专利名称：芍杞颗粒剂的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种芍杞颗粒(养肝利胆颗粒)制剂的质量检测方法，属于对药品进 行质量控制的技术领域。
背景技术：
慢性胆道感染、胆石病是一种世界范围的常见病，长期以来严重影响人类的健康， 其发病率在我国日渐升高，据我国多省市普查结果，其发病高达18%，超过欧美10%。专家 们认为，按中年以上十亿人口 5%计算，在我国至少有2500万慢性胆道感染、胆石病患者。本申请人在申请号为200610021927.9的专利中，申请保护了治疗胆道感染的 药物及其制备方法，其药物颗粒剂是这样制备的白芍750. 0g、陈皮562. 5g、制何首乌 375. 0g、枸杞子375. 0g、炙甘草187. 5g，加水煎煮三次，加水量分别为6倍、4倍、4倍量。第 一次煎煮先浸泡30分钟，每次煮沸回流1小时；滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为 1.06 1.08(70 80°C)的清膏，冷至室温，离心分离(3500 4000转/分，离心20分 钟)，收集离心液并减压浓缩成相对密度为1. 20 1. 22 (75 80°C )的清膏，60 70°C减 压干燥，干浸膏粉碎成细粉，加入适量糊精，混勻，用乙醇制成颗粒，干燥，制成1000g。该芍 杞颗粒(养肝利胆颗粒)由白芍、枸杞子、何首乌、陈皮、炙甘草等5味药组成，具养肝柔肝， 利胆止痛等作用。该药物主治慢性胆道感染证属肝阴不足者，剂型为颗粒剂。由于该药物 是一种新药，目前尚缺乏一种具体的能够有效控制该颗粒剂生产质量的检测方法和质量标 准，故不能保证药品临床治疗的有效性、安全性。

发明内容
本发明的目的，是针对上述现有养肝利胆颗粒尚缺乏能有效的控制产品质量，及 无科学合理的质量检测方法和控制标准，根据养肝利胆颗粒方中药材的特性及制备工艺， 对该颗粒剂的鉴别检查和含量测定进行反复研究筛选，提供一种芍杞颗粒(养肝利胆颗 粒)制剂的检测方法。它是具体可行的成分鉴别、含量测定方法，所拟定的鉴别方法专属性 强，含量测定准确度高，重现性好，为生产单位、检测机构提供了检测指标、检测手段和技术 方法等，以能更好的指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，并有效的控制养肝利胆颗粒 的质量，从而确保该药物的临床疗效和安全性。本发明所述的芍杞颗粒剂是这样构成的它由白芍750. 0g、陈皮562. 5g、制何首 乌375. 0g、枸杞子375. 0g、炙甘草187. 5g和和适当辅料制备而成。本发明芍杞颗粒剂的制备方法以上五味药材，加水煎煮三次，加水量分别为6 倍、4倍、4倍量。第一次煎煮先浸泡30分钟，每次煮沸回流1小时；滤过，合并滤液，减压浓 缩至相对密度为1. 06 1. 08(70 80°C )的清膏，冷至室温，离心分离(3500 4000转/ 分，离心20分钟)，收集离心液并减压浓缩成相对密度为1. 20 1. 22 (75 80°C )的清膏， 60 70°C减压干燥，干浸膏粉碎成细粉，加入适量糊精，混勻，用乙醇制成颗粒，干燥，制成 lOOOg，即得。
本发明所述检测方法主要包括性状、检查、鉴别及含量测定项目；其中鉴别是 对该制剂中陈皮的薄层鉴别、制何首乌的薄层鉴别、枸杞子的薄层鉴别、炙甘草中所含甘草 酸铵的薄层鉴别；含量测定是对制剂中白芍所含芍药苷的含量测定。陈皮的鉴别是以对照药材陈皮和对照品橙皮苷为对照品，并分别以乙酸乙酯甲 酸水=100 17 13和甲苯乙酸乙酯甲酸水=20 10 1 1为展开剂的二 次展开的薄层色谱鉴别。制何首乌的鉴别是以对照药材何首乌和对照品大黄素为对照品，以甲苯乙酸乙 酯甲酸=15 2 1为展开剂的薄层色谱鉴别。枸杞子的鉴别是以对照药材枸杞子为对照品，以石油醚(60 90°C )乙酸乙 酯冰醋酸=10 7 0.5为展开剂的薄层色谱鉴别。炙甘草的鉴别是以对照品甘草酸铵为对照，以正丁醇冰醋酸水=6 1 3 为展开剂的薄层色谱鉴别。芍药苷的含量测定是以对照品芍药苷为对照，以甲醇0. 05mol/L磷酸二氢钾溶 液醋酸异丙醇=67 173 4 4为流动相的高效液相色谱法。具体的鉴别方法包括以下项目(1)陈皮的薄层鉴别取本品适量，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸至近干，残渣加甲醇使溶解，作 为供试品溶液；另取陈皮对照药材，同法制成对照药材溶液；再取橙皮苷对照品，加适量甲 醇制成对照品溶液；吸取上述三种溶液，分别点于同一用氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层 板上，以乙酸乙酯甲醇水=100 17 13为展开剂，展开，取出，晾干，再以甲苯乙 酸乙酯甲酸水=20 10 1 1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化 铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应 的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(2)制何首乌的薄层鉴别取本品适量，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣用三氯甲烷洗涤数次， 至三氯甲烷近无色，合并三氯甲烷洗液，浓缩，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材，同法 制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加适量甲醇制成对照品溶液；吸取上述三种溶液， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=15 2 1为展开剂，展开，取 出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相 应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(3)枸杞子的薄层鉴别取本品适量，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用乙酸乙 酯提取，合并提取液，蒸干，残渣加乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药 材，加水，煮沸，滤过，滤液同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧 甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚乙酸乙酯冰醋酸=10 7 0.5 为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色 谱相同位置上，显相同颜色的荧光斑点。