专利名称：利用蚯蚓生物标志物诊断土壤污染状况的方法
技术领域：
本发明涉及一种土壤污染监测的方法，具体说是土壤污染状况的蚯蚓生物标志物 诊断方法，即利用蚯蚓体内的氧化损伤指标监测土壤污染状况，包括重金属污染和有机物 污染等。
背景技术：
近年来，随着工农业生产的迅速发展，大量污染物通过多种途径进入土壤环境中 并共存，我国面临的土壤污染呈日益加剧趋势。土壤是环境的重要组成部分，同时也是各种 污染物质的最终载体，承担着环境中大约90%来自各方面的污染物质，当外来的污染物超 过土壤的自净能力时，就会破坏土壤的正常机能，使之失去自然生态平衡，成为我们生活中 的化学定时炸弹，从而严重影响农产品产量和品质。污染土壤的污染物的种类繁多，既有无 机污染物，同时存在无机污染物。这些污染物主要来自工业三废和农药、化肥的大量使用， 它们可通过灌溉水进入土壤，也可通过大气污染、空中的颗粒物(含重金属和致癌物质等) 沉降造成。这些污染物不是以单一形式存在土壤环境中，而是同时存在，构成复合污染，使土 壤的污染问题更加严重和复杂。采用化学分析方法仅能检测土壤中某些部分污染物含量， 但无法全面评价土壤健康程度和污染状况，目前普遍采用生物监测方法来评价土壤总体健 康程度和污染状况。蚯蚓作为一种古老的生物在自然界已经存在6亿年之久，是土壤中生物量最大的 动物类群之一，是土壤系统中重要的组成部分，其挖掘和饮食活动有助于显著增加水分渗 入，土壤通气性，土壤团粒结构的稳定。此外，蚯蚓通过形成了有机质有助于增加表层土壤 肥力。这些使蚯蚓成为很好的表征土壤污染的指示生物。蚯蚓的生理代谢及生命活动在一 定程度上反映了土壤的生态功能，因此可以应用生物标志物来评价土壤生态功能并判定土 壤污染状况和环境质量，某些生物标志物还可对复合污染的效应做出客观的判断，这是化 学检测方法通常难以做到的。蚯蚓已被广泛应用于土壤污染的环境评估，是标准毒理实验 的典型生物。蚯蚓生物标志物可以作为早期预警系统或污染危害的准确测量的有效工具。近年来，细胞或分子水平上的生物标志物作为污染物暴露和毒性效应的早期响应 指标在生态毒理学研究中越来越受重视，其中活性氧及抗氧化防御系统各种组分就是广受 关注的一类重要指标。许多研究表明，通过诱导产生活性氧，引起生物体氧化损伤是污染物 致毒的重要路径之一。蚯蚓在受到活性氧自由基的攻击后，抗氧化防御系统会激发相关的 抗氧化酶进行保护防御，但是在大量自由基的攻击下，机体将会产生一些损伤，例如产生脂 质过氧化、蛋白质产生氧化损伤等。在土壤污染生态毒理学研究领域，生物体抗氧化防御系 统响应变化已开始广泛应用于评价污染土壤健康和污染状况，是土壤污染生态毒理诊断的 一项重要指标。但对于如何将与蚯蚓相关的这些指标系统的用与诊断土壤污染状况仍是 没有相关文献给出说明。

发明内容
1.发明要解决的技术问题
针对现有环境土壤中的污染物种类繁多，化学分析方法只能对有限的污染物进行分析 监测，无法全面评价土壤健康程度和污染状况，本发明提供一种利用蚯蚓生物标志物诊断 土壤污染状况的方法，采用蚯蚓的氧化损伤生物标志物作为评价指标，可对土壤总体健康 程度和污染状况进行监测与全面综合评价。2.技术方案
本发明的原理是利用土壤污染物可诱导蚯蚓体内产生氧自由基，造成氧自由基(R0S)、 丙二醛含量(MDA)、蛋白质羰基含量(PCO)和还原型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比值(GSH/ GSSG)发生变化，蚯蚓机体在受到氧化损伤时的指标丙二醛MDA和羰基含量PCO间接反应土 壤污染物浓度，可以作为土壤污染生态的生物标志物。生物体的活性氧代谢及抗氧化防御 系统的变化对污染物胁迫的响应相当敏感，可为污染物暴露和毒性效应提供敏感信息。这 4种氧化损伤指标变化程度可间接反映出土壤污染状况和健康程度。本发明的技术方案为
利用蚯蚓生物标志物诊断土壤污染状况的方法，其步骤为
(a)称取200g-500g的人工标准土壤和供试土壤，分别放置不同容器中，水份含量保 持在 30-50% ；
