专利名称：一种改进型马传染性贫血琼扩抗原生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于诊断马传染性贫血病琼脂扩散 反应冻干抗原的生产工艺。
背景技术：
与本发明最为接近的已有技术是中国专利87101214. 6 号名称为"一种用于诊断马传染性贫血病琼脂扩散反应冻干抗原的制 备方法"该技术将接毒细胞培养物分为细胞相病毒及液相病毒分别进 行处理，用一般离心机3000- 6000rp M离心3 0 - 6 0分 钟，每次离心量最大可达3 0 0 0 m 1 ，制备出无色、透明马传染性 贫血病琼脂扩散反应抗原。该方法制备的液体抗原经加冻干保护剂 (按1%量加牛血清白蛋白)后冻干，其冻干抗原在3 7"至少可保 存二个月效价不损失，从而解决了抗原长途和边远地区使用的困难。 存在的不足是1、单位容积病毒培养细胞能生产的单位容积抗原少， 导致成本高、生产效率低下。2、采用离心工艺，离心过程繁瑣、工 艺复杂。解决这些问题已成为急需。
发明的目的克服现有技术的不足，提出一种抗原性更好、工艺 简单、成本低廉、生产效率高的改进型马传染性贫血琼扩抗原生产工 艺。 一种改进型马传染性贫血琼扩抗原生产工艺包括如下步骤清除 毒细胞培养物中的细胞、牛血清及色素；将收获的接毒细胞培养物分 为细胞相病毒(在贴瓶壁细胞中而没有释放到培养液中的病毒)和液 相病毒(在脱落瓶壁的细胞中或释放到培养液中的病毒)并分别进行
3胞相病毒直接加入原体积份数的20%的
0. 01MpH7. 4PBS, 3次冻融裂解细胞；倒入有玻璃珠的三角瓶中，加 入乙醚摇晃，然后进行机械正压鼓风除乙醚，放入冰箱冷藏室中在4 。C条件下沉降2小时吸出上清，制备出无色透明的马传染性贫血病琼 脂扩散反应诊断抗原，再标定其效价；最后冻干保存，在液体抗原中 加入1%量的牛血清白蛋白作为冻干保护剂。本发明将现有0. 5%乳汉 液改变为0. 5y。乳汉液和MEM培养基各50y。的混合培养液；将除醚方法 由自然挥发法改为机械正压风法，每一扁瓶(lOOOml容积)病毒细 胞培养细胞能生产20ml抗原，是现有技术的4倍；釆用本发明的工 艺生产的马传贫琼扩抗原与我国现行《规程》生产马传贫琼扩抗原液 在外观性状和抗原性没有差别；与古巴马传贫琼扩抗原和美国马传贫 琼扩抗原相比所产生的琼扩沉淀线更清晰、更致密而且更长，更有利 于判断，即抗原性更好。本发明的马传染性贫血琼扩抗原冻干时添加 的保护剂及其用量解决了琼扩抗原冻干后效价丧失而只能制备液体 抗原的难题。本发明的马传染性贫血琼扩抗原经加保护剂冻干后，在 3 7。C至少可保存二个月，在20-25。C至少可保存半年，在0-4。C至
少可保存两年，抗原效价不降低、解决了抗原长途运输或边远地区使 用的困难；而国外的同类产品是液体制剂，不易长途运输或长期保存。 由于以上原因釆用本发明的工艺生产的马传贫琼扩抗原已经被指定 为北京2008年奥运会香港赛马项目用马的马传贫检测抗原。
具体实施例方式
一种改进型马传染性贫血琼扩抗原生产工艺包括 如下步骤清除毒细胞培养物中的细胞、牛血清及色素；将收获的接毒细胞培养物分为细胞相病毒(在贴瓶壁细胞中而没有释放到培养液 中的病毒)和液相病毒(在脱落瓶壁的细胞中或释放到培养液中的病 毒)并分别进行处理；毒细胞培养物的细胞相病毒直接加入原体积份
数的20%的0. 01MpH7. 4PBS， 3次冻融裂解细胞；倒入有玻璃珠的三 角瓶中，加入乙醚摇晃，然后进行机械正压鼓风除乙醚，放入冰箱冷 藏室中在4'C条件下沉降2小时吸出上清，制备出无色透明的马传染
性贫血病琼脂扩散反应诊断抗原，再标定其效价；最后冻干保存，在 液体抗原中加入1 %量的牛血清白蛋白作为冻千保护剂，即为成品。
权利要求
1、一种改进型马传染性贫血琼扩抗原生产工艺，其特征在于清除毒细胞培养物中的细胞、牛血清及色素；将收获的接毒细胞培养物分为细胞相病毒(在贴瓶壁细胞中而没有释放到培养液中的病毒)和液相病毒(在脱落瓶壁的细胞中或释放到培养液中的病毒)并分别进行处理；毒细胞培养物的细胞相病毒直接加入原体积份数的20％的0.01MpH7.4PBS，3次冻融裂解细胞；倒入有玻璃珠的三角瓶中，加入乙醚摇晃，然后进行机械正压鼓风除乙醚，放入冰箱冷藏室中在4℃条件下沉降2小时吸出上清，制备出无色透明的马传染性贫血病琼脂扩散反应诊断抗原，再标定其效价；最后冻干保存，在液体抗原中加入1％量的牛血清白蛋白作为冻干保护剂。
全文摘要
一种改进型马传染性贫血琼扩抗原生产工艺，清除毒细胞培养物中的细胞、牛血清及色素；将收获的接毒细胞培养物分为细胞相病毒和液相病毒并分别进行处理；毒细胞培养物的细胞相病毒直接加入原体积份数的20％的0.01MpH7.4PBS，3次冻融裂解细胞；倒入有玻璃珠的三角瓶中，加入乙醚摇晃，然后进行机械正压鼓风除乙醚，放入冰箱冷藏室中在4℃条件下沉降2小时吸出上清，制备出无色透明的马传染性贫血病琼脂扩散反应诊断抗原，再标定其效价；最后冻干保存。本发明工艺简单、成本低廉，比现有技术提高成品率4倍，与我国现行《规程》生产马传贫琼扩抗原液在外观性状和抗原性没有差别；比国外同类产品所产生的琼扩沉淀线更清晰、更致密而且更长，更有利于判断，即抗原性更好，可广泛用做各种马的马传贫检测抗原。
文档编号G01N33/531GK101451994SQ20071014476
公开日2009年6月10日 申请日期2007年12月7日 优先权日2007年12月7日
发明者朱远茂, 相文华, 赵立平, 巍 郭 申请人:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所