(4)炙甘草的薄层鉴别 取本品，研细，加乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，加水使溶解，转移至离心管中，再加稀盐酸，超声处理，静置，离心，取沉淀物，加稀乙醇使溶解，用碳酸氢钠溶液调节PH至 中性，离心，取上清液，作为供试品溶液；另取甘草酸铵对照品，加稀乙醇制成对照品溶液， 吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上， 以正丁醇冰醋酸水=6 1 3上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 (254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。更具体的鉴别方法包括以下项目(1)陈皮的薄层鉴别取本品适量，研细，取3g，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸至近干，残 渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；另取陈皮对照药材2g，同法制成对照药材溶液；再 取橙皮苷对照品，加适量甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；吸取上述三种 溶液各5ul，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯甲 醇水=100 17 13为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯乙酸乙酯甲酸 水=20 10 1 1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置 紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点。(2)制何首乌的薄层鉴别取本品适量，研细，取10g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣 用三氯甲烷洗涤数次，至三氯甲烷近无色，合并三氯甲烷洗液，浓缩至约1ml，作为供试品溶 液；另取何首乌对照药材0. 5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加适量甲醇制 成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB) 实验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸 =15 2 1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在 与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(3)枸杞子的薄层鉴别取本品适量，研细，取0. 5g，加甲醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加 水IOml使溶解，用乙酸乙酯提取两次，每次10ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加乙酸 乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材lg，加水30ml，煮沸15分钟，滤过， 滤液同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)实验，吸取 上述两种溶液各2 3ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以 石油醚(60 90°C )乙酸乙酯冰醋酸=10 7 0.5为展开剂，展开(30 35°C，预 先饱和20分钟)，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色 谱相同位置上，显相同颜色的荧光斑点。(4)炙甘草的薄层鉴别取本品5g，研细，加乙醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，加水20ml使溶 解，转移至离心管中，再加稀盐酸5ml，超声5分钟，静置，离心，取沉淀物，加稀乙醇Iml使溶 解，用10%碳酸氢钠溶液调节pH至中性，离心，取上清液，作为供试品溶液；另取甘草酸铵 对照品，加稀乙醇制成每Iml含有Img的溶液，最为对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典 2005年版一部附录VI B)实验，吸取上述两种溶液5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为 粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以正丁醇冰醋酸水=6 1 3上层溶液为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；芍药苷的含量测定是以芍药苷为对照品，以甲醇0. 05mol/L磷酸二氢钾溶液 醋酸异丙醇=67 173 4 4为流动相的高效液相色谱法。所述白芍所含芍药苷的含量测定以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇0. 05mol/L磷酸二氢钾溶液醋 酸异丙醇=67 173 4 4为流动相，检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算 应不低于2000 ；精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成Iml含0. 05mg的对照品溶液；取 本品，研细，取约0. 