专利名称：一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种电泳制胶设备，尤其是涉及一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶
直O
背景技术：
同工酶是一类催化功能相同但化学组成和结构不同的酶类，它广泛地存在于生物细胞内。同工酶检测可作为细胞系种属鉴别、鉴定的依据，广泛地应用于细胞系种间交叉污染检测，鉴别各种细胞系的真伪，明确细胞系的身份。检测同工酶的方法中电泳法最为常用，目前依所选支持物的不同，电泳法分为醋酸纤维素薄膜电泳，淀粉胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳等。其中醋酸纤维素薄膜电泳方法最简单，但点样不能太多，且区带淡；聚丙烯酰胺凝胶电泳易分离清晰，但操作繁琐，不易掌握且价格昂贵，试剂有毒需要防护；淀粉胶电泳制板时易碎裂，缺乏韧性，影响分离效果，操作亦较复杂。以上各法都具有其局限性，因而限制了它们的应用。而琼脂糖凝胶是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，凝胶颗粒不带电荷，用作电泳支持物有以下优点结构均勻，含水量大，对样品吸附小，便于制备，电泳图谱清晰，分辨率高；电泳后区带易染色，样品易脱色，便于定量分析，若制成干胶膜可长期保存，试剂无毒性，无污染。现有同工酶琼脂糖凝胶电泳方法存在的缺点制胶麻烦、上样量大、电泳时间长、 电压偏高、所需酶底物染色液量大，成本高等缺点。

实用新型内容本实用新型主要是解决现有技术所存在的上述问题，提供一种操作方便，用胶量少，上样量小，配置方便，成本低的同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置。该装置配制的琼脂糖凝胶在电泳后，可长期保存。本实用新型的上述技术问题主要是通过下述技术方案得以解决的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，包括依次叠加的底座、塑料凝胶板、琼脂糖凝胶模具、固定框以及将所述底座、塑料凝胶板、琼脂糖凝胶模具、固定框固定为一体的固定装置。在上述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，所述的琼脂糖凝胶模具包括模具板以及设置在模具板中的用以承胶的凸起灌胶部、以及设置在凸起灌胶部中的点样孔装置和与点样孔装置相对应的点样孔标识装置，凸起灌胶部还设置有灌胶孔。在上述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，所述的点样孔装置包括若干上部凹陷以及若干下部凹陷，所述的上部凹陷分别为上部第一凹陷、上部第二凹陷、上部第三凹陷以及上部第四凹陷；所述的下部凸起分别为下部第一凹陷、下部第二凹陷、下部第三凹陷以及下部第四凹陷。在上述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，所述的点样孔标识装置包括设置在所述点样孔装置旁的平行对应于上述上部凹陷以及下部凹陷的上部点样孔标识凹陷以及下部点样孔标识凹陷。在上述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，所述的上部第一凹陷、上部第二凹陷、上部第三凹陷以及上部第四凹陷的形状分别为阿拉伯数字1、2、3以及4;所述的下部第一凹陷、下部第二凹陷、下部第三凹陷以及下部第四凹陷的形状分别为阿拉伯数字1、2、3 以及4 ；所述上部点样孔标识凹陷以及下部点样孔标识凹陷的形状均为长条状。在上述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，所述的上部凹陷和下部凹陷之间、以及上部点样孔标识凹陷和下部点样孔标识凹陷之间设置有一长条凹陷。在上述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，灌胶孔设置在凸起灌胶部的对在上述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，所述的固定装置包括设置在上述底座上的底座固定孔、与底座固定孔相对应并设置在上述固定框上的固定框固定孔以及配套的固定螺丝和固定螺母；固定螺丝依次穿过底座固定孔、固定框固定孔以及固定螺母将上述底座、塑料凝胶板、琼脂糖凝胶模具、固定框固定，所述的琼脂糖凝胶模具和塑料凝胶板边缘均设置在底座和固定框之间被底座和固定框压紧固定。在上述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，所述的固定框由不锈钢上层和软橡胶下层叠加构成；所述的底座由橡胶上层和不锈钢下层叠加构成。因此，本实用新型具有如下优点1.结构简单，操作方便，可方便的制作大量的琼脂糖凝胶；2.本设备生产的琼脂糖凝胶，方便保存和使用；3.本设备生产的琼脂糖凝胶电泳时所需的样品量仅为1 μ 1，大大节省成本；4.方便实验结果的保存和整理。

