专利名称：一种阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素的含量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素的含量测定，特别是以药用辅料聚卡波菲(P0IycarbopHil)为缓释基质的阿奇霉素缓释滴眼液的中阿奇霉素的含量测定方法。阿奇霉素为15元环大环内酯类抗生素，抗菌谱广，除了对大部分细菌有抗菌作用外，对衣原体、支原体也有较好的活性。作用机制与红霉素相同，主要与细菌核糖体的50S 亚单位结合，抑制依赖于RNA的蛋白合成。临床广泛用于化脓性链球菌引起的急性咽炎、急性扁桃体炎；敏感细菌引起的鼻窦炎、中耳炎、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作；肺炎链球菌、流感嗜血杆菌以及肺炎支原体所致的肺炎；沙眼衣原体及非多种耐药淋病奈瑟菌所致的尿道炎和宫颈炎；敏感细菌引起的皮肤软组织感染。美国FDA于2007. 4. 27批准Inspire医药公司的I %阿奇霉素滴眼液(商品名 AzaSite )上市，用于治疗细菌性结膜炎。该制剂采用缓释药物传输技术DuraSite，可加强抗生素停留在组织表面的时间，从而达到每天用药I次的缓释效果，目前市售AzaSite 1% 阿奇霉素滴眼液的缓释基质为药用辅料聚卡波菲。聚卡波菲属聚丙烯酸类高分子的一种，是丙烯酸与丁二烯乙二醇共聚得到的一种轻度交联的网状高分子聚合物。分子量大于106，分子结构式聚卡波菲为白色粉末状固体，不溶于水，亦不溶于强酸强碱。1%水分散体的pH值为3. 5-4.0。聚卡波菲具有吸水膨胀性，每克吸水量可达62g(USP24);其溶胀性受pH值的影响，酸性条件下，能够吸收自身重量10倍的水分，在pH值4以上溶胀率显著增加；中性条件下，可吸收自身重量70倍的水分。聚卡波菲的溶胀性还受离子强度的影响，随着离子强度的增加溶胀率降低，二价金属离子能够改变这种溶胀平衡，但有钠离子存在时，影响较小。由于阿奇霉素缓释滴眼液中含有上述的高分子聚合物辅料，且不能直接滤除，因此不能直接进入色谱柱进行高效液相色谱法测定药物含量。现有技术人员对样品处理方法进行了多项研究，处理方法包括(I)增强离子强度法依据聚卡波菲的结构特性，试图通过改变离子强度来使聚卡波菲变性从而达到去除的目的，但去除聚卡波菲的同时，主药也被大量沉淀，回收率极低，无法满足测定要求；(2)透析法将阿奇霉素缓释滴眼液装入
背景技术：
透析袋中，置适量溶质中透析，无法将主药全部透出，回收率低，无法满足测定要求；(3)萃取法采用三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂萃取主药，结果是主药被降解，无法采用；
(4)超滤法将阿奇霉素缓释滴眼液适当稀释，通过超滤膜，同样是回收率低，无法满足测定要求。因此，现有的样品处理方法均不能准确检测阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素的含量。

发明内容
针对现有技术的上述缺陷，发明人提供一种以聚卡波菲为缓释介质的阿奇霉素滴眼液中阿奇霉素含量测定方法。本发明的技术方案如下一种阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素含量的测定方法，包括如下步骤(I)采用有机溶剂与缓冲液按体积比(40 90) (60 20)配制流动相，所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈之一或组合，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液浓度为 O. 01mol/L-0. 04mol/L ;流动相的 pH 值为 5-10 ；(2)用步骤(I)配制的流动相分别溶解阿奇霉素滴眼液样品和对照品，所述流动相与样品的体积比为(5 10) I ;所述流动相与对照品的体积比为(5 10) I)；所述样品是以聚卡波菲为缓释基质的阿奇霉素缓释滴眼液；所述对照品是阿奇霉素标准品；(3)按照高效液相色谱法测定阿奇霉素的含量，设置流动相流速为I. Oml/min，检测波长为210nm ;将步骤⑵配制的样品溶液、对照品溶液过滤后分别进样，记录色谱图。