2g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重 量，功率135W及频率59hHz超声处理30分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻， 滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液 相色谱仪，测定，即得，本品每袋含白芍以芍药苷计，不得少于48. Omg ；更具体的白芍所含芍药苷的含量测定以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇0. 05mol/L磷酸二氢钾溶液醋 酸异丙醇=67 173 4 4为流动相，检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算 应不低于2000 ；精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 05mg的对照品溶液； 取本品，研细，取约0. 2g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定 重量，超声处理(功率135W，频率59kHz) 30分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇 勻，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注 入液相色谱仪，测定，即得，本品每袋含白芍以芍药苷计，不得少于48. Omg0为了确保本发明的成分鉴别和含量测定方法科学、合理、可行，本申请人对方法中 药品成分的鉴别和含量测定方法进行了研究，具体试验资料如下—、陈皮的薄层鉴别研究参考《中国药典》一部收载的中药材陈皮的薄层鉴别方法，以橙皮苷为对照品，以 乙酸乙酯-甲醇-水(100 17 13)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20 10 1 1) 为展开剂二次展开，置紫外光灯(365nm)下检视，经六批样品试验观察确证本法可行，阴性 对照试验未见干扰。橙皮苷Rf值约为0. 2 ；斑点之间分离较好，收入标准正文(8cm，Rf = 0. 15 0. 20)。二、制何首乌的薄层鉴别研究为蓼科植物首乌干燥块根的炮制加工品。何首乌主要含有大黄素等蒽醌类成分。 本法以大黄素为对照品，甲苯乙酸乙酯甲酸=15 2 1为展开剂，展距8cm，置紫外 灯(365nm)下检视，斑点清晰，与邻近斑点分离较好，Rf值约为0. 4，经六批样品试验观察确 证本法可行，阴性对照试验未见干扰。收入标准正文(8cm，Rf = 0. 4)。三、枸杞子的薄层鉴别研究参考《中国药典》一部收载的中药材枸杞子项下的薄层鉴别方法，取枸杞子水提 液，用乙酸乙酯振摇提取制成供试品溶液，用枸杞子对照药材同法制得对照药材溶液，点样 于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯氯仿甲醇(3 2 1)为展开剂，展距12cm，置紫 外光灯(365nm)下检视，供方品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝 色荧光斑点，Rf约0.8，但样品斑点不太清晰。研究中又采用雷氏盐沉淀盐酸甜菜碱，以除去部分杂质，纯化供试品溶液。具体操作如下取枸杞子5g，加蒸馏水30ml，用盐酸调PH = 1，加入活性炭1. Og煮沸，冷却过滤过，滤液加入新鲜配制的2%雷氏盐溶液20ml，搅拌，放 于冰箱中3小时，用G4垂熔玻璃漏斗滤过，沉淀用少量冰水洗涤后，加入丙酮Iml使溶解， 作供试品溶液；另取枸杞子对照药材2g，同法制成对照药材溶液；再取盐酸甜菜碱对照品， 加适量丙酮制成每Iml含0. 5mg盐酸甜菜碱对照品的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱 法，吸取上述三种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸 (10 6 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试剂显色。供试品色谱中，在对照 药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，空白无干扰。甜菜碱Rf值约为 0. 48，显桔红色斑点，样品中甜菜碱斑点与其他成分的斑点得到很好的分离。但该法操作繁 琐，且颗粒剂样品滤过困难。最终放弃。后重新研究考查了供试品的前处理方式和展开系统，具体为取本品细粉0.5g， 加甲醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，用乙酸乙酯提取两 次，每次10ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液；另取枸杞 子对照药材lg，加水30ml，煮沸15分钟，滤过，滤液同法制成对照药材溶液；吸取上述两种 溶液各2 3ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚 (60 90°C )乙酸乙酯冰醋酸=10 7 0.5为展开剂，展开(30 35°C，预先饱和 20分钟)，展距8cm，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材 色谱相同位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照试验未见干扰。收入标准正文(8cm，Rf =0. 48)。四、炙甘草的薄层鉴别研究养肝利胆颗粒处方中其他药材对炙甘草的薄层鉴别试验干扰较大，参照《中国药 典》一部甘草项下薄层鉴别方法，以乙醚加热提取，正丁醇萃取纯化，蒸干，残渣加甲醇使溶 解，作为供试品溶液，点样于同一用氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯甲 酸冰醋酸水(15 1 1 2)为展开剂，展开，展距8cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙 醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对 照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，Rf值约为0. 2。但阴性对 照有一定干扰。