专利名称：一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种试剂盒，特别是涉及一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒。
背景技术：
苏丹红是一种人工合成的红色染料，常作为一种工业染料，被广泛用于如溶剂、 油、蜡、汽油的增色以及鞋、地板等增光方面。它的化学成份中含有一种叫萘的化合物，该物质具有偶氮结构，由于这种化学结构的性质决定了它具有致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用，国际癌症研究机构将苏丹红归为三类致癌物。目前对苏丹红的检测依赖高效液相色谱法和液相色谱_质谱法以及少数需从国外进口的检测平台，这些检测方法的前处理过程复杂，检测时间长，检测费用高，仪器设备较贵及缺乏自主知识产权等缺陷严重制约了我国对食品安全有害小分子的有效检测，危害了广大人民群众的身体健康及相关检测技术和行业的发展。因此，利用先进的技术平台，建立具有自主知识产权的检测试剂和方法，解决目前具有严重危害的食品安全有害小分子检测难及多种检测试剂和方法依赖国外进口问题已迫在眉睫。

实用新型内容针对上述不足，本实用新型提供一种使用成本低、操作方便、快速检测食品中苏丹红含量的发光酶联免疫分析试剂盒。本实用新型的技术方案是这样的一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，包括盒体、七组试剂瓶、一块酶联板，其中，塑料泡沫板设置在盒体内，塑料泡沫板上设有多个试剂瓶下凹槽，多个试剂瓶下凹槽的高度是所对应的试剂瓶高度的1/3 3/4，各组试剂瓶放置在多个试剂瓶下凹槽内。上述的一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，其特征在于，所述的七组试剂瓶分别为第一组试剂瓶是装有样品标准品的试剂瓶，共2瓶，第二组试剂瓶是装有标准溶液的试剂瓶，共6瓶，第三组试剂瓶是装有样品稀释液的试剂瓶，共1瓶，第四组试剂瓶为装检测溶液的试剂瓶，共2瓶，第五组试剂瓶是洗涤原液试剂瓶，共1瓶，第六组试剂瓶是装有底物溶液的试剂瓶，共1瓶，第七组试剂瓶是装有终止液的试剂瓶，共1瓶。上述的一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，其中，所述的七组试剂瓶分别为第一组试剂瓶是绿色瓶盖、棕色瓶身的试剂瓶，第二组试剂瓶是白色瓶盖、棕色瓶身的试剂瓶，第三组试剂瓶是蓝色瓶盖、棕色瓶身的试剂瓶，第四组试剂瓶是白色瓶盖、白色瓶身的试剂瓶，第五组试剂瓶是棕色瓶盖、白色瓶身的试剂瓶，第六组试剂瓶是黄色瓶盖、白色瓶身试剂瓶，第七组试剂瓶黑色瓶盖、白色瓶身的试剂瓶。上述的一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，其中，所述的酶联板是可拆卸的96 孔酶联板，酶联板的微孔上包被用牛血清白蛋白藕联的苏丹红，制成固相抗原。上述的一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，其中，所述的多个试剂瓶下凹槽的大小与所对应的试剂瓶大小相匹配。 上述的一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，其中，所述的盒体为硬质盒体。与现有技术相比，本实用新型的有益效果是1)与常规技术高效液相色谱法和液相色谱_质谱法相比，无需具有高效液相仪或色谱_质谱联用仪等大型仪器设备，本试剂盒具有成本低的优点；2)与常规技术高效液相色谱法和液相色谱-质谱法相比，操作人员无需经过专门的培训，本试剂盒具有操作简单、方便的优点；3)由于本试剂盒原理采用的是酶联反应，其灵敏度比色谱法高；4)本试剂盒对样品前处理要求低，处理条件简单，可广泛应用于食品及医药卫生行业。以下结合附图和具体实施例本实用新型的试剂盒作进一步的说明，但不构成对本实用新型的任何限制。

图1是本实用新型试剂盒示意图；图2是本实用新型打开示意图；图3是本实用新型的塑料泡沫板示意图；图4是本实用新型的酶联板的示意图。其中盒体1、1块酶联板2、塑料泡沫板3、多个试剂瓶下位槽4，第一组试剂瓶5、 第二组试剂瓶6、第三组试剂瓶7、第四组试剂瓶8、第五组试剂瓶9、第六组试剂瓶10、第七组试剂瓶11、第8组12。