图1为本实用新型的结构示意图；图2为本实用新型组合后正面示意图；图3是本实用新型的固定装置的结构示意图。图中，1-固定框；2-琼脂糖凝胶模具；3-塑料凝胶板；4-底座；5-固定螺丝；6_固定螺母；201-上部第一凹陷；202-上部第二凹陷；203-上部第三凹陷；204-上部第四凹陷； 205-下部第一凹陷；206-下部第二凹陷；207-下部第三凹陷；208-下部第四凹陷；210-灌胶孔；211-凸起灌胶部。
具体实施方式
如图1所示，一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，包括依次叠加的底座4、塑料凝胶板3、琼脂糖凝胶模具2、固定框1以及将所述底座4、塑料凝胶板3、琼脂糖凝胶模具2、 固定框1固定为一体的固定装置。琼脂糖凝胶模具2包括模具板以及设置在模具板中的用以承胶的凸起灌胶部211、以及设置在凸起灌胶部211中的点样孔装置和与点样孔装置相对应的点样孔标识装置，凸起灌胶部211还设置有灌胶孔210。点样孔装置包括若干上部凹陷以及若干下部凹陷，上部凹陷分别为上部第一凹陷201、上部第二凹陷202、上部第三凹陷203以及上部第四凹陷204 ；下部凸起分别为下部第一凹陷205、下部第二凹陷206、下部第三凹陷207以及下部第四凹陷208。点样孔标识装置包括设置在所述点样孔装置旁的平行对应于上述上部凹陷以及下部凹陷的上部点样孔标识凹陷以及下部点样孔标识凹陷。上部第一凹陷201、上部第二凹陷202、上部第三凹陷203以及上部第四凹陷204的形状分别为阿拉伯数字1、2、3以及4 ；下部第一凹陷205、下部第二凹陷206、下部第三凹陷207以及下部第四凹陷208的形状分别为阿拉伯数字1、2、3以及4 ；上部点样孔标识凹陷以及下部点样孔标识凹陷的形状均为长条状。上部凹陷和下部凹陷之间、以及上部点样孔标识凹陷和下部点样孔标识凹陷之间设置有一长条凹陷。灌胶孔210设置在凸起灌胶部211的对角。固定装置包括设置在上述底座4上的底座固定孔、与底座固定孔相对应并设置在上述固定框1上的固定框1固定孔以及配套的固定螺丝5和固定螺母6 ；固定螺丝5依次穿过底座固定孔、固定框1固定孔以及固定螺母6将上述底座4、塑料凝胶板3、琼脂糖凝胶模具 2、固定框1固定，所述的琼脂糖凝胶模具2和塑料凝胶板3边缘均设置在底座4和固定框 1之间被底座4和固定框1压紧固定。固定框1由不锈钢上层和软橡胶下层叠加构成；所述的底座4由橡胶上层和不锈钢下层叠加构成。将底座4放置于最底层，橡胶上层朝上，然后将琼脂糖凝胶模具2和塑料凝胶板3 拼合后，放置于底座4之上。将固定框1放置于琼脂糖凝胶模具2之上，固定框1的内框与琼脂糖凝胶模具2的凸起灌胶部211相嵌，固定框1上的固定孔与底座4上的固定孔相对应，然后用8对配套的固定螺母6和固定螺丝5将其固定起来。固定完成后琼脂糖凝胶灌注装置即安装完成，如图2所示。本实用新型的使用方法如下按照上文实施方式将琼脂糖凝胶灌注装置组装好后，放置备用。配置所需的琼脂糖凝胶，加热溶解均勻后，待胶液自然冷却至40-50°C之间时，用 25ml注射器抽取20ml胶液。在注射器的注射口处，接上一个200 μ 1的一次性吸头，将组合好的装置直立，将吸头的尖端插入琼脂糖凝胶模具2中的位于下方的灌注孔，保持上端的另一个灌注孔空气流通。缓慢地将胶液推入琼脂糖凝胶模具2中，待胶液完全充满琼脂糖凝胶模具2后，先将上端灌注孔用橡胶塞堵住，然后迅速拔出注射器及吸头，用橡胶塞将此灌注孔堵住。将琼脂糖凝胶模具2平放于桌面，静置30分钟，扭开固定螺母6和固定螺丝5，将固定框1去除。琼脂糖凝胶模具2与塑料凝胶板3由于有琼脂糖凝胶存在已经成为一体， 将其从底座4上取出，沿一角将塑料凝胶板3轻轻揭开，灌注好的凝胶会粘附在塑料凝胶板 3上一起从凝胶模具上剥离下来，此时点样孔标识凹陷和点样孔凹陷在凝胶上形成点样孔标识和点样孔。如果不需立即电泳，可将琼脂糖凝胶模具2与塑料凝胶板3 —起直接放入4°C冰箱，需要电泳时再从冰箱中取出，剥离塑料凝胶板3电泳即可，凝胶放置于4°C冰箱中，可放置3-6个月。应用实例按照常规同工酶抽提方法，收集HeLa、L929、CHO-Kl、CHO四种细胞，每种细胞1个 T25培养瓶，用20μ 1细胞裂解液于冰浴中裂解细胞，获得四种细胞的同工酶酶液。按照上述方法制备琼脂糖凝胶，待凝胶凝固后，将塑料凝胶板3连同琼脂糖凝胶一起从琼脂糖凝胶模具2中揭下，放入电泳槽中。根据凝胶上面的标号1、2、3、4分别将 HeLa, L929、CHO-KU CHO四种细胞的同工酶酶液加入点样孔，每孔1 μ 1。点样后缓慢的在电泳槽中注入电泳缓冲液，160伏电压电泳40分钟。电泳结束后，取出琼脂糖凝胶放入磁盘中，在琼脂糖凝胶表面涂布显色底物，然后放入37°C温箱中显色，20分钟内即显现出清晰条带。按照上述方法，共重复4次，分别选用乳酸脱氢酶(LD)、苹果酸脱氢酶(MD)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)和核苷酸磷酸脱氢酶(NP)四种同工酶显色底物，均得到清晰的条