后重新研究考查了供试品的前处理方式和展开系统，具体为取本品5g，研 细，加乙醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，加水20ml使溶解，转移至离心管中，再 加稀盐酸5ml，超声5分钟，静置，离心，取沉淀物，加稀乙醇Iml使溶解，用10%碳酸氢钠溶 液调节PH至中性，离心，取上清液，作为供试品溶液；另取甘草酸铵对照品，加稀乙醇制成 每Iml含有Img的溶液，最为对照品溶液，吸取上述两种溶液5ul，分别点于同一以羧甲基纤 维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以正丁醇冰醋酸水=6 1 3上层溶液为 展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应 的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照试验未见干扰。收入标准正文(8cm，Rf = 0.40)。五、芍药苷的含量测定方法研究仪器与试剂Waters 600高效液相色谱仪(VWD检测器)美国Waters公司；HYPERS IL C18柱(4. 6X 30η11η，5μ)大连依利特科学仪器有限公司；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯；
芍药苷对照品中国药品生物制品检定所。批号0736-9710，0736-9912，供含量
测定用。①色谱条件选择色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，HYPERSIL C18柱(4. 6 X 300mm, 5μ)；流 动相甲醇0. 05mol/L磷酸二氢钾溶液醋酸异丙醇=67 173 4 4 ；检测波长 230nm ；柱温室温；理论板数按芍药苷峰计算不低于2000。此条件下，芍药苷能与其它组分达到基线分离，与相邻的色谱峰分离度大于2。阴 性对照无干扰。实验中还曾以甲醇水=22 78为流动相，此条件下芍药苷亦能与其它组分达 到基线分离，与相邻的色谱峰分离度大于2。但保留时间偏长，达20分钟左右，故未被选用。②供试品溶液的制备芍杞颗粒采用水提取工艺，成品质量标准采用芍药苷的含量为测定指标。因此，申 请人参考《中国药典》2005版一部中芍药药材含量测定时样品的处理方法，采用甲醇为提取 溶剂，超声提取，并对不同超声时间(15、30、60分钟)进行了考察，结果表明颗粒剂超声时 间为30分钟，芍药苷的提取率最高，见表1。实验中还比较了不同提取溶剂对颗粒剂中芍药苷的提取率，未见明显差别，RSD < 1%，见表2。表1不同超声时间的比较(η = 3)
超声时间_峰面积_含量(mg/g)
15min 1656330 6.09 30min 1823629 6.28 60min_1682989_&Λ4_表2不同提取溶剂的比较
超声时间_峰面积_含量(mg/g)
稀乙烯0.31826.21
甲醇0.19886.28
甲醇-水(2: 5)0.20406.26优选后的样品制备方法为取本品内容物，混勻，研细，取约0. 2g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇溶液25ml密塞，称定重量，超声提取30分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇 勻，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。③线性关系考察供试品溶液制备精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药苷对照品适量，芍药苷对照品5. 03mg，置25ml容量瓶中。以甲醇溶解并稀释至刻度。以此为母 液依次配成 60. 3μ g/ml、40. 2、μ g/ml、20. 1 μ g/ml、10. 0 μ g/ml、5. 03 μ g/ml 的一系列浓 度梯度的对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液1 5，各10 μ 1，按上述色谱条件进样测 定。以峰面积积分值为纵坐标(Y)，芍药苷对照品浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线，计算得 回归方程Y (Area) = 37096X (Amount [ug/ml]) —33204，r = 0. 9994芍药苷浓度在5. 03 60. 3 μ g/ml范围内线性关系良好，见表3。表3线性关系考察结果
X(ug/ml)Y(Area)RSD(%’n=3)5. 031677311.7110.03414410. 6220.17060610.6140.214263062. 0260.322254950. 52
④精密度试验
精密吸取同一供试品咨勤夜10μ 1，重i复进样5次，计算芍药苷的峰面积相对标准偏差，见表4。
表4精密度试验结果
次数对照品RSD对照品RSD样品 RSD峰面积(%)峰面积(%)峰面积 (%)13514520. 6622527042.081693386 1.35235013222458551704005335575422628841689393435038921511881646938535310022563661668172⑤重复性试验同一批号的样品，平行取样5次，分别制得样品供试液。精密吸取样品供试液 10 μ 1，重复进样，计算芍药苷的峰面积相对标准偏差，见表5。表5重复性试验结果 ⑥回收率试验采用加样回收法，取己知芍药苷含量6. 06mg/g的养肝利胆颗粒，分别添加芍药对 照品，按上述色谱条件测定，以下式计算回收率，结果表明本法具有良好的回收率，见表6。 表6回收率试验结果 ⑦药材中芍药苷的含量测定因药材中芍药的品种较多，三批药材经鉴定为毛茛科植物芍药Paeonia lactifloraPall的干燥根。实验中对三批芍药药材中芍药苷的含量进行了测定，均符合《中 国药典》(一部)(2005版)芍药药材的规定。结果如下，见表7。表7药材中芍药苷的含量测定结果序号水含量(％)含量(%)RSD (%)19. 4117. 462. 3829. 6017. 160.8139. 7117. 171. 58⑧样品测定精密吸取供试品溶液5 μ 1，按上述色谱条件测定，按校正的标准曲线，计算本品每 袋颗粒剂中的含量。三批样品测定结果列于表8。表8样品含量测定结果
批号_含量(mg/袋)_RSD (%，n=3)
00080149. 122.67
00080248.642.13
