专利名称：艾迪注射制剂的检测方法
技术领域：
本发明涉及艾迪注射制剂的检测方法，属于药品的技术领域。
背景技术：
癌症是严重威胁人类健康的一大类疾病，艾迪注射制剂主要由斑蝥、人 参、黄芪和刺五加组成，具有清热解毒、消瘀散结的作用，主要用于原发性肝癌，肺癌，直肠 癌，恶性淋巴瘤，妇科恶性肿瘤等疾病。其中“艾迪注射液”刊登在中药部颁标准第20册。 但是随着社会的发展，对于药品的质量控制的要求越来越高，而且对于寻找快捷方便可控 的检测方法的需求也越来越迫切，本发明人经过研究发现，现有艾迪注射制剂质量控制标 准中，产品性状的描述不够确切；对人参、黄芪的薄层鉴别中，供试品溶液的制备方法较繁 琐，上柱洗脱的操作方法时间较长；展开剂的选择配比不够理想，很难将各有效成份特别是 人参皂苷Rgl和黄芪甲苷完全分开，同时展开剂有配置条件的限制，这些都易导致在鉴别 过程中分离度不好，斑点显色不够清晰；另外原标准中未对薄层板厚度进行规定，但经大 量实现表明，人参对薄层板的要求很严，如果薄层板过薄，人参皂苷Rgl与黄芪甲苷很难分 开，必须要厚板(500 μ m以上)才能将二者有效分离，同时湿度对其影响也很大，在展开过 程中要严格控制湿度；故现有质量控制方法不能有效控制艾迪注射制剂的质量，从而将影 响该制剂的临床疗效。

发明内容
本发明的目的在于提供一种艾迪注射制剂的检测方法，该注射制剂包括冻干粉 针剂、输液剂和水针剂。本发明针对现有技术的不足，对这种艾迪注射制剂的质量控制方法 进行了研究，改进了斑蝥素的含量测定方法以及人参、黄芪的薄层鉴别方法，并增加了这种 艾迪制剂的安全性指标检查项目，提高了艾迪注射制剂的质量控制标准，从而保证了该制 剂的临床疗效。本发明所述艾迪注射制剂是这样构成的按照重量组份计算它主要由斑蝥 0. 5-5、人参20-80、黄芪200-600、刺五加100-200制备而成。其制备方法为以上四味，人 参切片，用20-85%乙醇加热回流提取1-5次，合并提取液，滤过，回收乙醇，药液备用；药渣 与其余斑蝥等三味加水煎煮1-6次，合并煎液，滤过，滤液与人参提取液合并，以石硫法沉 淀处理1-3次，所得上清液加乙醇使含醇量达50-99%，静置过夜，取上清液减压回收乙醇 至无醇味，再按照常规方法分别制成冻干粉针剂、输液剂或水针剂。本发明所述质量控制方法主要包括性状、鉴别、检查以及含量测定项目中的部分 或全部；其中鉴别包括α-萘酚显色反应、以人参皂苷Re、RgU Rb以及黄芪甲苷为对照对 制剂中人参和黄芪的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中人参所含人参皂苷Re、斑蝥所含 斑蝥素的含量测定。人参和黄芪的鉴别方法是以人参皂苷Re、Rgl、Rb以及黄芪甲苷为对照，以三氯甲 烷甲醇水=10-50 1-9 0. 5-5为展开剂的薄层色谱方法。人参和黄芪的鉴别方法还可以是以人参皂苷Re、Rgl、Rb以及黄芪甲苷为对照，以三氯甲烷醋酸乙酯甲醇水=1-10 2-15 1-10 1-10为展开剂的薄层色谱方法。鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加乙醇 搅勻，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水溶解，取0. 5-3ml置试管中，微热 后加入2-10% α-萘酚乙醇溶液，摇勻，再沿管壁缓缓加入浓硫酸，在二液面接界处显紫红 色环；(2)方法一分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针 剂，置分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取1-4 次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1-4次，弃去氨试液，正丁醇液于水浴上蒸干，残渣加甲醇 使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Re、Rgl、Rb1及黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，作为 对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点 于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷甲醇水=10-50 1-9 0.5-5为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热，放置后再置紫外光灯200-500nm下检视；供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。方法二 分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂， 置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-4次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏 水溶解，加入预先制备好的DA-201树脂柱上，用水洗涤，再用20-80%甲醇液洗脱，收集 洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rgl、Rb及黄芪甲 苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试 验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿醋酸乙酯甲醇水= 1-10 2-15 1-10 l-10，10°c以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热数分钟，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)取冻干粉针400-1000mg加注射用水5_20ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩 至5-20ml、或取水针剂20-100ml浓缩至5_20ml ；分别取上述药品，加乙醇20_100ml，搅勻， 滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-4次，将沉淀物用蒸馏水2-10ml溶解，取0. 5_3ml置试管中，微 热后加入2-10 % α-萘酚乙醇溶液2-10滴，摇勻，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0. 2~2ml，在二 液面接界处显紫红色环；(2)方法一取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输液 200-500ml浓缩至20_100ml、或取水针剂20_100ml ；置分液漏斗中，用10_50ml三氯甲烷 振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取1-4次，每次40-60ml，合并正丁醇 液，用氨试液洗涤1-4次，每次10-50ml，弃去氨试液，正丁醇液于水浴上蒸干，残渣加甲醇 0. 5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1 > Rb1及黄芪甲苷对照品，加甲醇制 成每Iml各含0. 