 2%蔗糖或O 5%海藻糖、O 5%酪蛋白，O. 03%NaN3>0. 01 O.05%Tween-20而得的溶液。
8.根据权利要求7所述的保护液，在pH7.510mM PBS、pH8. 550mM Tris-HCl或pH5. OlOOmM柠檬酸缓冲液中按质量体积比溶有以下组份1%BSA、1%明胶、2%蔗糖、O.03%NaN3、0. 01%Tween-20 ；3%BSA、0. 5% 明胶、2% 蔗糖、O. 03%NaN3、0. 05%Tween-20 ；1%BSA、1% 明胶、5% 海藻糖、0. 03%NaN3>0. 01%Tween_20 ；3%BSA、0. 5% 明胶、5% 海藻糖、0. 03%NaN3、0. 05%Tween-20 ；1%BSA、1% 明胶、5% 酪蛋白、0. 03%NaN3、0. 01%Tween-20 ;或3%BSA、0. 5% 明胶、5% 酪蛋白、0. 03%NaN3、0. 05%Tween_20 而得的溶液。
9.一种与权利要求6所述的磁性微粒配合使用的洗脱液，成分为250mMTris-HCl，IOM岩藻糖，PH7.4。
10.权利要求I 5任一试剂盒在岩藻糖基化蛋白分离纯化中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种用于肝癌诊断的甲胎蛋白异质体分离试剂盒及其组成试剂与应用，涉及医用试剂领域。在本发明的优选实施方式中，成功的获得了均一、稳定的保护液，并通过对试剂盒的优化，获得了具有稳定的、高结合力的和特异的凝集素包被磁珠，均一的和稳定的凝集素-磁珠溶液，最佳的反应液和洗脱液。
文档编号G01N33/531GK102879567SQ20121037501
公开日2013年1月16日 申请日期2012年9月29日 优先权日2012年9月29日
发明者李全, 焦守恕, 肖智 申请人:同昕生物技术(北京)有限公司