(b)在人工标准土壤和供试土壤中分别投入10-30条健康成年且已清肠24小时的人工 养殖蚯蚓，在20-25 °C条件下培养3-20天；
(c)从土壤分离出蚯蚓，放入装有湿滤纸的培养皿中清肠12-24小时，然后分别测定蚯 蚓体内氧自由基(R0S)、丙二醛含量(MDA)、蛋白质羰基含量(PCO)和还原型谷胱甘肽-氧化 型谷胱甘肽比例(GSH/GSSG)；
(d)通过比较人工标准土壤组和供试土壤组蚯蚓体内氧自由基(R0S)、丙二醛含量 (MDA)、蛋白质羰基含量(PCO)和还原型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比例(GSH/GSSG)的差 异，对供试土壤污染状况进行诊断。步骤(a)中的人工标准土壤是OE⑶人工土壤(2007)，具体配方为工业石英砂 69% (含50%以上0. 05-0. 2 mm细小颗粒)，高岭土 20%，苔藓土 10%，CaCO3 1%,混勻，以1 M 的NaOH调节土壤pH为6. 5。步骤(b)中人工养殖蚯蚓方法为以人工土壤为培养介质，用清洁牛粪或猪粪(符 合生物有机肥料行业标准NY884-2004)为蚯蚓食物，20_25°C养殖；蚯蚓品种为赤子爱胜蚓 (Esisenia /eiit/a )，安德爱胜虫引(Ai1Sewia andrei)、参 V{、毛绝 \(J%eretima aspergillum)寸。步骤(c)中4种氧化损伤指标的检测方法为
(1)氧自由基(R0S):蚯蚓用冰冷的生理盐水冲洗后，迅速称量0. 1 g置于玻璃勻浆器 内，加入1 mL二甲基亚砜(DMSO)为溶剂配制的浓度为50 mM的PBN溶液(加入过程中，避免 水分进入，影响EI^R波谱信号)。冰浴条件下勻浆后，将勻浆液密封好，在4°C条件5000rmp离 心5min，取上层液400 mL注入直径为3 mm石英管中，迅速放入液氮中保存。样品在电子顺 磁共振仪(ΕΠΟ上测定。整个操作过程在以导入氮气与氧气隔绝的密闭操作箱中进行，并避 免水分沾入。电子顺磁共振仪(EPR)操作参数测试温度(TE)室温，微波功率(SP)20mW，微波频率(SF) 9. 751GHz，调制频率(MF) IOOKHz，调制幅度(MA)O. 5G，中心磁场(CF) 3470G, 扫场时间(TI)84s，时间常数(TC)41ms，扫场宽度(SW) 200G，信号为5次叠加。(2) 丙二醛含量(MDA)取蚯蚓组织勻浆液200 μ L，按如下顺序依次加入8. 1% SDS, 0. 2 mL 20% 醋酸缓冲液(pH 3. 5) 1. 5 mL，1% TBA 1. 5 mL，蒸馏水 1 mL。将上述反应 液于90° C水浴60 min，冷却后，3000 r/min离心15 min，取上清液在532 nm处测OD值， 脂质过氧化产物MDA以每毫克蛋白中含TBARS的量即TBARS nmol/mg表示，摩尔消光系数 e=l. 56X105/ (mol-I^-cm)。(3) 蛋白质羰基含量(PCO)用50 mM磷酸钾(pH 7.4)缓冲液(内含1 mM Na2EDTA，0. 1% Triton X-100 (w/v), 1 mM PMSF, 5 mg/L Ieup印tin)提取4￡蚓的粗蛋白液， 用1% (w/v)链霉素溶液沉淀可能存在的核酸，取0.8 mL提取液与0.2 mL 20 mM 二硝基苯 胼反应1小时。然后，用0.6 M三氯乙酸沉淀蛋白，用乙醇/乙酸乙酯(1:1，ν/ν)洗涤沉 淀，用6 M盐酸胍(pH 2.3)溶解沉淀，在370 nm下测定吸光度。根据牛血清白蛋白的标准 曲线(0.25-2.0 mg/mL，溶解于6 M盐酸胍)计算最终的蛋白含量，应用消光系数22，000 M-1CnT1计算羰基基团的含量。(4)原型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG):GSH含量测定取100 μ L 新鲜制备的蚯蚓组织上清液，加入2. 8 mL 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH 8. 0)及100 μ L邻苯 二甲醛(OPT)的乙醇溶液(1 mg .mL-1),充分混合。