5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层 色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，厚500 μ m及 500 μ m以上；以三氯甲烷甲醇水=10-50 1-9 0. 5_5为展开剂，在必要时控制湿 度，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热数分钟，放置1小时以上后再置 紫外光灯200-500nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。方法二 取冻干粉针400-1000mg加注射用水20_100ml使溶解、或取输液 200-500ml浓缩至20_100ml、或取水针剂20_100ml ；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取 1-4次，每次10-60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水I-IOml溶解，加入预先制 备好的DA-201树脂柱上，内径0. 5 2cm，长10_20cm，填充10_15cm的DA-201树脂后，再填 充l_5g中性氧化铝；用水50-200ml洗涤，再用20-80 %甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残 渣加甲醇0. 5-5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1 > Rb及黄芪甲苷对照品， 加甲醇制成每Iml各含0. 5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部 附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯 仿醋酸乙酯甲醇水=1-10 2-15 1-10 1-10，10°C以下放置的下层溶液为展开 齐U，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热数分钟，置紫外光灯200-500nm 下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。制剂中人参皂苷Re的含量测定方法是以人参皂苷Re对照品为对照的分光光度 法。制剂中斑蝥素的含量测定方法是以斑蝥素对照品为对照，以0V-17为固定液的气 相色谱法。含量测定方法包括(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，摇勻，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、10(^1，分别置IOml具塞 试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10%香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，摇勻，置 水浴中加热，取出，用水冷却，加冰醋酸，摇勻，照中国药典分光光度法，测定吸收度，以吸收 度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接 取水针剂，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1-4次，弃去 氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇 提取液，加入无水硫酸钠，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无 水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣，加到大孔吸附树脂DA-201柱 上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水洗脱，弃去洗液，用40-90 %乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸 发皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得；测定法精密量取供试品溶液100 μ 1，照标准曲线的制备项下的方法，自“置IOml 具塞试管中”起依法测定吸收度。从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μ g， 计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于；输液剂中含 人参以人参皂苷Re计，不得少于0. 01mg/ml ；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于 0. lmg/ml0(2)斑蝥素方法一照中国药典气相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验玻璃色谱柱l-2mX3mm id，以0V-17为固定 液，OV-17由50%甲基、50%苯基聚硅氧烷组成，涂渍量为0. 5-3%,担体ShimaliteW(Aff-DMCS)60-120目。柱温为160士 10°C ；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500 ；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿溶解，摇勻，作为对照品溶 液；供试品溶液的制备分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取 水针剂，加入l-3mol/L硫酸溶液，再精密加入氯仿，振摇提取，静置分层，必要时离心，取下 层液即得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算； 该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0. 0005 % -0. 05% ；输液剂中含斑蝥素为 0. 00001-0. 001mg/ml ；水针剂中含斑蝥素为 0. 0001-0. 005mg/ml。方法二 照中国药典气相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布 浓度分别为5-20%和1-10%，0. 5-2 0.5-2混合装柱。柱温为180士 10°C；理论板数按斑 蝥素峰计算，应不低于1500。对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿溶解，作为对照品溶液。供试品溶液的制备分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取 水针剂，加入l-3mol/L硫酸溶液，用氯仿振摇提取1-5次，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩 定容，即得。测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即 得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0. 0005% -0. 05 % ；输液剂中含斑蝥素为 0. 00001-0. 001mg/ml ；水针剂中含斑蝥素为 0. 0001-0. 005mg/ml。更具体的含量测定方法包括(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每Iml 中含人参皂苷Re l_2mg，摇勻，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、10(^1，分别置IOml具塞
