专利名称：噻虫胺抗原、抗体及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及噻虫胺抗原、抗体及其应用，属于免疫化学分析技术领域。专用于噻虫胺多克隆抗体的制备，及其在环境和农产品中噻虫胺残留的酶联免疫吸附分析方法(ELISA)。
背景技术：
噻虫胺(clothianidin),化学名I-(2_氯-I, 3_噻唑_5_基甲基)_3_甲基_2_硝基胍，由日本住化武田/拜耳联合开发，于2001年12月在日本获得登记，化学结构见下图，分子式=C6H8CIN5O2S,相对分子质量249. 68，熔点176. 8°C。噻虫胺是含噻唑环的新型烟碱类杀虫剂，主要作用于昆虫神经系统突触后膜的烟碱型乙酰胆碱受体。噻虫胺以其新颖的作用机制、广谱高效的杀虫活性、灵活的使用方法，被广泛应用于防治危害水稻、蔬菜、果园、茶叶等作物的半翅目、鞘翅目、双翅目和某些鳞翅目害虫。人们长期食用被噻虫胺污染 的农产品会造成内分泌系统的紊乱甚至导致癌症的发生。此外，噻虫胺对蜜蜂和家蚕高毒。因而，需要一种灵敏、快速、选择性的残留检测方法。
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H3C-N 人
HH S Cl
噻虫胺美国发布部分蔬菜和水果的噻虫胺最大允许残留量为O. 05mg/kg。目前噻虫胺残留检测方法采用仪器分析方法，如液相色谱分析法、气相色谱分析法、液相-质谱连用分析法等。这些仪器分析方法灵敏准确，但检测仪器昂贵、样品前处理较繁琐、检测费时费力、难以满足大量样品快速简便检测的需要。免疫检测方法具有快速、廉价、简便、灵敏、特异的优点，在大量样品快速筛选和现场监测中显示出独特优势。ELISA是一种将酶催化反应和免疫反应相结合的免疫标记测定技术，有酶催化反应的高灵敏度和抗原抗体反应的高特异性，在灵敏度方面有很大的优势。ELISA作为一种快速灵敏的检测方法，在许多小分子免疫分析中已得到较成熟的应用。通过化学合成噻虫胺半抗原和人工抗原，制备针对噻虫胺的特异性抗体，建立噻虫胺免疫学检测方法。该发明方法的完成，将解决噻虫胺半抗原合成，抗体制备等关键技术，建立噻虫胺的ELISA快速检测技术。该发明不仅为食品安全检测，而且为我国农产品等的出入境检测、环境监测部门的水域监测提供有效的技术手段和检测方法。对我国农产品的可持续发展和食品安全问题具有重要的现实意义和重要的社会、经济价值。目前国内外尚未见有关噻虫胺的免疫学研究报道。

发明内容
技术问题
本发明的目的在于提供一种噻虫胺的酶联免疫吸附分析方法，对环境和农产品中噻虫胺的残留进行准确、灵敏、快速、简单的检测。技术方案本发明噻虫胺残留ELISA检测方法，包括I人工半抗原制备将8mmol (O. 45g)K0H溶解于20mL乙醇中，加入4mmol (O. 42g) β_巯基丙酸搅拌，待完全溶解后加入4mmol (I. 02g)噻虫胺，80°C搅拌回流2h。反应结束后，过滤反应液，滤液减压浓缩得淡黄色固体。加入50mL水，用lmol/L的盐酸调节pH = 2. O。用乙酸乙酯萃取，有机相经水洗和无水硫酸钠干燥，减压浓缩得白色粉末状物质，经甲醇重结晶，得白色晶体。噻虫胺人工半抗原化学名为3-(5-((3-甲基-2-硝基胍)-基甲基)噻唑-2-巯基)
丙酸，分子结构如下·
权利要求
1.噻虫胺多克隆抗体，是由免疫新西兰大白兔获得的。
2.权利要求I所述噻虫胺抗体的制备方法，包括 1)人工半抗原，其特征在于它的分子结构式为
3.权利要求I所述噻虫胺多克隆抗体酶联免疫吸附分析方法(ELISA)建立，及在检测环境和农产品中噻虫胺残留量中的应用。
全文摘要
本发明涉及噻虫胺抗原、抗体及其应用，属于免疫化学分析技术领域。专用于噻虫胺特异性多克隆抗体制备和酶联免疫吸附分析方法(ELISA)，及其在环境和农产品中噻虫胺残留的高灵敏快速检测。通过对噻虫胺噻唑环上氯原子进行取代，合成了半抗原，化学名为3-(5-((3-甲基-2-硝基胍)-基甲基)噻唑-2-巯基)丙酸，将其分别于牛血清蛋白和卵清蛋白偶联制备免疫抗原和包被抗原。用免疫抗原免疫新西兰大白兔，获得噻虫胺的特异性多克隆抗体。建立的ELISA线性范围为1.1μg/L-2mg/L，检测限为1.1μg/L。本发明半抗原合成技术简便可行，抗体特异性高，适用于环境和农产品中大批量样品检测和现场监测。
文档编号G01N33/53GK102875671SQ20121036382
公开日2013年1月16日 申请日期2012年9月27日 优先权日2012年9月27日
发明者王鸣华, 李明, 施海燕 申请人:南京农业大学