00080350.561.17⑨含量限度《中国药典》2005版一部规定芍药药材含芍药苷(C23H28O11)不得少于1.60%，而制 备工艺中芍药苷的转移率不低于50%，并考虑到生产过程中可能存在的损耗，暂定本品每 袋含芍药苷(C23H28O11)每袋含芍药苷不得少于48. Omg。六批样品(三批小试及三批中试) 的含量均符合此规定。本申请人通过对该制剂中有效成份进行的研究，建立了科学合理的检测方法和质 量控制指标，形成一个完善的质量控制标准，对制剂中有效成份进行鉴别，并对有效成份的 含量进行检测，以达到对该制剂的质量进行有效控制，并保证产品的临床疗效和安全性。本发明的有利益效果与现有技术相比，本发明通过对该制剂中有效成份进行的研究，建立了科学合理 的检测方法和质量控制指标，形成一个完善的质量控制标准，对制剂中有效成份进行鉴别， 并对有效成份的含量进行检测。本发明的质量检测方法专属性强、精密度高，重现性好，回 收率高，测量结果准确，可有效控制芍杞颗粒的质量，确定标准中本品每袋含芍药以芍药苷 计不少于48. Omg，从而保证了该制剂的临床疗效和安安全性。
具体实施例方式本芍杞颗粒的检测方法处方白芍750.Og;陈皮562. 5g;制何首乌375. Og ；枸杞子375. Og ；炙甘草 187. 5g。制法以上五味药材，加水煎煮三次，加水量分别为6倍、4倍、4倍量。第一次煎 煮先浸泡30分钟，每次煮沸回流1小时；滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1. 06
131. 08(70 80°C )的清膏，冷至室温，离心分离(3500 4000转/分，离心20分钟)，收集 离心液并减压浓缩成相对密度为1. 20 1. 22(75 80°C )的清膏，60 70°C减压干燥，干 浸膏粉碎成细粉，加入适量糊精，混勻，用乙醇制成颗粒，干燥，制成lOOOg，即得。性状本品为棕褐色颗粒，味微苦，气香。鉴别(1)取本品适量，研细，取3g，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸至近干， 残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；另取陈皮对照药材2g，同法制成对照药材溶液； 再取橙皮苷对照品，加适量甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；吸取上述三种 溶液各5ul，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯甲 醇水=100 17 13为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯乙酸乙酯甲酸 水=20 10 1 1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置 紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点；(2)取本品适量，研细，取10g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残 渣用三氯甲烷洗涤数次，至三氯甲烷近无色，合并三氯甲烷洗液，浓缩至约1ml，作为供试品 溶液；另取何首乌对照药材0. 5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加适量甲醇 制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录 VIB)实验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯乙酸乙酯 甲酸=15 2 1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱 中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(3)取本品适量，研细，取0.5g，加甲醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残 渣加水IOml使溶解，用乙酸乙酯提取两次，每次10ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙酸乙酯 Iml使溶解，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材lg，加水30ml，煮沸15分钟，滤过，滤液 同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)实验，吸取上述 两种溶液各2 3ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油 醚(60 90°C )乙酸乙酯冰醋酸=10 7 0.5为展开剂，展开(30 35°C，预先饱 和20分钟)，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相 同位置上，显相同颜色的荧光斑点；(4)取本品5g，研细，加乙醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，加水20ml 使溶解，转移至离心管中，再加稀盐酸5ml，超声5分钟，静置，离心，取沉淀物，加稀乙醇Iml 使溶解，用10%碳酸氢钠溶液调节pH至中性，离心，取上清液，作为供试品溶液；另取甘草 酸铵对照品，加稀乙醇制成每Iml含有Img的溶液，最为对照品溶液，照薄层色谱法(中国 药典2005年版一部附录VI B)实验，吸取上述两种溶液5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素 钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以正丁醇冰醋酸水=6 1 3上层溶液为展开 剂，展开，取出晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位 置上，显相同颜色的斑点；检查应符合颗粒剂项下有关的各项规定(中国药典2005版一部附录IC)。含量测定白芍所含芍药苷的含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VI D)测定。 以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇0. 05mol/L磷酸二氢钾溶液醋 酸异丙醇=67 173 4 4为流动相，检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算 应不低于2000 ；精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 05mg的溶液，即得对 照品溶液；取本品，研细，取约0. 2g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml， 密塞，称定重量，超声处理(功率135W，频率59kHz) 30分钟，再称定重量，用甲醇补足减失 的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10ul，注入液相色谱仪，测定，即得，本品每袋含白芍以芍药苷计，不得少于48. Omg0
