专利名称：一种用于检测三聚氰胺残留的薄层色谱展开剂及分析方法
技术领域：
本发明涉及一种检测食品中三聚氰胺残留量的展开剂及分析方法。
背景技术：
三聚氰胺(Melanmine)，简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三 聚酰胺，是一种重要的氮杂环有机化工原料，白色结晶粉末，无味。这种化学试剂 常被用于生产塑料、胶水和阻燃剂，在部分亚洲国家，它也被用于制造化肥。它是 一种禁止用于食品、饲料的化学物质，人和动物食用后会发生肾衰竭并导致死亡。
原料乳中三聚氰胺的检测采用《中华人民共和国国家标准》〔GB/T 22400-2008) 所述的高效液相法，具体方法为称取混合均匀的15 g原料乳样品(准确至0. 01 g)， 置于50 mL具塞刻度试管中，加入30 mL乙腈，剧烈振荡6 min，加水定容至满刻 度，充分混匀后静置3 min，用一次性注射器吸取上清液用针式过滤器过滤后，作 为高效液相色谱分析用试样。试样进行液相分析，依据保留时间一致性进行定性识 别的方法。根据三聚氰胺标准物质的保留时间，确定样品中是否含有三聚氰胺。
对其他奶制品则没有统一的标准，借鉴美国FDA的检测方法，具体方法为a. 称取奶粉样品5g (或牛奶10mL),加入50mL 1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入 2mL 2%乙酸铅溶液，超声20min;b.取部分溶液转移至lOmL离心管中，8000rpm/min 离心10min。固相萃取柱PCX小柱活化及平衡3ml甲醇，3ml水；上样加入提取 液3ml;淋冼3ml水，3ml甲醇，弃去淋冼液并将小拄抽干；洗脱5ml 5%氨化 甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制5ml氨水+95ml甲醇)；浓缩50°C ，氮气 吹干，20。％甲醇/水定容至2ml。试样进行液相分析，依据保留时间一致性进行定 性识别的方法。根据三聚氰胺标准物质的保留时间，确定样品中是否含有三聚氰胺。
现有的国标三聚氰胺的检测方法为色谱法，但是该方法需要有完善的实验室， 有经验的技术人员，复杂和昂贵的仪器，而且奶制品前处理过程十分繁琐，不适合 大量样品的筛查。

发明内容
本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种操作简便、便宜、准确、快捷的 一种用于检测三聚氰胺残留的薄层色谱展开剂及分析方法。本发明目的的实现方式为， 一种用于检测三聚氰胺残留的薄层色谱展开剂，由 以下重量份数的成分组成正丁醇4一8份，乙酸乙酯1一4份，水O. 1-l份。 一种用于检测三聚氰胺残留的薄层色谱分析方法，具体步骤如下
1) 硅胶板的预处理用氯仿、甲醇清洗液处理硅胶薄层板
2) 配制展开剂取重量份数为正丁醇4一8份，乙酸乙酯l一4份，水0. 1-1 份或浓度为0. 2-0. 5%的KC1水溶液0. 05-1份配制成展开剂，
3) 显色剂的配制取重量份数为，l一5份0.01 — 2% HgCl2乙醇溶液和l一5 份的0. 1-2%二苯卡巴腙乙醇溶液混合配制成复合显色剂。
4) 被测试样品预处理样品进行透析分离，取透析液蒸干，加其重量50-500 倍量的水溶解，作为待测试样。
5) 薄层色谱分析首先将步骤4)的待测试样，点样到经过步骤l)处理的硅胶 板上，再将薄层板放入倒入展开剂的展开缸中，上行展开至上沿，取出薄层板，吹 千溶剂。
6) 显色将步骤5)中展开的薄层板喷上步骤3)配制的显色剂，在105'C下， 加热10min，显色，完成色谱分析。
本发明作为食品，如奶制品、饲料等中添加和残留三聚氰胺的定性鉴别方法， 经反复试验，该方法操作简便、灵敏度高、重现性好，斑点清晰、分离效果好，经 阴性样品对照，阴性样品无干扰，证明此方法具有专属性及可行性。使用本发明不 需要经验丰富的检验人员和价格高昂的检测设备，即可准确方便地鉴别被测样品中 是否含有三聚氰胺。


图J为奶粉中三聚氰胺的薄层鉴别图，
图2为奶粉中不含三聚氰胺的阴性和阳性薄层对照鉴别图。
具体实施例方式
本发明的展开剂，由以下重量份数的成分组成正丁醇4一8份，乙酸乙酯1 一4份，水O.卜1份。
还可由以下重量份数的成分组成正丁醇4一8份，乙酸乙酯1一4份、浓度为 0. 2-0. 5%的KC1水溶液0. 05-1份。
下面举出本发明的具体实施例
例1 、取一块硅胶薄层板，放入已加有lml氯仿和甲醇(1:1体积比)，展开至上沿，取出晾干，在ll(TC加热烘15min，冷却备用。
把2. 5g奶粉样品用10ml水溶解，或取10ml液体奶样，加入透析处理装置中， 在超声和加热条件下进行透析10-20 min，取透析液蒸干，加其重量200倍量的水 溶解，作为待测试样。
