专利名称：一种检测香菇中甲醛含量的方法
技术领域：
本发明涉及食品安全检测领域，特别是涉及一种检测香菇内生甲醛含量的 方法。
背景技术：
甲醛为较高毒的物质，已经被世界卫生组织确定为致癌和致畸物质，是公 认的变态反应源，也是潜在的强致突变物之一。大量文献记载，甲醛对人体健 康的影响在嗅觉异常、刺激、过敏、肺功能异常、肝功能异常和免疫功能异常 等方面。发生甲醛急性经口中毒后可直接损伤人的口腔、咽喉、食道和胃黏膜， 同时产生中毒反应，轻者头晕、咳嗽、呕吐、上腹疼痛，重者出现昏迷、休克、 肺水肿、肝肾功能障碍，导致出血、肾衰竭和呼吸衰弱而死亡。长期接触低浓 度甲醛，可引起神经系统、免疫系统、呼吸系统和肝脏的损害，出现头昏(痛)、 乏力、嗜睡、食欲减退、视力下降等中毒症状。
大量调査研究发现，许多食品中含有甲醛。香菇中甲醛主要是作为形成香 菇特征风味的酶学途径的副产物产生的。香燕中的甲醛含量是衡量香燕质量的 一项重要指标。
大量有关甲醛的动力学变化研究表明，在进行香菇甲醛含量的检测过程中，
香菇匀浆液在37T:下保温时，甲醛含量快速上升；2h 2.5h甲醛的形成速率趋 于平缓；2.5h后匀浆液中甲醛含量达到稳定。4t下保温的香菇匀浆液样品，其 甲醛含量的变化随着时间的延长也有增加，但增幅不大。这是因为香菇子实体 在被破碎后，在适宜甲醛代谢相关酶(Y-谷氨酰转肽酶和半胱氨酰亚砜裂解酶) 表现活力的温度下，酶活力增加，发生的酶促反应使甲醛大量代谢产生。因此，
在香菇样品的前处理过程中，若不对酶活力加以控制，将对最终的检测结果产 生很大的影响。
现有技术中检测香菇中甲醛含量的方法主要有分光光度比色法、高效液相
色谱(HPLC)法。
分光光度比色法通过蒸馏将甲醛从香菇样品中提取后，用乙酰丙酮试剂将 甲醛衍生反应生成黄色的化合物，使用分光光度计于414nm下测定相应的吸收 值，定量检测样品中提取得到的甲醛含量。
HPLC法通过蒸馏从香菇样品中提取甲醛，用DNPH (2,4-二硝基苯肼)将 甲醛衍生成在紫外区有特征强吸收的腙类化合物，将这一衍生产物用HPLC进 行分离，于355nm通道的紫外检测器检测，根据所得的色谱图以目标峰峰面积 来对甲醛进行定量。
上述方法均未考虑到香菇样品在粉碎及前处理过程中香燕中的内生甲醛在 酶的作用下大量产生的影响，造成检测值往往高于实际含量。
因此，找到一种准确的检测方法，是有效地控制香菇及其制品甲醛含量在 安全范围的前提，是关系到广大消费者身体健康且迫切需要解决的问题。

发明内容
本发明为了解决现有检测技术的不足，提供了一种能够准确检测香燕中甲 醛含量的方法，可真实地反映香菇中甲醛的含量，适用于鲜菇样品或干菇制品 中甲醛的检测。
本发明方法包括下列步骤
a.样品处理
把鲜香菇置于4'C预冷30分钟，在冰水浴中破碎匀浆，用冰水稀释燕浆， 经分散机分散置于冰水浴中；
或把干香菇粉碎，使其细度达200目以上，加冰水混合摇匀；
b.灭酶经处理的香菇样品置于10(TC沸水浴中，放置5分钟；
C.破壁灭酶处理后的样品置于冰水浴中冷却，用超声破碎细胞壁，4。C放 置12小时；
d. 对浆料离心，取上清夜；对上清夜进行HPLC分离、测定；
e. 根据色谱图中甲醛吸收峰面积计算得出香菇样品中的甲醛含量。
本发明方法的样品前处理过程均在冰水浴环境下进行，可避免匀浆过程产 生的热量使匀浆液温度升高引起Y -谷氨酰转肽酶和半胱氨酰亚砜裂解酶表现高 活性，而催化产生甲醛，尤其是在香菇子实体细胞被超声破碎之后，如不控制 匀浆液温度，甲醛将在短时间内大量产生。将待测样品在作灭酶处理前保持低 温，可有效地控制相关酶活性，避免因酶催化作用而产生甲醛使检测结果失真 的情况发生。
酶遇热易失活。将经过前处理的香菇匀浆液在IO(TC沸水浴中放置5 min, 可保证酶的活力完全丧失。
经灭酶处理的样品应立即置于冰水浴中冷却。因香燕匀浆液经过高温灭酶 处理后，整体都处于高温状态，此时甲醛也处于高的饱和蒸汽压状态，应立即 降温收敛，防止甲醛挥发损失。
冷却后的样品用超声仪满功率(100W)超声30min，破碎香菇子实体细胞， 甲醛分子即从细胞组织中溶出，并溶于浸提水中。将超声处理后的样品于4"C下 放置过夜，使甲醛更完全地溶出扩散到周围水环境中。
