专利名称：利用dmso萃取、测定叶绿素含量的新方法
技术领域：
本发明涉及一种植物叶绿素萃取、测定方法，尤其是利用DMSO快速萃取、测定植物叶绿素含量的新方法。
背景技术：
叶绿素是植物进行光合作用的主要色素，叶绿素吸收太阳光后经过光反应和暗反应两个连续过程，把CO2和H2O转变为糖类物质并储存在绿色植物营养器官中，从而为绿色植物生长发育和产量形成提供能源物质。叶绿素实际上存在于所有能营造光合作用的生物 体中，包括绿色植物、原核的蓝绿藻(蓝菌)和真核的藻类。高等植物叶绿体中的叶绿素主要有叶绿素a和叶绿素b两种，可以说没有叶绿素，植物就不能把太阳光能转化成化学能储存在人类最终的食物中。因此，在提高农作物产量和品质的相关科学研究中常常需要测定叶绿素含量受栽培措施或作物生长环境影响的程度，以便正确评价人工调控作物生长发育及提高产量和品质的某项具体措施的可行性。由于叶绿素不溶于水，因此目前在科学研究中对叶绿素进行测定时，常采用先配制丙酮无水乙醇(V:V)=1:1的混合溶剂，把待测样品称重后放入盛有丙酮无水乙醇(V:V) =1:1混合溶剂的容器内，并在黑暗中萃取24小时以上。采用丙酮无水乙醇(V:V)=1:1混合溶剂萃取植物样品中叶绿素的方法，虽然改变了过去人们在叶绿素测定中使用丙酮或无水乙醇加入石英砂和待测样品进行研磨、过滤的测定方法，使测定技术变得省力，同时避免了研磨、过滤过程中叶绿素的损失，在叶绿素测定技术上前进了一步。然而，采用丙酮无水乙醇(V:V)=1:1混合溶剂萃取叶绿素的方法仍然存在一些缺点，表现在(1)丙酮和无水乙醇都是较易挥发的有机溶剂，萃取和测定过程中溶剂的挥发会造成叶绿素浓缩，使测定数值偏高而造成测定误差加大；(2)由于叶绿素不稳定，尤其在光照条件下很容易分解，因此要求叶绿素的萃取、测定时尽可能在黑暗条件下短时间内完成。然而，利用丙酮无水乙醇(V:V)=1:1混合溶剂萃取样品中的叶绿素至少需要24小时，萃取效率低、时间长，很容易增加叶绿素的分解量而造成测定数据偏低。(3)叶绿素测定时需要把样品从田间取回到实验室，然后再进行取样、称重、萃取，试验样品从田间到实验室及室内样品处理、称重往往需要较长时间，植物离开赖以生存的土壤环境，叶绿素会加快分解而导致测定误差增大。

发明内容
由于目前叶绿素萃取和测定方法中存在明显的缺点，因此在我们的科学研究中，经过大量的研究找到了一种性质稳定、不易挥发并对叶绿素具有快速萃取作用的溶剂二甲基亚砜(DMS0)，叶绿素萃取过程中可以把萃取溶剂DMSO带至田间，植株活体条件下取待测样品的同时把样品放入DMSO萃取液中萃取，然后带回实验室并进行叶绿素含量的测定。
具体实施例方式预先把洁净的血清瓶编号，向每个血清瓶中加入5mL DMSO后盖上瓶塞并准确称重，按编号顺序把血清瓶放入盖有遮光黑布的容器内带至田间，取待测部位样品后立即把样品放入装有DMSO的血清瓶中并盖好瓶塞及遮光黑布带回实验室，再次按编号称重，两次重量差即为待测样品重，把装有试验样品的血清瓶置于黑暗条件下萃取6-8小时，取萃取液ImL加入4mL DMSO混合均匀后，用分光光度计测定663nm和645nm波长下的光密度值。该方法避免了应用丙酮和无水乙醇萃取样品和测定过程中溶剂挥发造成的测定误差，样品萃取时间短、效率高、减少了叶绿素的分解量，样品叶绿素萃取可在田间进行操作，减少了样品经较长时间的运输和室内处理时间长而导致叶绿素分解和测定误差增大的不利影响。经过多年的研究和在科研中的应用表明该方法6-8小时内即可完成待测样品中叶绿素的全部萃取，田间植物活体取样的同时进行叶绿素萃取，方法更简便、准确、快速。2010年-2011年，在大豆苗期、开花期和结荚期利用DMSO进行田间实际测定叶片叶绿素含量见表I。
表I不同萃取方法对叶绿素含量测定的影响
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结果表明利用DMSO萃取、测定叶绿素含量为1. 24 mg/g、1.28 mg/^[IL33 mg/g,利用丙酮无水乙醇(V:V)=1:1混合溶剂萃取样品并测定叶绿素含量分别为1. 15 mg/g、
I.19 mg/g和1.25 mg/go统计分析表明利用丙酮无水乙醇(V: V) =1:1混合溶剂萃取测定与利用DMSO萃取、测定叶绿素含量相比结果偏低，且差异达显著水平，这与丙酮无水乙醇(V:V) =1:1混合溶剂萃取样品时萃取、测定时间较长和萃取液易挥发有关。
权利要求
1.预先把洁净的血清瓶编号，向每个血清瓶中加入5mL DMSO后盖上瓶塞并准确称重，按编号顺序把血清瓶放入盖有遮光黑布的容器内带至田间，取待测部位样品后立即把样品放入装有DMSO的血清瓶中并盖好瓶塞及遮光黑布带回实验室，再次按编号称重，两次重量差即为待测样品重，把装有试验样品的血清瓶置于黑暗条件下浸提6-8小时，取浸提液ImL加入4mL DMSO混合均匀后，用分光光度计测定663nm和645nm波长下的光密度值。
全文摘要
植物叶绿素测定中应用丙酮和无水乙醇作为萃取液易挥发、且取样及样品处理、萃取时间长而造成叶绿素测定误差增大。本发明提出利用DMSO快速浸提、测定植物叶绿素的一种新方法。预先把洁净的血清瓶编号，向每个血清瓶中加入5mLDMSO后盖上瓶塞并准确称重，按编号顺序把血清瓶放入盖有遮光黑布的容器内带至田间，取待测部位样品后立即把样品放入装有DMSO的血清瓶中并盖好瓶塞和遮光黑布带回实验室，再次按编号称重，两次重量差即为待测样品重，把装有试验样品的血清瓶置于黑暗条件下浸提6-8小时，取浸提液1mL加入4mLDMSO混合均匀后，用分光光度计测定663nm和645nm波长下的光密度值。
文档编号G01N21/31GK102706827SQ20121022276
公开日2012年10月3日 申请日期2012年7月2日 优先权日2012年7月2日
发明者丁伟, 戴航宇, 程茁 申请人:东北农业大学