具体实施方式
实施例1如图1至4所示，本实用新型一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，包括硬质盒体 1和8组试剂瓶，盒体1内设有塑料泡沫板3和1块96孔酶联板2，塑料泡沫板2上设有多个试剂瓶下位槽4，酶联板2的微孔2a上包被用牛血清白蛋白藕联的苏丹红，制成固相抗原。试剂瓶下位槽4的大小与所对应的试剂瓶大小相匹配，多个试剂瓶下位槽4的高度是所对应的试剂瓶高度的1/3 3/4，各组试剂瓶放置在多个试剂瓶下位槽4内；其中，8组试剂瓶分别为第一组试剂瓶5为装有样品标准品的试剂瓶，共2瓶，瓶内样品标准品为半冻干制品，每瓶临用前以样品稀释液稀释至Iml作为原液，充分溶解，其浓度为lmg/L，第二组试剂瓶6为装有标准溶液的试剂瓶，共6瓶，各瓶内标准溶液的浓度分别为1000 μ g/L， 500 μ g/L, 250 μ g/L, 125 μ g/L, 62. 5 μ g/L, 31. 2 μ g/L, 15. 6 μ g/L, 0 μ g/L,第三组试剂瓶 7 为装有对照品的试剂瓶，共2瓶，其中一瓶为原液直接作为标准浓度1000 μ g/L，另一瓶样品稀释液磷酸盐缓冲液直接作为标准浓度ο μ g/L ；第四组试剂瓶8为装有样品稀释液磷酸盐缓冲液的试剂瓶，共1瓶，第五组试剂瓶9为装检测溶液的试剂瓶，共2瓶，其中一瓶装有检测溶液A anticalin,另一瓶是装有检测溶液B辣根过氧化物酶HRP标记的抗噬菌体抗体；第六组试剂瓶10为洗涤原液试剂瓶，共1瓶，第七组试剂瓶11为装有底物溶液鲁米诺溶液的试剂瓶，共1瓶，第八组试剂瓶12是装有终止液硫酸溶液的试剂瓶，共1瓶。实验例1实验原理本试剂盒应用发光酶标免疫分析法测定样品中苏丹红含量。用牛血清白蛋白(BSA)藕联的苏丹红包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入苏丹红待检样品、能与苏丹红特异性结合的anticalin分子标准品、HRP标记的抗噬菌体抗体，经过彻底洗涤后用底物鲁米诺显色。鲁米诺在过氧化物酶的催化下生成激发态中间体，当其回到基态时发光，光强度和样品中的苏丹红呈负相关，其检测波长为425nm，发光免疫分析仪检测，计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板1 一块(96孔，可拆卸)。2.标准品(冻干品)2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至lml，充分溶解，其浓度为lmg/L,再做系列倍比稀释，分别稀释为1000 μ g/L，500 μ g/L，250 μ g/L，125 μ g/L， 62. 5 μ g/L, 31. 2 μ g/L, 15. 6 μ g/L, 0 μ g/L,原液直接作为标准浓度1000 μ g/L，样品稀释液 3直接作为标准浓度0 μ g/L。
3.样品稀释液1瓶，20ml/瓶。4.检测溶液A :1瓶，100 μ 1/瓶。临用前以检测稀释液按1 1000稀释，稀释前
根据预先计算好的每次实验所需总量配置。5.检测溶液B :1瓶，100 μ 1/瓶。临用前以检测稀释液按1 1000稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需总量配置。6.检测稀释液2瓶，IOml/瓶。7.洗涤原液1瓶，30ml/瓶。使用时用蒸馏水稀释25倍。8.底物溶液1瓶，IOml/瓶。9.终止液1 瓶，IOml/ 瓶。其中所述的样品稀释液包含磷酸盐缓冲液；所述检测溶液A是anticalin ；所述检测溶液B是辣根过氧化物酶HRP标记的抗噬菌体抗体；所述洗涤原液包含磷酸盐缓冲液；所述底物溶液是鲁米诺溶液； 所述终止液是硫酸溶液；所述酶联板是96孔酶联板。标本的采集及保存采集食品样品，干燥管中用样品稀释液充分溶解，室温IOOOg离心10分钟，取上清即可检测，或将样品-20 V保存以后检测，但应避免反复冻融。操作步骤各种试剂在使用前平衡至室温。1.加样分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样品IOOul。2.不用洗涤，每孔加检测溶液A工作液100ul，37°C，轻轻震荡60分钟。3.洗涤工作液洗板3次，每次350ul/每孔，甩干。