专利名称：一种高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种色谱检测方法，具体涉及一种高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量的方法。
背景技术：
高效液相色谱法是仪器分析领域被普遍使用的方法，它通过被分析物和色谱填料的各种相互作用关系实现分离并利用被分析物的物理或化学性质实现高精度的定性定量分析。目前广泛应用于化学、化工、高分子、生物、食品、医药等领域。抗坏血酸是一种水溶性维生素，水果和蔬菜中含量丰富。在氧化还原代谢反应中起调节作用，缺乏它可引起坏血病。但是抗坏血酸在水产品中含量的研究较少，有文献用滴定法对其含量做了初步的探究。本发明以条斑紫菜为研究对象，利用高效液相色谱法准确快速测定其中的抗坏血酸的含量。

发明内容
本发明的目的在于提供了一种高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量的方法，从而准确测定其含量，方法操作简单、灵敏度高、重现性好。为了实现上述目的本发明采用如下技术方案高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量的方法，其特征在于包括以下步骤(1)条斑紫菜中抗坏血酸的制备提取取新鲜的条斑紫菜若干，加入0. Olmol/L磷酸二氢钾溶液，勻浆，0. 20-0. 24ym微孔滤膜过滤，待测；(2)配制抗坏血酸的标准溶液，并制作标准曲线；(3)高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量。所述的高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量的方法，其特征在于所述的高效液相色谱法色谱条件为色谱柱AQ-C18，250X4. 6mm, 5 μ m ；流动相0. 01mol/L磷酸二氢钾(PH2.5)-甲醇(95 5，V/V)；检测器波长为265nm ；流速为lml/min，进样体积为 2(^1^，柱温251。本发明的有益效果方法简单，检测精确，尤其是所选色谱柱及流动相能实现样品更好的分析效果。


图1为抗坏血酸标准工作曲线。图2为抗坏血酸标准品色谱图。
具体实施例方式实施例1 高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量的方法，其特征在于包括以下步骤(1)条斑紫菜中抗坏血酸的制备提取取新鲜的条斑紫菜若干，加入0. Olmol/L磷酸二氢钾溶液，勻浆，0. 20-0. 24ym微孔滤膜过滤，待测；(2)配制抗坏血酸的标准溶液，并制作标准曲线；(3)高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量。所述的高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量的方法，其特征在于所述的高效液相色谱法色谱条件为色谱柱AQ-C18，250X4. 6mm, 5 μ m ；流动相0. 01mol/L磷酸二氢钾(PH2.5)-甲醇(95 5，V/V)；检测器波长为265nm ；流速为lml/min，进样体积为 2(^1^，柱温251。实施例2 本发明的具体实验方案1仪器与试剂1. 1 仪器皖仪LC3000B高效液相色谱仪，配备UV3000紫外检测器和LCS3000Q液相色谱工作站；勻质器。AQ-C18，250X4. 6mm，5ym色谱柱。1. 2材料试剂抗坏血酸标准品(纯度>98%)；新鲜条斑紫菜(采自黄海海域)；甲醇(HPLC 级)；超纯水；磷酸二氢钾(分析纯)；0. 22 μ m微孔滤膜。流动相配制0. 01mol/L的磷酸二氢钾溶液，并用磷酸调节pH至2. 5，按照95 5 的体积比将上述溶液与甲醇混合，制成流动相。抗坏血酸母液称取50mg的抗坏血酸，用0. 01mol/L的磷酸二氢钾溶液(pH2. 5) 溶解并定容至100ml容量瓶中，制成500μ g/ml的母液，放于冰箱中备用。2实验步骤2. 1样品制备取2g新鲜的条斑紫菜切碎，加0. 01mol/L的磷酸二氢钾溶液(pH2. 5)适量，勻质， 最后定容至100ml容量瓶中，0. 22 μ m微孔滤膜过滤，待测。2. 2定性试验利用相对保留时间以及标准物质添加法进行定性。比对标准溶液中标准品和样品供试液在相同的色谱条件下的色谱图和相对保留时间；在样品中分别加入适量的标准物质，比较不加标准物质的色谱图，变高的峰和标准品的位置是一致的。2. 3标准曲线制作分别取抗坏血酸母液0. 1、0· 2,0. 4,0. 6,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5、;3ml，用 0. 01mol/L 的磷酸二氢钾溶液(PH2. 5)定容至25ml容量瓶中，制成浓度为2 μ g/ml、4 μ g/ml、8 μ g/ml、 12μ g/ml、20 μ g/ml、30 μ g/ml、40 μ g/ml、50 μ g/ml、60 μ g/ml 的一系列溶液，以上述色谱
条件检测，依次按浓度由高到低的顺序进样(η = 6)，记录数据。以抗坏血酸浓度为横坐标， 以平均峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。线性回归方程为y = 11514X+1858. 2，相关系数为 R2 = 0. 9997抗坏血酸在0. 4 μ g/ml-40 μ g/ml范围内线性关系良好。2. 4样品的测定及重复性试验取上述经处理的样品溶液，依照上述的色谱条件，分别进样6次，记录峰面积。实验结果见下表
权利要求
1.一种高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量的方法，其特征在于包括以下步骤(1)条斑紫菜中抗坏血酸的制备提取取新鲜的条斑紫菜l-3g，加入O.Olmol/L磷酸二氢钾溶液(溶液多少ml )，勻浆，0. 20-0. 24ym微孔滤膜过滤，待测；(2)配制抗坏血酸的标准溶液，并制作标准曲线；(3)高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量。
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量的方法，其特征在于所述的高效液相色谱法色谱条件为色谱柱AQ-C18，250X4. 6mm，5ym ；流动相 0. Olmol/L磷酸二氢钾-甲醇；检测器波长为265nm ；流速为lml/min，进样体积为20 μ L， 柱温25°C。
全文摘要
本发明公开了一种高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量的方法，本方法采用反向高效液相色谱法，其色谱条件为所用的色谱柱为十八烷基键合硅胶为填料的亲水柱(AQ),该色谱柱对极性较强的物质有很好的保留，且能用纯水做为流动相；色谱流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾(pH2.5)-甲醇(955，V/V)；所用检测器为紫外检测器，检测波长为265nm；流速为1ml/min，进样体积为20μL，柱温25℃。本方法可准确方便的测定条斑紫菜中抗坏血酸的含量，具有操作简单、灵敏度高、重现性好的特点。
文档编号G01N30/02GK102507757SQ201110310310
公开日2012年6月20日 申请日期2011年10月14日 优先权日2011年10月14日
发明者尹杨青, 裴波 申请人:安徽皖仪科技股份有限公司