根据本发明优选的，所用高效液相色谱仪的色谱柱为)Cterra MS C185 μ m 150mmX4. 6mm色谱柱,色谱柱柱温为室温,进样体积为20 μ I。根据本发明优选的，流动相的pH值调节剂为磷酸。根据本发明优选的，所述流动相中有机溶剂与缓冲液的体积比为(50 80) (50 20)，进一步优选为(60 70) (40 30)。采用该配比可以保证阿奇霉素缓释滴眼液中的聚卡波非缓释基质的最大化沉淀，同时对阿奇霉素主药无影响，可以使阿奇霉素的回收率达到99%以上。根据本发明优选的，所述流动相的pH值为6-8，进一步优选pH值为8。本发明人意外发现在PH偏碱性的情况下，主药稳定性好、回收率高，因此将其作为流动相的必须条件之一。根据本发明优选的，所述磷酸盐缓冲液为磷酸氢二钾缓冲液、磷酸二氢钾缓冲液或磷酸氢二钠缓冲液、磷酸二氢钠缓冲液之一或组合。根据本发明优选的，所述磷酸盐缓冲液的浓度为O. Olmol/L-O. 02mol/L，优选 O. 02mol/L。本发明人发现磷酸盐缓冲液的浓度过高或过低都不能使阿奇霉素缓释滴眼液中的聚卡波非完全沉淀，影响样品进液相柱。根据本发明优选的，所述的流动相与样品的体积比为5 I。本发明人发现采用本发明所述的比例，可使阿奇霉素缓释滴眼液中的聚卡波非完全沉淀，主药回收率达到99%以上。根据本发明优选的，所述流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液或乙醇-乙腈-磷酸盐缓冲液。本发明人发现采用上述优选的缓冲液及有机溶剂作流动相时，其检测结果最为准确，且成本较低，能够有效准确地检测阿奇霉素缓释滴眼液的主药阿奇霉素的含量。
根据本发明进一步优选的，所述流动相为下列之一甲醇-乙腈-O. 02mol/L的磷酸氢二二钾缓冲液，体积比501040，pH =7. 2 ；
甲醇-乙腈-O. 02mol/L的磷酸氢二二钠缓冲液，体积比205030，pH =7. 2 ；
甲醇-乙腈-O. 02mol/L的磷酸氢二二钾缓冲液，体积比602020，pH =6. 8 ；乙醇-乙腈-O. 01mol/L的磷酸二氢钠，体积比20 30 50，pH = 8。根据色谱图的峰面积，按外标法计算样品的浓度即可。例如按A对照品浓度/B 样品浓度=S对照峰面积/S样品峰面积，求B样品的浓度，再根据稀释倍数换算成样品中
阿奇霉素含量。本发明的技术特点本发明的方法采用特定比例的有机溶剂与缓冲液的混合物作为流动相，能够使得阿奇霉素缓释滴眼液中所采用的高分子物质被沉淀从而可以过微孔滤膜后进高效液相色谱仪。此沉淀过程不影响主药的回收率，并且主药阿奇霉素和辅料的色谱峰完全分离开来，因此检测数据准确。本发明的方法用于以聚卡波菲为缓释基质的阿奇霉素缓释滴眼液的含量检测。综上所述，采用本发明所述的高效液相色谱法分析阿奇霉素缓释滴眼液的含量， 解决了现有的检测方法中，制剂无法直接进行检测的问题，并且不会影响最终的检测结果， 降低了检测所需的时间和成本。与其他的检测方法相比，本发明所提供的含量测定方法具有专属性强、准确度高，操作简便等优点。


图I为实施例2条件下的色谱图；1号峰为阿奇霉素峰，2号峰为阿奇霉素的一个杂质峰，其余均为辅料峰。a为辅料图谱，b为阿奇霉素滴眼液样品图谱。图2为阿奇霉素对照品图谱。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做详细说明。实施例中的仪器、试剂均为市购产品。实施例中的阿奇霉素滴眼液样品是按照AzaSite 的处方配制1%阿奇霉素滴眼液；所述对照品是阿奇霉素标准品；仪器与条件如下高效液相色谱仪waters1525-717-2487色谱柱XterraMS C185 μ m 1 50mm X 4. 6mm流速1.Oml/min ；检测波长2IOnm；柱温室温；进样体积20 μ I。依据对照品的浓度、峰面积和测试样品的峰面积可计算出测试样品的浓度。按A 对照品浓度/B样品浓度=S对照峰面积/S样品峰面积，求B样品的浓度，再根据稀释倍数换算成样品中阿奇霉素含量。实施例I
