专利名称：：一种原料乳及乳粉中糊精掺假检测方法
技术领域：
：本发明涉及一种检测方法，特别涉及一种原料乳及乳粉中糊精掺假检测方法。属于化学成份检测的
技术领域：
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背景技术：
：目前关于原料乳及乳粉织艮检测的国标方法很有限，不能满足实际需求，不能4艮好的控制揭^叚奶的入厂。国家标准中现在还没有关于原料乳及乳粉中糊精织艮的标准检测方法，虽然市场上有一些糊精掺假的检测方法在应用，但大都是定性方法，或是试剂不公开的垄断方法。
发明内容本发明的目的是开发一种原料乳及乳粉中糊精剩叚检测方法，其检测灵敏度高，检测准确度高，而且成本低廉。本发明的技术方案如下1材料准备1.1空白乳样或空白乳粉取感官、理化指标均可靠的进口全脂淡乳粉为空白乳粉样。在定量检测中用于配制标准糊精(浓度梯度)乳液，在定性检测中配制标准阳性乳液和空白对照乳液。1.2标准糊精尽可能地多取全国各厂家的糊精样品，等比例混合均匀，干燥备用，定性检测中有一种糊精作为对照即可。1.3标准糊精乳粉样和标准糊精复原乳样即掺有不同百分比浓度糊精的标准乳粉样(w/w)和复原乳样(w/v)。定量检测中用于绘制标准曲线。见表l1.4冰乙酸、50°/。三氯乙酸溶液、无水乙醇。1.5光栅分光光度计，高速离心才几。2方法步骤2.1乳粉样的检测称取待测乳粉样10.OOOg,用温蒸馏水充分溶解并定容到100ml，制成复原乳样，再吸取10ml复原乳样定容到50ml,混匀。在4000转/分钟下离心15分钟，用干净干燥的4层纱布滤除脂肪，收集滤液；取5ml滤液力。0.23ml水乙酸振荡摇匀，再加0.6ml的50°/。三氯乙酸溶液摇匀后，在4000转/分钟下离心15分钟；取离心后的上清液1.5ml加入4.5ml无水乙醇，充分摇勻，15min后上分光光度计，在60Gnm波长下测其吸光度(OD)值2.2原料乳样的检测称取4寺测原料乳样取10ml定容到50ml,混匀；在4000转/分钟下离心15分钟，用干净干燥的4层纱布滤除脂肪5收集滤液^取5ml滤液力。0.23ml水乙酸振荡摇匀，再加0.6ml的50%三氯乙酸溶液摇勻后，在4000转/分钟下离心15分钟；取离心后的上清液1.5ml加入4.5ml无水乙醇，充分摇匀，15min后上分光光度计，在600nm波长下测其吸光度(OD)值2.3定性检测取待测样的1.5ml上清液于小试管中，沿管壁轻轻加入4.5ml无水乙醇，界面有白色沉淀产生，摇匀后仍为均匀浑浊者为糊精阳性。3标准曲线的建立3.1标准糊精乳液的配制取100ml烧杯按表1编号并准确称取标准糊精和空白乳粉，然后加适量的温热的蒸镏水(约30—50ml，最好用双蒸水)充分溶解，待冷却到室温分别倒入事先编号的100ml容量瓶内，用少量的蒸馏水充分冲涮烧杯并将冲涮液全部移入相应的容量并瓦内，最后加蒸馏水定容到刻度。3.2前处理然后按2.2所示的操作程序进行前处理，去除脂肪、酪蛋白和其他低分子蛋白、肽和乳中固有低聚糖等干扰物质，制备澄清透明待测乳清液。3.3标准曲线的绘制处理好的糊精乳清液上分光光度计，在600nm波长下比浊，记录各标准液的吸光度(OD)值，以吸光度(OD)值为纵坐标，以糊精掺假浓度为横坐标，绘制标准曲线，并得出回归方程和相关系数，若R2<0.998(最好能做到0.999以上)，则标准曲线不合格，需重做。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>4注意事项4.l反应到规定时间进行比色，比色时空白与样品用同一个比色皿。4.2做曲线时用一元二次回归，吸光度值(OD)值范围尽量大一点，取O.1—l这个范围，超过1需重做。4.3标准糊精的品种越多越好，充分混匀后称量一定要准确。4.4做两条标准曲线一条专门用于测奶粉(横坐标为0%,2.5%，5%，7.5%,10%,12.5%,15%),—条专门用于测原奶(横坐标为0%,0.25%,0.5%,0.75%,1.0%,1.25%，1.5%)。4.5本方法因受方法误差和分光光度计的仪器误差所限，样品检测时，在吸光度值小于0.005时，不计;险出。只有当吸光值>0.005时，判定为检出糊精。实施方案的结果与讨论本项发明通过实施，对检出限、回收率、以及阴阳性样品检验的验证，得出结论，本项发明的检测方法检出限低、回收效果好、成本低廉，优于市场上现有的关于原料奶和乳;盼中糊并fr织叚;险测的方法。本发明的优点是一种定量检测方法，检测灵敏度高，检测准确度高，成本低廉。