专利名称：区分结直肠腺瘤和结直肠癌的试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种区分结直肠腺瘤和结直肠癌的试剂盒。
背景技术：
结直肠癌是重要的恶性肿瘤之一，每年超过百万人死于结直肠癌。由于结直肠癌的发生与生活习惯，特别是饮食习惯密切相关，因此随着我国人民生活水平的逐渐提高，结直肠癌的发病率和致死率在我国呈上升趋势。研究表明结直肠癌的早期诊断尤为关键，早期发现的结直肠癌患者的五年存活率高达90%，一旦发生转移结直肠癌患者存活率不足10%,但是目前结直肠癌早期发现率不足40%。诊断结直肠癌的“金标准”是结肠镜，其灵敏度和特异度都超过95%，但是这种检测手段会给患者造成较大的痛苦，而且价格昂贵、不方便，导致患者依存度低，难以在结直肠癌早期筛查中发挥应有的作用。此外，由于医疗资源的限制，目前在我国体检中广泛推行结肠镜检测不现实。结直肠癌早期诊断分子标记物的鉴定成为现今研究热点之一。近些年陆续报道了一些组织中、粪便中和血清中的结直肠癌分子标记，但是这些标志物的特异度和敏感度较低。例如，用粪便DNA特异的甲基化位点作为结直肠癌诊断标记，当特异度达到90%时，灵敏度只有50%。与这种基于粪便样本的标志物检测相比较，血液标记物检测更为方便，因此人们更希望研发可应用于结直肠癌诊断的血液标志物。有研究报道，血清结肠癌特异抗原CCSA-3和CCSA-4可能成为结直肠癌诊断的标志物，但其检测效果还需进一步的证实。磷脂不仅是构成生物膜的重要成分，一些磷脂分子本身或者其代谢产物还是作为重要的信号分子，其中溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine, LPC)、神经鞘氨醇磷酸胆喊(sphingosylphosphorylcholine, SPC)、溶血憐脂酸(lysophosphatidic acid, LPA)>鞘氨醇 _1_ 憐酸(sphingosine-l-phosphate, SlP)和鞘憐脂(sphingomyelin, SM)等可以通过其自身或代谢产物与细胞表面的受体结合，激活下游信号通路，参与细胞增殖、迁移、形态发生和吸附在内的多种生命活动的调控。这些脂类分子及其代谢产物与多种生理和病理进程息息相关。例如SPC和SM均可以转化为S1P，而LPC通过ATX催化可以生成LPA，SlP和LPA作为功能活性脂类分子对肿瘤发生的调节功能十分显著。随着生物活性脂类分子与肿瘤相关性认识的深入和脂类分子检测手段的进步，一些生物活性脂类分子被认为可能作为肿瘤早期诊断的生物标记物。2007年，美国印第安纳大学徐燕教授实验室首先报道LPC可以作为美国人群的结直肠癌早期诊断标志物，通过对100多例美国结直肠癌患者和100多例美国正常人的血浆中LPC水平测定后，发现与正常人群相比结直肠癌患者血浆内LPC的水平显著下降。结直肠癌的发生经历了正常-腺瘤-肿瘤的发展过程，有些患者可以在结直肠腺瘤阶段停留10-15年后发生癌变。腺瘤阶段的存在也为结直肠癌的早期诊断和干预提供了一个重要的时间窗口。人们的研究重点大多在于筛选和鉴定可以区分正常人群和肿瘤患者的分子标记。目前检测结直肠癌进程，即腺瘤-肿瘤转变过程，的分子标记物还十分匮乏。因此，鉴定能够区分结直肠腺瘤和结直肠癌的分子标志物，对结直肠癌的早期诊断和干预有重要意义。鉴于生物活性磷脂分子的重要生理和病理意义，本发明利用质谱技术，通过检测和比较结直肠腺瘤和结直肠癌患者血浆中生物活性磷脂分子的含量，建立了以磷脂分子为标志物来区分结直肠腺瘤和结直肠癌的技术。

发明内容