流动相甲醇-乙腈-O. 02mol磷酸氢二钾缓冲液(用磷酸调pH = 7. 2)= 50 10 40 ；测定步骤称取阿奇霉素缓释滴眼液样品5g，置于25ml容量瓶中，加入流动相至容量瓶一半时，轻轻振摇，定容至刻度。称取阿奇霉素对照品50mg，置于25ml容量瓶中，加入流动相溶解对照品并用流动相稀释至刻度。分别取对照品溶液和样品溶液过O. 22 μ m滤膜后按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。所得色谱图显示在此条件下，阿奇霉素主峰可以和辅料峰完全分离开来。按对照品浓度/样品浓度=对照峰面积/样品峰面积，求出样品的浓度，再根据稀释倍数换算成样品中阿奇霉素含量，测得的阿奇霉素含量是样品标示含量的99. 8%0实施例2流动相甲醇-乙腈-O. 02mol磷酸氢二钠缓冲液体积比(用磷酸调pH = 7. 2)= 20 50 30 ；测定步骤定量称取阿奇霉素缓释滴眼液样品5g,置于25ml容量瓶中，加入流动相至容量瓶一半时，轻轻振摇，定容至刻度。称取阿奇霉素对照品50mg，置于25ml容量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度。分别取对照品溶液和样品溶液过O. 22 μ m滤膜后按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，所得色谱图如附图I所示，可以看出在该条件下阿奇霉素主峰I可以和辅料峰完全分离开来，且阿奇霉素主峰在Ilmin左右。将图I与图2对比可知本方法检测的阿奇霉素缓释滴眼液样品中的活性成分阿奇霉素与阿奇霉素对照品出峰是一致的。按对照品浓度/样品浓度=对照峰面积/样品峰面积，求出样品的浓度，再根据稀释倍数换算成样品中阿奇霉素含量，测得的阿奇霉素含量是样品标示含量的99. 9%。实施例3流动相甲醇-乙腈-O. 02mol磷酸氢二钾缓冲液体积比(用磷酸调pH = 6. 8)= 60 20 20 ；测定步骤定量称取阿奇霉素缓释滴眼液样品5g,置于25ml容量瓶中，加入流动相至容量瓶一半时，轻轻振摇，定容至刻度。称取阿奇霉素对照品50mg，置于25ml容量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度。分别取对照品溶液和样品溶液过O. 22 μ m滤膜后按上述条件进行高效液相色谱分析，所得图谱显示该条件下阿奇霉素主峰可以和辅料峰完全分离开来。按对照品浓度/样品浓度=对照峰面积/样品峰面积，求出样品的浓度，再根据稀释倍数换算成样品中阿奇霉素含量，测得的阿奇霉素含量是样品标示含量的99. 6%。实施例4流动相乙醇-乙腈-O. Olmol磷酸二氢钠体积比(用磷酸调pH = 8)= 20 30 50 ；实验步骤定量称取阿奇霉素缓释滴眼液样品5g,置于25ml容量瓶中，加入流动相至容量瓶一半时，轻轻振摇，定容至刻度。称取阿奇霉素对照品50mg，置于25ml容量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度。分别取对照品溶液和样品溶液过O. 22 μ m滤膜后按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。在该条件下阿奇霉素主峰可以和辅料峰完全分离开来。按对照品浓度/样品浓度=对照峰面积/样品峰面积，求出样品的浓度，再根据稀释倍数换算成样品中阿奇霉素含量，测得的阿奇霉素含量是样品标示含量的99. 7%。由上述各个实施例可见，阿奇霉素主峰可以和辅料峰完全分离，本方法主药的回收率高，采用本发明的检测方法可以有效的检出阿奇霉素滴眼液中阿奇霉素的含量，准确度高，简单易行。
权利要求
1.一种阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素含量的测定方法，包括如下步骤(1)采用有机溶剂与缓冲液按体积比(40 90) (60 20)配制流动相，所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈之一或组合，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液浓度为O.01mol/L-0. 04mol/L ;流动相的 pH 值为 5-10 ；(2)用步骤(I)配制的流动相分别溶解阿奇霉素滴眼液样品和对照品，所述流动相与样品的体积比为(5 10) I;所述流动相与对照品的体积比为(5 10) I ；所述样品是以聚卡波菲为缓释基质的阿奇霉素缓释滴眼液；所述对照品是阿奇霉素标准品；(3)按照高效液相色谱法测定阿奇霉素的含量，设置流动相流速为l.Oml/min，检测波长为210nm;将步骤⑵配制的样品溶液、对照品溶液过滤后分别进样，记录色谱图。