在室温下放置10 min后以；350 nm为激 发光(Ex)，430 nm测荧光强度。标准管(100 μ L，内含4 μ gGSH)和空白管(100 μ LH20) 均须经过上述操作。GSSG含量测定500 μ L酶液与200 μ L 0. 04 M N-乙酰顺丁烯二酰亚 胺(NEMI)溶液混勻，室温放置20分钟后，取100 yL加入2.8 mL 0. 1 M NaOH及100 yL(l mg/mL) OPT荧光试剂，充分混合，然后在室温下放置10 min后以350 nm为激发光(Ex)，430 nm测荧光强度。最后计算原型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG)。步骤(d)中采用t检验法对数据进行方差分析。当供试土壤的4种氧化损伤指标 中有任一项与人工标准土壤有极显著差异(P < 0.01)时，可初步判断供试土壤受到污染。 供试土壤的指标数值与人工标准土壤差异越大，表明土壤污染状况越严重。3.有益效果
本发明提供了利用蚯蚓生物标志物诊断土壤污染状况的方法，可用于全面诊断土壤污 染状况和健康程度的方法。该方法对土壤中的痕量污染物有很好的敏感性，可作为土壤污 染早期预警的监测方法。与化学分析方法相对，本发明提供的方法可全面监测土壤污染状 况，同时具有操作简单，成本低廉的特点。
具体实施例方式以下结合实施例进一步说明本发明 实施例1
分别称取200g的人工标准土壤和供试土壤，人工标准土壤的配方按按重量百分比 为工业石英砂69% (含50%以上0. 05-0. 2 mm细小颗粒)，高岭土 20%，苔藓土 10%，CaCO3 1%， 混勻，以1 M的NaOH调节土壤pH为6. 5。分别以人工标准土壤和供试土壤为培养介质，用 清洁牛粪或猪粪(符合生物有机肥料行业标准NY884-2004)为蚯蚓食物，土壤水分含量保持 在重量百分比35% ；然后分别投入10条健康成年且清肠M小时后的赤子爱胜蚓(Msisenia/feiii/a)，在25°C条件下培养5天。蚯蚓放入装有湿滤纸的培养皿清肠M小时，然后测定蚯蚓的氧自由基(ROS)含 量。具体为蚯蚓用冰冷的生理盐水冲洗后，迅速称量0.1 g置于玻璃勻浆器内，加入1 mL 二甲基亚砜(DMSO)为溶剂配制的浓度为50 mM的PBN溶液(加入过程中，避免水分进入，影 响EI3R波谱信号)。冰浴条件下勻浆后，将勻浆液密封好，在4°C条件5000rmp离心5min，取 上层液400 mL注入直径为3 mm石英管中，迅速放入液氮中保存。样品在电子顺磁共振仪 (EPR)上测定。整个操作过程在以导入氮气与氧气隔绝的密闭操作箱中进行，并避免水分 沾入。电子顺磁共振仪(EPR)操作参数测试温度(TE)室温，微波功率(SP)20mW，微波频 率(SF) 9. 751GHz，调制频率(MF) IOOKHz，调制幅度(MA)O. 5G，中心磁场(CF) 3470G，扫场时 间(TI)84s，时间常数(TC)41ms，扫场宽度(SW) 200G，信号为5次叠加。分别测得数据如下
标准土壤组2286，2396，2189，2462，2269，2508，2063，2485，2369 供试土壤组:5237,4667,4896, 5307，4860，4966，5365，5603，5031 采用 检验法对标准土壤组和供试土壤组数据进行方差分析发现，供试土壤组蚯蚓的 氧自由基(ROS)含量要极显著高于标准土壤组(ρ < 0. 01)，可初步判断供试土壤受到污染。实施例2