将放置12小时后的样品离心取上清液，进行常规HPLC分离和检测-往上 清液中加入0.5ml 0.05%的DNPH乙腈溶液衍生剂，于60。C水浴中衍生反应 15min。将衍生后的反应液冷却，过膜。HPLC色谱条件
进样量20pL;
流动相乙腈水=60 : 40;
流速lml mirf1; 检测波长355nm。
本方法将香菇样品的整个前处理过程控制在低温环境中进行，可有效地抑 制相关酶活性，避免因酶催化作用而产生甲醛；将样品在沸水浴中高温灭酶能 使酶的活力完全丧失，使香菇子实体细胞的破碎过程和甲醛检测过程不再受到 酶的影响；结合使用HPLC分离甲醛和紫外检测器检测，能够准确测定香菇中 甲醛含量，可真实地反映香菇甲醛含量，适用于鲜香菇样品或干香菇制品中甲 醛的检测。
具体实施例方式
实施例l
称取500g鲜香菇样品，4"C预冷30min后放入匀浆机中，在冰水浴环境下 匀浆。秤取5g匀浆液加入到盛有50ml预冷水的具塞三角瓶中，用分散机进行 分散后放置于冰水中。
将分散后的鲜菇匀浆液在10(TC沸水浴中高温灭酶5min，取出用冰水降温 冷却。
将灭酶、冷却后的匀浆液用超声仪满功率(100W)超声30min，取出于4
"C下放置12小时。
将放置12小时的样品取出，6000rpm离心5min。吸取lml上清液于具塞比 色管中，加入0.5ml0.05。/。的DNPH乙腈溶液衍生剂，于6(TC水浴中衍生反应 15min，流水冷却，过膜，进样HPLC分离和检测。
HPLC色谱条件
进样量20nL;
流动相乙腈水=60 : 40;
流速lml min-1;
检测波长355nm。
根据色谱图中甲醛吸收峰面积计算得出该鲜香菇样品中的甲醛含量为
2.68mg/kg。
对照实验采用传统的方法(即通过蒸馏从香恭样品中提取甲醛，进行HPLC 分离、测定)对相同鲜香菇样品进行检测，测定甲醛含量为23.06mg/kg。
说明使用本发明的方法，由于消除了样品处理过程中相关酶的影响，得到 的测定结果明显低于对照方法，更接近样品中的甲醛实际含量。
实施例2:
称取50g干香菇样品，用粉碎机粉碎至200目。秤取5g干菇粉加入到盛有
50ml预冷水的具塞三角瓶中，摇匀。
将摇匀后的样品在IO(TC沸水浴中高温灭酶5min，取出用冰水降温冷却。 将灭酶、冷却后的匀浆液用超声仪满功率(100W)超声30min，取出于4
t:下放置12小时。
将放置12小时后的样品取出，6000rpm离心5min。吸取lml上清液于具塞 比色管中，加入0.5ml0.05。/。的DNPH乙腈溶液衍生剂，于6(TC水浴中衍生反应 15min，流水冷却，过膜，进样HPLC分离和检测。
H
PLC色谱条件
进样量20pL;流动相乙腈水=60 : 40;
流速lml mirf1; 检测波长355nm。 根据色谱图中甲醛吸收峰面积计算得出该干香菇样品中的甲醛含量为: 384.55mg/kg。
权利要求
1、一种检测香菇中甲醛含量的方法，其特征在于包括下列步骤a.样品处理把鲜香菇置于4℃预冷30分钟，在冰水浴中破碎匀浆，用冰水稀释菇浆，经分散机分散置于冰水浴中；或把干香菇粉碎，使其细度达200目以上，加冰水混合摇匀；b.灭酶经处理的香菇样品置于100℃沸水浴中，放置5分钟；c.破壁灭酶处理后的样品置于冰水浴中冷却，用超声破碎细胞壁，4℃放置12小时；d.对浆料离心，取上清夜；对上清夜进行HPLC分离、测定；e.根据色谱图中甲醛吸收峰面积计算得出香菇样品中的甲醛含量。
2、 如权利要求l所述检测香菇中甲醛含量的方法，其特征在于步骤c中用超声 仪以功率100W超声30分钟。
全文摘要
本发明公开了一种检测香菇中甲醛含量的方法，适用于鲜香菇样品或干香菇制品中甲醛的检测。本发明方法包括下列步骤在冰水浴中对样品进行处理、100℃沸水浴中高温灭酶、超声破碎子实体细胞、HPLC分离、测定甲醛含量。本方法将香菇样品的整个前处理过程控制在低温环境中进行，可有效地抑制相关酶活性，避免因酶催化作用而产生甲醛；将样品在沸水浴中高温灭酶能使酶的活力完全丧失，使香菇子实体细胞的破碎过程和甲醛检测过程不再受到酶的影响；结合使用HPLC分离甲醛和紫外检测器检测，能够准确检测出香菇中的甲醛含量。
文档编号G01N30/02GK101196496SQ20071016477
公开日2008年6月11日 申请日期2007年12月17日 优先权日2007年12月17日
发明者励建荣, 胡子豪 申请人:浙江工商大学