权利要求
一种芍杞颗粒剂的检测方法，所述芍杞颗粒制剂由白芍750.0g陈皮562.5g制何首乌375.0g枸杞子375.0g炙甘草187.5g和适当辅料制备而成；该检测方法包括性状、检查、鉴别及含量测定项目；其特征在于所述鉴别是对该制剂中陈皮的薄层鉴别，制何首乌的薄层鉴别，枸杞子的薄层鉴别，炙甘草中所含甘草酸铵的薄层鉴别；所述含量测定是对制剂中白芍所含芍药苷的含量测定；陈皮的鉴别是以对照药材陈皮和对照品橙皮苷为对照品，并分别以乙酸乙酯∶甲酸∶水＝100∶17∶13和甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸∶水＝20∶10∶1∶1为展开剂的二次展开的薄层色谱鉴别；制何首乌的鉴别是以对照药材何首乌和对照品大黄素为对照品，以甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝15∶2∶1为展开剂的薄层色谱鉴别；枸杞子的鉴别是以对照药材枸杞子为对照品，以石油醚∶乙酸乙酯∶冰醋酸＝10∶7∶0.5为展开剂的薄层色谱鉴别；炙甘草的鉴别是以对照品甘草酸铵为对照，以正丁醇∶冰醋酸∶水＝6∶1∶3为展开剂的薄层色谱鉴别；芍药苷的含量测定是以对照品芍药苷为对照，以甲醇∶0.05mol/L磷酸二氢钾溶液∶醋酸∶异丙醇＝67∶173∶4∶4为流动相的高效液相色谱法。
2.根据权利要求1所述芍杞颗粒剂的检测方法，其特征在于所述检测方法包括以下项目(1).陈皮的薄层鉴别取本品适量，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸至近干，残渣加甲醇使溶解，作为供 试品溶液；另取陈皮对照药材，同法制成对照药材溶液；再取橙皮苷对照品，加适量甲醇制 成对照品溶液；吸取上述三种溶液，分别点于同一用氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上， 以乙酸乙酯甲醇水=100 17 13为展开剂，展开，取出，晾干，再以甲苯乙酸乙 酯甲酸水=20 10 1 1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试 液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置 上，显相同颜色的荧光斑点；(2).制何首乌的薄层鉴别取本品适量，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣用三氯甲烷洗涤数次，至三 氯甲烷近无色，合并三氯甲烷洗液，浓缩，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材，同法制成 对照药材溶液；再取大黄素对照品，加适量甲醇制成对照品溶液；吸取上述三种溶液，分别 点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=15 2 1为展开剂，展开，取出， 晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位 置上，显相同颜色的荧光斑点。(3).枸杞子的薄层鉴别取本品适量，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用乙酸乙酯提 取，合并提取液，蒸干，残渣加乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材，加 水，煮沸，滤过，滤液同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤 维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚乙酸乙酯冰醋酸=10 7 0.5为展开 剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相同位置上，显相同颜色的荧光斑点；(4).炙甘草的薄层鉴别取本品，研细，加乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，加水使溶解，转移至离心管中，再加 稀盐酸，超声处理，静置，离心，取沉淀物，加稀乙醇使溶解，用碳酸氢钠溶液调节PH至中 性，离心，取上清液，作为供试品溶液；另取甘草酸铵对照品，加稀乙醇制成对照品溶液，吸 取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以正 丁醇冰醋酸水=6 1 3上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下 检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(5).芍药苷的含量测定以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇0. 05mol/L磷酸二氢钾溶液醋酸异 丙醇=67 173 4 4为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低 于2000 ；精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成对照品溶液；取本品，研细，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声处理，再称定重量，用甲醇补足减失的 重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注 入液相色谱仪，测定，即得，本品每袋含白芍以芍药苷计，不得少于48. Omg ；