试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10%香草醛冰醋酸溶液0. 05-lml、高氯 酸0. 5-1. 5ml，摇勻，置40-80°C水浴中加热8-25分钟，取出，用水冷却1-3分钟，加冰醋酸 2-10ml，摇勻，照中国药典分光光度法，在400-700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐 标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备取冻干粉针200_400mg加注射用水10_30ml使溶解、或取输 液50-200ml浓缩至10-30ml、或取水针剂10_30ml ；分别精密量取上述药品，置分液漏斗 中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1_4次，每次2_10ml， 弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，每次 40-60ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠l_5g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发 皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣， 加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水IOOml洗脱，控制流速为 0. 3-0. 6ml/min，弃去洗液，用40-90%乙醇70_100ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴 上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得；测定法精密量取供试品溶液100 μ 1，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸收度。从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量μ g， 计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于；输液剂中含 人参以人参皂苷Re计，不得少于0. 01mg/ml ；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于 0. lmg/ml0(2)斑蝥素方法一照中国药典气相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验玻璃色谱柱l-2mX3mm id，以0V-17为固定 液，OV-17由50%甲基、50%苯基聚硅氧烷组成，涂渍量为0. 5-3%,担体Shimalite W(Aff-DMCS)60-120目。柱温为160士 10°C ；理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于1500 ；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每Iml含 0. 005-0. 02mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取冻干粉针30_100g加注射用水5_20ml使溶解、或取输液 30-100ml浓缩至约5-20ml、或取水针剂5_20ml ；分别精密量取上述药品，加入l-3mol/L硫 酸溶液0. 5-2ml，再精密加入0. 5-2ml氯仿，振摇提取，静置分层，必要时离心，取下层液即 得；测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各2_12μ 1，注入气相色谱仪， 计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0. 0005% -0. 05% ；输液剂中含斑蝥素为 0. 00001-0. 001mg/ml ；水针剂中含斑蝥素为 0. 0001-0. 005mg/ml。方法二 照中国药典气相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布 浓度分别为5-20%和1-10%，0. 5-2 0.5-2混合装柱。柱温为180士 10°C；理论板数按斑 蝥素峰计算，应不低于1500。对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每Iml含0. 05-0. 2mg 的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输 液200-500ml浓缩至20_100ml、或取水针剂20_100ml，加入l_3mol/L硫酸溶液2-lOml，用 氯仿振摇提取1-5次，每次IO-IOOml，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容至2_8ml，即得。测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即 得；该注射制剂中，冻干粉针剂中含斑蝥素为0. 0005% -0. 05 % ；输液剂中含斑蝥素为 0. 00001-0. 001mg/ml ；水针剂中含斑蝥素为 0. 0001-0. 005mg/ml。检查项目包括以下项目的部分或全部PH 值应为 3. 0-6. 5 ；重金属取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8_20ml浓缩至 2ml、或取水针剂2ml ；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不 得过百万分之五；热原取冻干粉针300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100-300ml浓缩 至30ml、或取水针剂30ml ；用氯化钠注射液或5 10%葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔 体重IKg注射IOml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；蛋白质取冻干粉针10-20mg加注射用水Iml使溶解、或取输液4_10ml浓缩至lml、或取水针剂Iml ；加新配制的30%磺基水杨酸溶液1ml，混勻，放置5分钟，不得出现浑 浊；鞣质取冻干粉针10-20mg加注射用水Iml使溶解、或取输液4_10ml浓缩至lml、 或取水针剂Iml ；加新配制的含鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml，必要时，用0. 