具体实施方式实施例l.标准曲线建立根据检测方法建立标准曲线的原始数据如下<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>得出标准曲线计算公式为y=-0.0599x2+0.6232x-0.0109，曲线相关性为R2=0.99842.检出限计算吸光度为0.005时，按照上述标准曲线计算得出，本方法针对原料乳的检出限为0.025%,针对乳粉的检出限为0.25%。3.回收率—验iiL:人为掺入不同含量的糊精，用该方法进行检测，计算回收率<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>该方法平均回收率可达98％，完全满足使用要求。4.检测实例结构随机抽取牛体原料奶阴性样品，用该方法进行检测<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>人为向原料奶中随机加入未知量的糊精，制成糊精掺假阳性样品，用该方法进4亍4企测样品名称吸光度值糊精掺假量<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>5.检验成本单个样品的检验成本约为0.03元，具体计算如下:冰乙酸0.004元三氯乙酸溶液0.02元无水乙醇0.005元共计0.029元。权利要求1.一种原料乳及乳粉中糊精掺假检测方法，其特征在于按照如下步骤进行检测1)制备空白原乳样品或空白乳粉样品；2)制备标准糊精；3)制备标准糊精乳粉样品和标准糊精复原乳样品；4)分别对标准糊精乳粉样品和标准糊精复原乳样品进行处理后，用分光光度计测量吸光度(OD)值，得到含量的标准曲线；5)对被检测的原料乳或乳粉的乳样品进行与步骤4中相同的处理和测量，即可定量得知被检测的原乳或乳粉的乳样品的糊精含量。2.如权利要求1所述的原料乳及乳粉中糊精#^叚检测方法，其特征在于所述步骤4和5中标准糊精乳粉样品和被4企测乳粉的乳样品的处理和4企测方法如下将样品10g定容到50-500ml，优选100ml，然后直接离心或稀释后离心，进行脱脂，加水醋酸并混合，水醋酸加入量为与^f羊品体积比为5:(0.1-0.4)，再加入体积比例为0.1-0.8优选0.6的三氯乙酸溶液，摇匀后离心，取出上清液加入无水乙醇，上清液与无水乙醇的体积比例是l:1-5,优选l:3，放置5-30分钟，优选15分钟；上分光光度计测吸光度(OD)值。3.如权利要求1所述的原料乳及乳粉中糊精駒叚;险测方法，其特征在于所述步骤4和5中标准糊精原料乳样品和被;险测原料乳的乳样品的处理和4企测方法如下将样品或稀释后的样品离心，进行脱脂，加冰醋酸并混合，水醋酸加入量为与样品体积比为5:(0.1-0.4)，再加入体积比例为0.1-0.8优选0.6的三氯乙酸溶液，摇勻后离心，取出上清液加入无水乙醇，上清液与无水乙醇的体积比例是l:1-5，优选l:3，放置5-30分钟，优选15分钟；上分光光度计测吸光度(OD)值。4.如权利要求2或3所述的原料乳及乳粉中糊精,叚检测方法，其特征在于所述脱脂步骤中，脂肪用干净干燥的多层纱布过滤，优选4层以上。5.如权利要求2或3所述的原料乳及乳粉中糊精樹叚检测方法，其特征在于所述离心的条件为2000-5000转/分钟下离心5-30分钟，优选4000转/分钟下离心15分钟。6.如权利要求2或3所述的原料乳及乳粉中糊精刺叚检测方法，其特征在于所述步骤4和5中三氯乙酸溶液的质量体积百分比浓度为1-75%,优选50%。7.如权利要求2或3所述的原料乳及乳粉中糊精掺假检测方法，其特征在于所述步骤4和5中上分光光度计测吸光度(OD)值时的波长要求为200-1000nm，优选600nm。全文摘要本发明涉及一种检测方法，特别涉及一种原料乳及乳粉中糊精掺假检测方法，属于化学成分检测的
技术领域：
。按照如下步骤进行检测制备空白原乳样品或空白乳粉样品；制备标准糊精；制备标准糊精乳粉样品和标准糊精复原乳样品；分别对标准糊精乳粉样品和标准糊精复原乳样品进行处理后，用分光光度计测量吸光度(OD)值，得到含量的标准曲线；对被检测的原乳或乳粉的乳样品进行与步骤4中相同的处理和测量，即可定量得知被检测的原乳或乳粉的乳样品的糊精含量。文档编号G01N33/02GK101118213SQ20071015196公开日2008年2月6日申请日期2007年9月24日优先权日2007年9月24日发明者王丹慧申请人:内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司