基本步骤同实施例1。分别称取300g的人工标准土壤和供试土壤，人工标准土壤的配 方按按重量百分比为工业石英砂69% (含50%以上0. 05-0. 2 mm细小颗粒)，高岭土 20%， 苔藓土 10%，CaCO3 1%，混勻，以1 M的NaOH调节土壤pH为6. 5。分别以人工标准土壤和供 试土壤为培养介质，用清洁牛粪或猪粪(符合生物有机肥料行业标准NY884-2004)为蚯蚓食 物，土壤水分含量保持在重量百分比30% ；然后分别投入10条健康成年且清肠M小时后的 安德爱胜蚓(Misenia油办釘·)，在25°C条件下培养7天。蚯蚓放入装有湿滤纸的培养皿清肠M小时，然后测定蚯蚓的丙二醛含量(MDA)。 具体为取蚯蚓组织勻浆液200 μ L，按如下顺序依次加入8. 1% SDS, 0.2 mL 20%醋酸缓冲 液(pH 3.5) 1.5 mL, 1% TBA 1.5 mL，蒸馏水1 mL。将上述反应液于90° C水浴60 min，冷 却后，3000 r/min离心15 min，取上清液在532 nm处测OD值，脂质过氧化产物MDA以每毫 克蛋白中含TBARS的量即TBARS nmol/mg表示，摩尔消光系数e=l. 56X lOS/Cmol'L^'cm),,分别测得数据如下(单位Mmol/mg Pr)
标准土壤组1. 1,1.3,0.9,1.2,0.9,0.8,1.4,1. 1,1.0 供试土壤组2. 6,2. 3,2. 8,2. 1,2. 7,2. 9,3. 1,2. 6,2. 5
采用 检验法对标准土壤组和供试土壤组数据进行方差分析发现，供试土壤组蚯蚓的 丙二醛含量(MDA)要极显著高于标准土壤组(ρ < 0. 01)，可初步判断供试土壤受到污染。实施例3
基本步骤同实施例1。分别称取500g的人工标准土壤和供试土壤，人工标准土壤的配 方按按重量百分比为工业石英砂69% (含50%以上0. 05-0. 2 mm细小颗粒)，高岭土 20%， 苔藓土 10%，CaCO3 1%，混勻，以1 M的NaOH调节土壤pH为6. 5。分别以人工标准土壤和供 试土壤为培养介质，用清洁牛粪或猪粪(符合生物有机肥料行业标准NY884-2004)为蚯蚓食 物，土壤水分含量保持在重量百分比30% ；然后分别投入20条健康成年且清肠M小时后的 参环毛蚓(J%eretima a^er^iVA/ )，在25°C条件下培养7天。
蚯蚓放入装有湿滤纸的培养皿清肠M小时，然后测定蚯蚓的蛋白质羰基含量 (PCO)o 具体为用 50 mM 磷酸钾(pH 7. 4)缓冲液(内含 1 mM Na2EDTA, 0. 1% Triton X-100 (w/v), 1 mM PMSF, 5 mg/L Ieup印tin)提取蚯蚓的粗蛋白液，用1% (w/v)链霉素溶液沉淀 可能存在的核酸，取0. 8 mL提取液与0. 2 mL 20 mM 二硝基苯胼反应1小时。然后，用0. 6 M三氯乙酸沉淀蛋白，用乙醇/乙酸乙酯(1:1，ν/ν)洗涤沉淀，用6 M盐酸胍(ρΗ 2.3)溶 解沉淀，在370 nm下测定吸光度。根据牛血清白蛋白的标准曲线(0.25-2.0 mg/mL，溶解于 6 M盐酸胍)计算最终的蛋白含量，应用消光系数22，000 Μ-lcm-l计算羰基基团的含量。分别测得数据如下(单位nmol/mg Pr)
标准土壤组16. 9，18. 6，17. 0，15. 3，19. 1,20. 3，18. 5，17. 9，18. 3 供试土壤组20. 6，18. 9，15. 8，18. 9，21. 1，15. 5，18. 0，19. 2，17. 7 采用 检验法对标准土壤组和供试土壤组数据进行方差分析发现，供试土壤组蚯蚓蛋 白质羰基含量(PCO)与标准土壤组无显著差别，可初步判断供试土壤的健康状况良好。实施例4
基本步骤同实施例1。分别称取500g的人工标准土壤和供试土壤，人工标准土壤的配 方按按重量百分比为工业石英砂69% (含50%以上0. 05-0. 2 mm细小颗粒)，高岭土 20%， 苔藓土 10%，CaCO3 1%，混勻，以1 M的NaOH调节土壤ρΗ为6. 5。分别以人工标准土壤和供 试土壤为培养介质，用清洁牛粪或猪粪(符合生物有机肥料行业标准NY884-2004)为蚯蚓食 物，土壤水分含量保持在重量百分比30% ；然后分别投入20条健康成年且清肠M小时后的 参环毛蚓LPheretima a^er^iVA/ )，在25°C条件下培养7天。蚯蚓放入装有湿滤纸的培养皿清肠M小时，然后测定蚯蚓的原型谷胱甘肽-氧化 型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG)。