45um微孔 滤膜滤过，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；树脂取冻干粉针50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取输液20_50ml浓缩至 5ml、或取水针剂5ml ；加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀；草酸盐取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8_20ml浓缩至 2ml、或取水针剂2ml ；用稀盐酸调节PH值至1_2，滤过，滤液调节PH值至5_6，加3%氯化钙 溶液2-3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；钾离子取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8_20ml浓缩至 2ml、或取水针剂2ml ；蒸干，按照中国药典钾离子测定法测定，应符合规定；砷盐取冻干粉针10-20mg加注射用水Iml使溶解、或取输液4_10ml浓缩至lml、 或取水针剂Iml ；精密量取，于坩埚中蒸干，加2%的硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先 用小火炽灼使炭化，再在500-600°C炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，照 中国药典砷盐检查法检查；每Iml成品中含砷量不得过百万分之二 ；溶血与凝聚2%红细胞混悬液的制备取兔血或羊血数毫升，放入盛有玻璃珠的 锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加约10倍量的生理氯化钠溶液洗涤 2-3次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2%的混悬液，即得；供试品溶液的制备取冻干粉针100_200mg加注射用水IOml使溶解、或取输液 40-100ml浓缩至10ml、或取水针剂IOml ；加生理氯化钠溶液稀释成50ml，混勻，即得；试验方法取试管6支，按下表中配比量依次加入2%红细胞混悬液和生理氯化钠 溶液，混勻后，于37°C恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的供试品溶液，第6管为对照 管，摇勻后，置37°C 士0. 5°C恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观 察一次，共观察3小时；
权利要求
1. 一种艾迪注射制剂的检测方法，其特征在于所述检测方法为 性状对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物； 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体； 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体； 鉴别(1)分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，加乙醇搅勻， 滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-5次，将沉淀物用蒸馏水溶解，取0. 5-3ml置试管中，微热后加入 2-10% α-萘酚乙醇溶液，摇勻，再沿管壁缓缓加入浓硫酸，在二液面接界处显紫红色环；(2)分别取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液浓缩、或直接取水针剂，置分液漏斗 中，用水饱和的正丁醇提取1-4次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，加入预 先制备好的DA-201树脂柱上，用水洗涤，再用20-80%甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣 加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rgl、Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解， 作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿醋酸乙酯甲醇水=1-10 2-15 1-10 1-10， 10°C以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加 热数分钟，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色 的荧光斑点；检查PH 值应为 3. 0-6. 5 ；重金属取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8_20ml浓缩至2ml、 或取水针剂2ml ；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过 百万分之五；热原取冻干粉针300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100_300ml浓缩至 30ml、或取水针剂30ml ；用氯化钠注射液或5 10%葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体 重IKg注射IOml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；蛋白质取冻干粉针10-20mg加注射用水Iml使溶解、或取输液4_10ml浓缩至1ml、或 取水针剂Iml ；加新配制的30%磺基水杨酸溶液1ml，混勻，放置5分钟，不得出现浑浊；鞣质取冻干粉针10-20mg加注射用水Iml使溶解、或取输液4_10ml浓缩至1ml、或取 水针剂Iml ；加新配制的含鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml，必要时，用0. 