取2mg三聚氰胺样品溶于1L水中，制成对照品溶液。
检验过程，照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，取供试品溶 液25ul硅胶板点样，正丁醇6份，乙酸乙酯2份和水0.5份为展开剂展开，取出 晾千，喷以复合显色剂显色，100'C加热显色5min，至斑点清晰。复合显色剂为2 份0. ]% HgCl2乙醇溶液和4份的0. 5%二苯卡巴腙乙醇溶液的混合液。
结果见图1、图2:供试品色谱中，与三聚氰胺对照品相应的位置上，显相同 颜色的斑点；阴性奶样色谱中，在与三聚氰胺色谱相应位置上，无相同颜色斑点。 说明奶样中是否含有三聚氰胺。
图1中1、 3为奶粉样品，2为三聚氰胺对照品。图2中1、 3为阳性样品，2 为阴性样品。
例2、同例l，不同的是，加其重量50倍量的水溶解，正丁醇8份，乙酸乙酯 2份和水0. 1份为展开剂，复合显色剂为1份0. 01% HgCl2乙醇溶液和1份的0. 1% 二苯卡巴腙乙醇溶液的混合液。
例3、同例l，不同的是，加其重量500倍量的水溶解，正丁醇8份，乙酸乙 酯4份和水1份为展开剂，复合显色剂为5份2% HgCl2乙醇溶液和2份的0. 5%二 苯卡巴腙乙醇溶液的混合液。
例4、同例1，不同的是，加其重量IOO倍量的水溶解，正丁醇4份，乙酸乙 酯1份和0. 5%的KC1水溶液0. 05份为展开剂，复合显色剂为1份0. 02% HgCl2乙 醇溶液和1份的0. 2%二苯卡巴腙乙醇溶液的混合液。
例5、同例l，不同的是，加其重量200倍量的水溶解，正丁醇6份，乙酸乙 酯2份和0. 2%的KC1水溶液0. 4份为展开剂，复合显色剂为3份0. 1% HgCl2乙醇 溶液和5份的1%二苯卡巴腙乙醇溶液的混合液。
例6、同例1，不同的是，加其重量300倍量的水溶解，正丁醇6份，乙酸乙 酯3份和0. 2%的KC1水溶液1份为展开剂，复合显色剂为4份0. 3% HgCl2乙醇溶 液和3份的0. 3%二苯卡巴腙乙醇溶液的混合液。
权利要求
1、一种用于检测三聚氰胺残留的薄层色谱展开剂，其特征在于由以下重量份数的成分组成正丁醇4—8份，乙酸乙酯1—4份。
2、 根据权利要求1所述的一种用于检测三聚氰胺残留的薄层色谱展开剂，其 特征在于以下重量份数的成分组成正丁醇4 —8份，乙酸乙酯1—4份、水O. l-l 份或浓度为0. 2-0. 5%的KC1水溶液0. 05-1份。
3、 一种用于检测三聚氰胺残留的薄层色谱显色剂，其特征在于以下重量份数 的成分组成取重量份数为，1—5份0.01—2% HgCl2乙醇溶液和l一5份的0.1-2% 二苯卡巴腙乙醇溶液混合配制成复合显色剂。
4、 用权利要求1所述的一种用于检测三聚氰胺残留的薄层色谱展开剂进行薄 层色谱分析的方法，其特征在于具体步骤如下1) 硅胶板的预处理用氯仿、甲醇清洗液处理硅胶薄层板2) 配制展开剂取重量份数为正丁醇4一8份，乙酸乙酯l一4份，水0. 1-1 份或浓度为0. 2-0. 5%的KC1水溶液0. 05-1份配制成展开剂。3) 显色剂的配制取重量份数为，1—5份0.01 — 2% HgCl2乙醇溶液和l一5 份的0. 1-2%二苯卡巴腙乙醇溶液混合配制成复合显色剂。4) 被测试样品预处理样品进行透析分离，取透析液蒸干，加其重量50-500 倍量的水溶解，作为待测试样。5) 薄层色谱分析首先将步骤4)的待测试样，点样到经过步骤l)处理的硅胶 板上，再将薄层板放入倒入展开剂的展开缸中，上行展开至上沿，取出薄层板，吹 干溶剂。6) 显色将步骤5)中展开的薄层板喷上步骤3)配制的显色剂，在105'C下， 加热10miri，显色，完成色谱分析。
全文摘要
一种用于检测三聚氰胺残留的薄层色谱展开剂及分析方法，涉及一种检测食品中三聚氰胺残留量的展开剂及分析方法。展开剂，由正丁醇、乙酸乙酯等组成。分析方法是硅胶板的预处理、配制展开剂、配制显色剂，被测试样品透析分离，作为待测试样，薄层色谱分析，喷显色剂显色，完成色谱分析。本发明作为食品，如奶制品、饲料等中添加和残留三聚氰胺的定性鉴别方法，经反复试验，该方法操作简便、灵敏度高、重现性好，斑点清晰、分离效果好，经阴性样品对照，阴性样品无干扰，证明此方法具有专属性及可行性。使用本发明不需要经验丰富的检验人员和价格高昂的检测设备，即可准确方便地鉴别被测样品中是否含有三聚氰胺。
文档编号G01N30/94GK101458240SQ200810236780
公开日2009年6月17日 申请日期2008年12月11日 优先权日2008年12月11日
发明者张长春, 娴 汪, 肖晏婴, 胡中泽, 郑翘楚, 平 陈, 新 陈, 冰 高 申请人:武汉工业学院