具体为原型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG): GSH含量测定取100 μ L新鲜制备的蚯蚓组织上清液，加入2. 8 mL 0. 1 mol/L磷酸缓冲 液(ρΗ 8.0)及100 μ L邻苯二甲醛(OPT)的乙醇溶液(1 mg · mL—1)，充分混合。在室温 下放置10 min后以350 nm为激发光(Ex)，430 nm测荧光强度。标准管(100 μ L，内含4 μ gGSH)和空白管(100 μ LH20)均须经过上述操作。GSSG含量测定500 μ L酶液与200 μ L 0. 04 M N-乙酰顺丁烯二酰亚胺(NEMI)溶液混勻，室温放置20分钟后，取100 μ L加 入2. 8 mL 0.1 M NaOH及100 yL(l mg/mL) OPT荧光试剂，充分混合，然后在室温下放置 10 min后以350 nm为激发光(Ex)，430 nm测荧光强度。最后计算原型谷胱甘肽-氧化型 谷胱甘肽比值(GSH/GSSG)。分别测得数据如下
标准土壤组2. 3,2. 6, 2. 4，2. 6，2. 5，2. 2，2. 5，2. 6，2. 1 供试土壤组2. 4,2. 6,2. 0,2. 5,2. 2,2. 4,2. 3,2. 5,2. 3
采用 检验法对标准土壤组和供试土壤组数据进行方差分析发现，供试土壤组蚯蚓原 型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG)与标准土壤组无显著差别，可初步判断供试 土壤的健康状况良好。
权利要求
1.一种利用蚯蚓生物标志物诊断土壤污染状况的方法，其步骤包括(a)称取200g-500g的人工标准土壤和供试土壤，分别放置不同容器中，水份含量保 持重量百分比为30-50% ；(b)在人工标准土壤和供试土壤中分别投入10-30条健康成年的人工养殖蚯蚓，在 20-25°C条件下培养3-20天；(c)从土壤分离出蚯蚓，放入装有湿滤纸的培养皿中清肠12-24小时，然后分别测定蚯 蚓体内羟自由基、丙二醛含量、蛋白质羰基含量和还原型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比例；(d)通过比较人工标准土壤和供试土壤培养的蚯蚓体内羟自由基、丙二醛含量、蛋白质 羰基含量或还原型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比例之间的差异，对供试土壤污染状况进行 诊断。
2.根据权利要求1所述的诊断土壤污染状况的方法，其特征在于步骤(a)中人工标准 土壤是OE⑶人工土壤按重量百分比具体为工业石英砂69%，其中含50%以上0.05-0. 2 mm 细小颗粒，高岭土 20%，苔藓土 10%，CaCO3 1% ；以上混勻，以1 M的NaOH调节土壤pH值为 6. 5。
3.根据权利要求2所述的诊断土壤污染状况的方法，其特征在于步骤(b)中人工 养殖蚯蚓方法的主要特征为以人工土壤为培养介质，用清洁牛粪或猪粪为蚯蚓食物，在 20-25°C养殖；蚯蚓品种可为赤子爱胜蚓feismia /eiii/a、安德爱胜蚓份smia andrei或 #1^ ! Pheretima aspergiIlum0
4.根据权利要求1 3中任一项所述的诊断土壤污染状况的方法，其特征在于步骤 (c)中4种氧化损伤指标的检测方法为(1)氧自由基R0S:蚯蚓用冰冷的生理盐水冲洗后，迅速称量0.1g置于玻璃勻浆器内，加入1 mL 二甲基亚砜DMSO为溶剂配制的浓度为50 mM的PBN溶液，加入过程中，避免水分进入，影响Era波谱信号；冰浴条件下勻浆后，将勻浆液密封好，在4°C条件 5000rmp离心5min，取上层液400 mL注入直径为3 mm石英管中，迅速放入液氮中保存； 样品在电子顺磁共振仪Era上测定；整个操作过程在以导入氮气与氧气隔绝的密闭操作箱 中进行，并避免水分沾入；电子顺磁共振仪Era操作参数测试温度TE 室温，微波功率 SP :20mW，微波频率SF :9. 751GHz，调制频率MF ΙΟΟΚΗζ，调制幅度MA :0. 