45um微孔滤膜 滤过，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；树脂取冻干粉针50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取输液20_50ml浓缩至5ml、或 取水针剂5ml ；加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀；草酸盐取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8_20ml浓缩至2ml、或 取水针剂2ml ；用稀盐酸调节PH值至1-2，滤过，滤液调节PH值至5_6，加3 %氯化钙溶液 2-3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；钾离子取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8_20ml浓缩至2ml、或 取水针剂2ml ；蒸干，按照中国药典钾离子测定法测定，应符合规定；砷盐取冻干粉针10-20mg加注射用水Iml使溶解、或取输液4_10ml浓缩至1ml、或取 水针剂Iml ；精密量取，于坩埚中蒸干，加2%的硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500-600°C炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，照中国 药典砷盐检查法检查；每Iml成品中含砷量不得过百万分之二 ；溶血与凝聚2%红细胞混悬液的制备取兔血或羊血数毫升，放入盛有玻璃珠的锥形瓶 中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加约10倍量的生理氯化钠溶液洗涤2-3 次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2%的混悬液，即得；供试品溶液的制备取冻干粉针100-200mg加注射用水IOml使溶解、或取输液 40-100ml浓缩至10ml、或取水针剂IOml ；加生理氯化钠溶液稀释成50ml，混勻，即得；试验方法取试管6支，按下表中配比量依次加入2%红细胞混悬液和生理氯化钠溶 液，混勻后，于37°C恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的供试品溶液，第6管为对照管， 摇勻后，置37°C 士0. 5°C恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一 次，共观察3小时；
2.按照权利要求1所述艾迪注射制剂的检测方法，其特征在于具体的检测方法为性 状对于冻干粉针剂，产品为浅黄色至浅棕色的疏松块状物； 对于输液剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体； 对于水针剂，产品为浅黄色至浅棕色的澄明液体； 鉴别(1)取冻干粉针400-1000mg加注射用水5_20ml使溶解、或取输液200-500ml浓缩至 5-20ml、或取水针剂20-100ml浓缩至5_20ml ；分别取上述药品，加乙醇20_100ml，搅勻，滤 过，沉淀物用乙醇洗涤1-4次，将沉淀物用蒸馏水2-10ml溶解，取0. 5_3ml置试管中，微热 后加入2-10 % α-萘酚乙醇溶液2-10滴，摇勻，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0. 2~2ml，在二液 面接界处显紫红色环；(2)取冻干粉针400-IOOOmg加注射用水20-IOOml使溶解、或取输液200-500ml浓 缩至20-100ml、或取水针剂20-100ml ；置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1_4次，每 次10-60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水I-IOml溶解，加入预先制备好的 DA-201树脂柱上，内径0. 5 2cm，长10_20cm，填充10_15cm的DA-201树脂后，再填充l_5g 中性氧化铝；用水50-200ml洗涤，再用20-80%甲醇液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇 0. 5-5ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re、Rg1 > Rb及黄芪甲苷对照品，加甲醇制 成每Iml各含0. 5-3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录薄层 色谱法试验，吸取上述两种溶液各3-20 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿醋酸 乙酯甲醇水=1-10 2-15 1-10 1-10，10°C以下放置的下层溶液为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热数分钟，置紫外光灯200-500nm下检视； 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；检查PH 值应为 3. 0-6. 5 ；重金属取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8_20ml浓缩至2ml、 或取水针剂2ml ；置坩埚中，水浴上蒸干，照中国药典重金属检查法检查，含重金属不得过 百万分之五；热原取冻干粉针300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取输液100_300ml浓缩至 30ml、或取水针剂30ml ；用氯化钠注射液或5 10%葡萄糖注射液稀释至100ml，按家兔体 重IKg注射IOml的剂量，照中国药典热原检查法检查，应符合规定；蛋白质取冻干粉针10-20mg加注射用水Iml使溶解、或取输液4_10ml浓缩至1ml、或 取水针剂Iml ；加新配制的30%磺基水杨酸溶液1ml，混勻，放置5分钟，不得出现浑浊；鞣质取冻干粉针10-20mg加注射用水Iml使溶解、或取输液4_10ml浓缩至1ml、或取 水针剂Iml ；加新配制的含鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml，必要时，用0. 45um微孔滤膜 滤过，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；树脂取冻干粉针50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取输液20_50ml浓缩至5ml、或 取水针剂5ml ；加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀；草酸盐取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8_20ml浓缩至2ml、或 取水针剂2ml ；用稀盐酸调节PH值至1-2，滤过，滤液调节PH值至5_6，加3 %氯化钙溶液 2-3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀；钾离子取冻干粉针20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取输液8_20ml浓缩至2ml、或 取水针剂2ml ；蒸干，按照中国药典钾离子测定法测定，应符合规定；砷盐取冻干粉针10-20mg加注射用水Iml使溶解、或取输液4_10ml浓缩至1ml、或取 水针剂Iml ；精密量取，于坩埚中蒸干，加2%的硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小 火炽灼使炭化，再在500-600°C炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，照中国 药典砷盐检查法检查；每Iml成品中含砷量不得过百万分之二 ；溶血与凝聚2%红细胞混悬液的制备取兔血或羊血数毫升，放入盛有玻璃珠的锥形瓶 中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加约10倍量的生理氯化钠溶液洗涤2-3 次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2%的混悬液，即得；供试品溶液的制备取冻干粉针100-200mg加注射用水IOml使溶解、或取输液 40-100ml浓缩至10ml、或取水针剂IOml ；加生理氯化钠溶液稀释成50ml，混勻，即得；试验方法取试管6支，按下表中配比量依次加入2%红细胞混悬液和生理氯化钠溶 液，混勻后，于37°C恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的供试品溶液，第6管为对照管， 摇勻后，置37°C 士0. 