4.每孔加检测溶液B工作液lOOul，37°C，60分钟，洗板5次，甩干。5.依序每孔加底物溶液90ul，37°C避光显色10分钟。6.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应。发光免疫分析仪在425nm波长测量各孔发光强度。[0053]特异性本试剂盒可同时检测苏丹红各个分型，且与其他蛋白无交叉反应。计算以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，光强度为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的光强度值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物 的浓度与光强度值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的光强度值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。检测范围15μ g/L 1000 μ g/L本实用新型并不限于以上实施方式，只要是本说明书及权利要求书中提及的方案均是可以实施的。
权利要求1.一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，其特征在于，包括盒体(1)、七组试剂瓶、一块酶联板(2)，其中，塑料泡沫板(3)设置在盒体内，塑料泡沫板上设有多个试剂瓶下凹槽 (4)，多个试剂瓶下凹槽的高度是所对应的试剂瓶高度的1/3 3/4，各组试剂瓶放置在多个试剂瓶下凹槽(4)内。
2.根据权利要求1所述的一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，其特征在于，所述的七组试剂瓶分别为第一组试剂瓶(5)是装有样品标准品的试剂瓶，共2瓶，第二组试剂瓶 (6)是装有标准溶液的试剂瓶，共6瓶，第三组试剂瓶(7)是装有样品稀释液的试剂瓶，共1 瓶，第四组试剂瓶(8)为装检测溶液的试剂瓶，共2瓶，第五组试剂瓶(9)是洗涤原液试剂瓶，共1瓶，第六组试剂瓶(10)是装有底物溶液的试剂瓶，共1瓶，第七组试剂瓶(11)是装有终止液的试剂瓶，共1瓶。
3.根据权利要求2所述的一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，其特征在于，所述的七组试剂瓶分别为第一组试剂瓶(5)是绿色瓶盖、棕色瓶身的试剂瓶，第二组试剂瓶(6) 是白色瓶盖、棕色瓶身的试剂瓶，第三组试剂瓶(7)是蓝色瓶盖、棕色瓶身的试剂瓶，第四组试剂瓶(8)是白色瓶盖、白色瓶身的试剂瓶，第五组试剂瓶(9)是棕色瓶盖、白色瓶身的试剂瓶，第六组试剂瓶(10)是黄色瓶盖、白色瓶身试剂瓶，第七组试剂瓶(11)黑色瓶盖、白色瓶身的试剂瓶。
4.根据权利要求1所述的一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，其特征在于，所述的酶联板(2)是可拆卸的96孔酶联板，酶联板的微孔上包被用牛血清白蛋白藕联的苏丹红， 制成固相抗原。
5.根据权利要求1所述的一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，其特征在于，所述的多个试剂瓶下凹槽(4)的大小与所对应的试剂瓶大小相匹配。
6.根据权利要求1所述的一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，其特征在于，所述的盒体(1)为硬质盒体。
专利摘要一种苏丹红发光酶联免疫分析试剂盒，旨在提供一种使用成本底、操作方便、灵敏度高、应用范围广的试剂盒，属于食品化学检测技术领域；其技术要点，包括盒体、7组试剂瓶、1块酶联板和塑料泡沫板，其中，塑料泡沫板设置在盒体内，塑料泡沫板上设有多个试剂瓶下凹槽，多个试剂瓶下凹槽的高度是所对应的试剂瓶高度的1/3～3/4，各组试剂瓶放置在多个试剂瓶下凹槽内；本实用新型可用食品中苏丹红含量的检测。
文档编号G01N33/53GK202057602SQ20112008165
公开日2011年11月30日 申请日期2011年3月24日 优先权日2011年3月24日
发明者张宏斌 申请人:广州济恒医药科技有限公司