2.如权利要求I所述的阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素含量的测定方法，其特征在于采用高效液相色谱仪的色谱柱为Xterra MS C18 5 μ m 150mmX 4. 6mm色谱柱,色谱柱柱温为室温，进样体积为20 μ I。
3.如权利要求I所述的阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素含量的测定方法，其特征在于所述流动相中有机溶剂与缓冲液的体积比为(50 80) (50 20)。
4.如权利要求I所述的阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素含量的测定方法，其特征在于所述流动相中有机溶剂与缓冲液的体积比为(60 70) (40 30)。
5.如权利要求I所述的阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素含量的测定方法，其特征在于所述流动相的PH值为6-8 ;优选为流动相的pH值为8。
6.如权利要求I或5所述的阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素含量的测定方法，其特征在于流动相的PH值调节剂为磷酸。
7.如权利要求I所述的阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素含量的测定方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲液为磷酸氢二钾缓冲液、磷酸二氢钾缓冲液或磷酸氢二钠缓冲液、磷酸二氢钠缓冲液之一或组合。
8.如权利要求I所述的阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素含量的测定方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲液的浓度为O. Olmol/L-O. 02mol/L ;优选为O. 02mol/L。
9.如权利要求I所述的阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素含量的测定方法，其特征在于所述流动相为下列之一甲醇-乙腈-O. 02mol/L的磷酸氢二钾缓冲液，体积比50 10 40，pH = 7. 2 ;或，甲醇-乙腈-O. 02mol/L的磷酸氢二钠缓冲液，体积比20 : 50 : 30，pH = 7. 2 ;或，甲醇-乙腈-O. 02mol/L的磷酸氢二钾缓冲液，体积比60 : 20 : 20，pH = 6. 8 ;或，乙醇-乙腈-O. Olmol/L的磷酸二氢钠，体积比20 : 30 : 50, pH = 8。
10.如权利要求I所述的阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素含量的测定方法，其特征在于所述的流动相与样品的体积比为5 I。
全文摘要
本发明涉及一种阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素的含量测定方法。采用有机溶剂与缓冲液按体积比(40～90)∶(60～20)配制流动相，流动相的pH值为5-10；用该流动相分别溶解阿奇霉素滴眼液样品和对照品，按照高效液相色谱法测定阿奇霉素的含量，将配制的样品溶液、对照品溶液分别进样，记录色谱图。本发明采用特定比例的流动相溶解样品，使得阿奇霉素缓释滴眼液中含有的高分子聚合物聚卡波菲能够完全沉淀而不影响药物的含量测定，并能将主药阿奇霉素和辅料的色谱峰完全分离开来，提高检测的准确性。
文档编号G01N30/02GK102590392SQ20121006679
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月14日 优先权日2012年3月14日
发明者张明会, 李磊, 李红英, 王晶翼, 邱丽明 申请人:齐鲁制药有限公司