5°C恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一 次，共观察3小时；试管编号1234562%红细胞混悬液/ml2.52. 52.52.52. 52.50. 9%氯化钠溶液/ml2.02. 12.22.32. 42.5供试品溶液/ml0.50. 40.30.20. 10.0按上法检查，以第3管为准，本品在3小时内不得出现溶血和红细胞凝聚；异常毒性取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；按小鼠每只0. 5ml, 照中国药典异常毒性检查法检查；过敏物质检查取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度， 按豚鼠致敏剂量为0. 5ml/只，激发剂量为1. Oml/只；照中国药典过敏物质检查法检查，应 符合规定；升压物质检查取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度， 按大鼠体重Ikg注射IOml的剂量，照中国药典升压物质检查法检查，应符合规定；降压物质检查取冻干粉针加注射用水使溶解、或取输液、或取水针剂；以原药浓度， 按猫体重Ikg注射Iml的剂量，照中国药典降压物质检查法检查，应符合规定； 其他应符合中国药典注射剂项下有关的各项规定； 含量测定(1)人参皂苷Re对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每Iml中含 人参皂苷Re l-2mg，摇勻，即得;标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、20、40、60、80、10(^1，分别置IOml具塞试 管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加2-10%香草醛冰醋酸溶液0. 05-lml、高氯酸 0. 5-1. 5ml，摇勻，置40-80°C水浴中加热8-25分钟，取出，用水冷却1 -3分钟，加冰醋酸 2-10ml，摇勻，照中国药典分光光度法，在400-700nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐 标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备取冻干粉针200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取输液 50-200ml浓缩至10-30ml、或取水针剂10_30ml ；分别精密量取上述药品，置分液漏斗中， 用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸馏水洗涤1_4次，每次2_10ml， 弃去氯仿液，洗液与上述水层合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取1-5次，每次 40-60ml，合并正丁醇提取液，加入无水硫酸钠l_5g，搅拌，放至澄清，将正丁醇液移至蒸发 皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量蒸馏水溶解残渣， 加到大孔吸附树脂DA-201柱上，待液面接近棉花层后，用蒸馏水IOOml洗脱，控制流速为 0. 3-0. 6ml/min，弃去洗液，用40-90%乙醇70_100ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴 上蒸干，用甲醇溶解残渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得；测定法精密量取供试品溶液100 μ 1，照标准曲线的制备项下的方法，自“置IOml具 塞试管中”起依法测定吸收度；从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的重量yg， 计算；该注射制剂中，冻干粉针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于；输液剂中含 人参以人参皂苷Re计，不得少于0. 01mg/ml ；水针剂中含人参以人参皂苷Re计，不得少于 0. lmg/ml ；(2)斑蝥素照中国药典气相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M及甲基硅橡胶SE-30为固定液，涂布浓度 分别为5-20%和1-10%，0. 5-2 0. 5-2混合装柱；柱温为180士 10°C ；理论板数按斑蝥素 峰计算，应不低于1500 ；对照品溶液的制备取斑蝥素对照品，精密称定，加氯仿制成每Iml含0. 05-0. 2mg的溶 液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取冻干粉针400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取输液 200-500ml浓缩至20_100ml、或取水针剂20_100ml，加入l_3mol/L硫酸溶液2_10ml，用氯 仿振摇提取1-5次，每次IO-IOOml，合并氯仿液，用K-D浓缩器浓缩定容至2_8ml，即得；测 定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，计算，即得；该注射制剂中， 冻干粉针剂中含斑蝥素为0. 0005% -0. 05% ；输液剂中含斑蝥素为0. 00001-0. 001mg/ml ； 水针剂中含斑蝥素为0. 0001-0. 005mg/ml。
全文摘要
本发明提供了艾迪注射制剂的检测方法，所述检测方法为性状、鉴别、检查以及含量测定项目；其中鉴别为α-萘酚显色反应、以人参皂苷Re、Rg1、Rb以及黄芪甲苷为对照对制剂中人参和黄芪的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中人参所含人参皂苷Re、斑蝥所含斑蝥素的含量测定；检查为对pH值、重金属、热原、蛋白质、鞣质等安全性指标的检查；与现有技术相比，本发明质量控制方法可有效地控制产品质量，从而确保其临床疗效。
文档编号G01N30/90GK102000139SQ20101053110
公开日2011年4月6日 申请日期2007年11月19日 优先权日2007年11月19日
发明者叶湘武, 汤琼, 窦啟玲 申请人:贵州益佰制药股份有限公司