5G，中心磁场CF 3470G，扫场时间TI :84s，时间常数TC :41ms，扫场宽度(SW) 200G，信号为5次叠加；(2)丙二醛含量MDA取蚯蚓组织勻浆液200 μ L，按如下顺序依次加入8. 1% SDS， 0.2 mL 20%醋酸缓冲液(pH 3.5) 1.5 mL, 1% TBA 1.5 mL，蒸馏水1 mL ；将上述反应液 于90° C水浴60 min，冷却后，3000 r/min离心15 min，取上清液在532 nm处测OD值， 脂质过氧化产物MDA以每毫克蛋白中含TBARS的量即TBARS nmol/mg表示，摩尔消光系数 e=l. 56X105/ (mol'L^'cm)；(3)蛋白质羰基含量PC0:用50mM pH为7. 4的磷酸钾缓冲液，该缓冲液内含1 mMNa2EDTA,0. 1% Triton X-100 (w/v), 1 mM PMSF, 5 mg/L Ieup印tin，提取te蚓的粗蛋白 液，用1% (w/v)链霉素溶液沉淀可能存在的核酸，取0.8 mL提取液与0.2 mL 20 mM 二硝 基苯胼反应1小时；然后，用0.6 M三氯乙酸沉淀蛋白，用乙醇/乙酸乙酯(1:1，ν/ν)洗 涤沉淀，用6 M pH为2. 3的盐酸胍溶解沉淀，在370 nm下测定吸光度；根据牛血清白蛋白 的标准曲线，以0.25-2.0 mg/mL，溶解于6 M盐酸胍，计算最终的蛋白含量，应用消光系数.22，000 M-1Cm-1计算羰基基团的含量；(4)原型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比值GSH/GSSG =GSH含量测定取100 μ L新鲜制 备的蚯蚓组织上清液，加入2. 8 mL 0.1 mol/L磷酸缓冲液(ρΗ 8. 0)及100 μ L邻苯二甲醛 OPT的乙醇溶液(1 mg · mL—1)，充分混合；在室温下放置10 min后以；350 nm为激发光Ex， 430 nm测荧光强度；标准管100 μ L，内含4 μ gGSH和空白管100 μ LH2O均须经过上述操 作；GSSG含量测定500 μ L酶液与200 μ L 0. 04 M N-乙酰顺丁烯二酰亚胺NEMI溶液混 勻，室温放置20分钟后，取100 μ L加入2. 8 mL 0. 1 M NaOH及100 μ L(1 mg/mL) OPT荧 光试剂，充分混合，然后在室温下放置10 min后以350 nm为激发光(Ex)，430 nm测荧光强 度；最后计算原型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比值。
5.根据权利要求1 3中任一项所述的诊断土壤污染状况的方法，其特征在于步骤 (d)中采用t检验法对人工标准土壤和供试土壤的两组数据进行方差分析，当供试土壤的4 种氧化损伤指标中有任一项与人工标准土壤有极显著差异(P < 0. 01)时，可初步判断供试 土壤受到污染；供试土壤的指标数值与人工标准土壤差异越大，表明土壤污染状况越严重。
全文摘要
本发明提供了利用蚯蚓生物标志物诊断土壤污染状况的方法，属于土壤污染监测与控制技术领域。该方法以人工养殖蚯蚓为标准试验动物，以氧自由基、丙二醛含量、蛋白质羰基含量以及还原型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比例4种氧化损伤测试指标为诊断土壤污染的生物标志物，以清洁人工土壤为标准土壤，通过分析清洁人工土壤和供试土壤培养一定时间后蚯蚓体内4种氧化损伤指标的差异，可快速灵敏地诊断供试土壤污染状况。本发明可用于全面诊断土壤污染状况和健康程度，该方法对土壤中的痕量污染物有很好的敏感性，可作为土壤污染早期预警的监测方法。与化学分析方法相对，本发明具有操作简单，成本低廉的特点。
文档编号G01N33/24GK102128915SQ20101056854
公开日2011年7月20日 申请日期2010年12月2日 优先权日2010年12月2日
发明者王晓蓉, 耿金菊, 薛银刚, 谢显传, 顾雪元 申请人:南京大学