市ο本文中所描述的具体实施例仅仅是对本实用新型精神作举例说明。本实用新型所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本实用新型的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。尽管本文较多地使用了固定框1，琼脂糖凝胶模具2，塑料凝胶板3，底座4，固定螺丝5，固定螺母6，上部第一凹陷201，上部第二凹陷202，上部第三凹陷203，上部第四凹陷 204，下部第一凹陷205，下部第二凹陷206，下部第三凹陷207，下部第四凹陷208，灌胶孔 210，凸起灌胶部211等术语，但并不排除使用其它术语的可能性。使用这些术语仅仅是为了更方便地描述和解释本实用新型的本质；把它们解释成任何一种附加的限制都是与本实用新型精神相违背的。
权利要求1.一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，其特征在于包括依次叠加的底座(4)、塑料凝胶板(3)、琼脂糖凝胶模具(2)、固定框(1)以及将所述底座(4)、塑料凝胶板(3)、琼脂糖凝胶模具(2)、固定框(1)固定为一体的固定装置。
2.根据权利要求1所述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，其特征在于所述的琼脂糖凝胶模具(2)包括模具板以及设置在模具板中的用以承胶的凸起灌胶部(211)、 以及设置在凸起灌胶部(211)中的点样孔装置和与点样孔装置相对应的点样孔标识装置， 凸起灌胶部(211)还设置有灌胶孔(210)。
3.根据权利要求2所述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，其特征在于所述的点样孔装置包括若干上部凹陷以及若干下部凹陷，所述的上部凹陷分别为上部第一凹陷 (201)、上部第二凹陷(202)、上部第三凹陷(203)以及上部第四凹陷(204)；所述的下部凸起分别为下部第一凹陷(205)、下部第二凹陷(206)、下部第三凹陷(207)以及下部第四凹陷(208)。
4.根据权利要求3所述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，其特征在于所述的点样孔标识装置包括设置在所述点样孔装置旁的平行对应于上述上部凹陷以及下部凹陷的上部点样孔标识凹陷以及下部点样孔标识凹陷。
5.根据权利要求3所述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，其特征在于所述的上部第一凹陷(201)、上部第二凹陷(202 )、上部第三凹陷(203 )以及上部第四凹陷(204)的形状分别为阿拉伯数字1、2、3以及4;所述的下部第一凹陷(205)、下部第二凹陷(206)、下部第三凹陷(207)以及下部第四凹陷(208)的形状分别为阿拉伯数字1、2、3以及4 ；所述上部点样孔标识凹陷以及下部点样孔标识凹陷的形状均为长条状。
6.根据权利要求3所述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，其特征在于所述的上部凹陷和下部凹陷之间、以及上部点样孔标识凹陷和下部点样孔标识凹陷之间设置有一长条凹陷。
7.根据权利要求2所述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，其特征在于灌胶孔 (210)设置在凸起灌胶部(211)的对角。
8.根据权利要求1所述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，其特征在于所述的固定装置包括设置在上述底座(4)上的底座固定孔、与底座固定孔相对应并设置在上述固定框(1)上的固定框固定孔以及配套的固定螺丝(5)和固定螺母(6);固定螺丝(5)依次穿过底座固定孔、固定框固定孔以及固定螺母(6)将上述底座(4)、塑料凝胶板(3)、琼脂糖凝胶模具(2 )、固定框(1)固定，所述的琼脂糖凝胶模具(2 )和塑料凝胶板(3 )边缘均设置在底座(4)和固定框(1)之间被底座(4)和固定框(1)压紧固定。
9.根据权利要求1所述的一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置，其特征在于所述的固定框(1)由不锈钢上层和软橡胶下层叠加构成；所述的底座(4)由橡胶上层和不锈钢下层叠加构成。
专利摘要本实用新型提供了一种同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置。本同工酶琼脂糖凝胶电泳制胶装置包括包括依次叠加的底座(4)、塑料凝胶板(3)、琼脂糖凝胶模具(2)、固定框(1)以及将所述底座(4)、塑料凝胶板(3)、琼脂糖凝胶模具(2)、固定框(1)固定为一体的固定装置。本实用新型具有如下优点1.结构简单，操作方便，可方便的制作大量的琼脂糖凝胶；2.本设备生产的琼脂糖凝胶，方便保存和使用；3.本设备生产的琼脂糖凝胶电泳时所需的样品量仅为1μl，大大节省成本；4.方便实验结果的保存和整理。
文档编号G01N27/447GK202041503SQ20112012568
公开日2011年11月16日 申请日期2011年4月26日 优先权日2011年4月26日
发明者李英霞, 沈超, 郑从义 申请人:武汉大学