3.根据权利要求2所述芍杞颗粒剂的检测方法，其特征在于更具体的检测方法包括(1).陈皮的薄层鉴别取本品适量，研细，取3g，加甲醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸至近干，残渣加 甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；另取陈皮对照药材2g，同法制成对照药材溶液；再取橙 皮苷对照品，加适量甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；吸取上述三种溶液各 5ul，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯甲醇水 =100 17 13为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯乙酸乙酯甲酸水= 20 10 1 1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm 紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜 色的荧光斑点；(2).制何首乌的薄层鉴别取本品适量，研细，取10g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用三氯 甲烷洗涤数次，至三氯甲烷近无色，合并三氯甲烷洗液，浓缩至约1ml，作为供试品溶液；另 取何首乌对照药材0. 5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加适量甲醇制成每 Iml含Img的溶液，作为对照品溶液，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板 上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=15 2 1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯 下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光 斑点；(3).枸杞子的薄层鉴别取本品适量，研细，取0. 5g，加甲醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加 水IOml使溶解，用乙酸乙酯提取两次，每次IOml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加乙酸 乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材lg，加水30ml，煮沸15分钟，滤 过，滤液同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各2 3ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以沸点60 90°C的石油醚乙酸乙酯冰醋酸= 10 7 0.5为展开剂，展开(30 35°C，预先饱和20分钟)，取出，晾干，置365nm紫外光 灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相同位置上，显相同颜色的荧光斑点；(4).炙甘草的薄层鉴别取本品5g，研细，加乙醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，加水20ml使溶解， 转移至离心管中，再加稀盐酸5ml，超声5分钟，静置，离心，取沉淀物，加稀乙醇Iml使溶 解，用10%碳酸氢钠溶液调节pH至中性，离心，取上清液，作为供试品溶液；另取甘草酸铵 对照品，加稀乙醇制成每Iml含有Img的溶液，作为对照品溶液，吸取上述两种溶液各5ul， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以正丁醇冰醋酸水= 6:1: 3上层溶液为展开剂，展开，取出晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在 与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(5).芍药苷的含量测定以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇0.05mol/L磷酸二氢钾溶液醋酸异 丙醇=67 173 4 4为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于 2000 ；精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 05mg的对照品溶液；取本品，研 细，取约0. 2g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，功率 135W及频率59kHz超声处理30分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续 滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪， 测定，即得，本品每袋含白芍以芍药苷计，不得少于48. Omg0
全文摘要
本发明公开了一种芍杞颗粒(养肝利胆颗粒)剂的检测方法，该检测方法包括性状、检查、鉴别、含量测定项目；所述鉴别是对该制剂中陈皮的薄层鉴别，何首乌的薄层鉴别，枸杞子的薄层鉴别，甘草的薄层鉴别；所述含量测定是对制剂中白芍所含芍药苷的含量测定。它是针对该颗粒剂尚无能有效的控制产品质量、及无科学合理的质量控制检测方法，根据本方中药材的特性及制备工艺，对该颗粒剂的鉴别检查和含量测定进行研究筛选，制定了具体可行的成分鉴别和含量测定方法，所采用的方法专属性强、精密度高，重现性好，回收率高，测量结果准确，从而建立了芍杞颗粒制剂的质量控制标准，以有效控制芍杞颗粒的质量，从而保证了该药物的临床疗效和安全性。
文档编号G01N30/02GK101926889SQ20101025140
公开日2010年12月29日 申请日期2010年8月9日 优先权日2010年8月9日
发明者张彤, 朱培庭, 李彦, 耿炤, 陶建生 申请人:四川美大康药业股份有限公司