本发明的目的是提 供一种区分或辅助区分结直肠腺瘤和结直肠癌的试剂盒。本发明提供的试剂盒，包括用于检测磷脂含量的装置和由所述磷脂含量建立的比对卡；所述磷脂为SPC、16:0SM、18:0SM、14:0LPC、16:0LPC、18:0LPC、20:0LPC 和22:OLPC0上述的试剂盒中，所述由磷脂含量建立的比对卡上设置有直线、横坐标和纵坐标；所述直线为O. 044X SM 总量-60. IXSPC 含量-O. 027 X 饱和 LPC 总量=-1. 06 ；所述横坐标为O. 044 X SM总量-60. I X SPC含量；所述纵坐标为饱和LPC总量。也可以认为所述由磷脂含量建立的比对卡由直线、横坐标和纵坐标组成；上述的试剂盒中，所述SM总量为所述16: OSM和所述18: OSM含量的总和；所述饱和LPC总量为所述14:0LPC、所述16:0LPC、所述18:0LPC、所述20: OLPC和所述22: OLPC含量的总和。上述的试剂盒中，所述用于检测磷脂含量的装置为液质联用仪。上述的试剂盒中，所述检测采用的流动相为体积比为90 10 :0. I的甲醇、水、氨水混合物；所述磷脂含量为离体血浆中所述磷脂含量。上述的试剂盒中，所述试剂盒由所述用于检测磷脂含量的装置和所述由所述磷脂含量建立的比对卡组成。上述的试剂盒在制备区分或辅助区分结直肠腺瘤和结直肠肿瘤的产品中的应用也是本发明保护的范围。 本发明的实验证明，中国人群中结直肠癌患者血浆内多个LPC亚类的含量较结直肠腺瘤患者显著性降低，表明LPCs可以作为区分结直肠腺瘤与结直肠癌的分子标记。利用饱和LPC、SPC、16:0SM和18:0SM为标志物，可以建立区分结直肠腺瘤和结直肠癌的分子模型，该模型判别结直肠癌的灵敏度和特异度分别高达90%和92. 5%。


图I为饱和LPC、总LPC、SPC以及(16:0+18:0)总SM在结直肠腺瘤和结直肠癌患者血浆中含量的变化趋势图2为利用饱和LPC总量、(16:0+18:0) SM总量和SPC含量区分中国人群中结直肠腺瘤和结直肠癌患者的模型
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例I、区分结直肠腺瘤和结直肠癌的试剂盒的构建一、分子模型的建立I、血液收集、脂类分子提取和检测I)研究对象所有样本收集于2007年5月-2010年5月，样品来自全军第二炮兵总医院、北京医院、北京大学第二附属医院。早晨取空腹病人血液进行预处理。此项目经过InstitutionalReview Board审批,所有受试者签署知情同意书。表I概括了研究对象的基本情况240名受试者均为中国人,61%为男性(147/240)，男性在结直肠腺瘤患者和结直肠癌患者中所占的比例分别为63%和59%。腺瘤患者和肿瘤患者的年龄分别为54. 5+14. 2和55. 7+11. 8，年龄在两组样本间没有显著性差
巳表I研究对象的基本情况
权利要求
1.一种区分或辅助区分结直肠腺瘤和结直肠癌的试剂盒，包括用于检测磷脂含量的装置和由所述磷脂含量建立的比对卡；所述磷脂为 SPC、16: OSM、18: OSM、14: OLPC、16: OLPC、18: OLPC、20: OLPC 和 22: OLPC0
2.根据权利要求I或2所述的试剂盒，其特征在于 所述由磷脂含量建立的比对卡上设置有直线、横坐标和纵坐标； 所述直线为O. 044 X SM总量-60. I X SPC含量-O. 027 X饱和LPC总量=-1. 06 ; 所述横坐标为O. 044 X SM总量-60. I X SPC含量； 所述纵坐标为饱和LPC总量。
3.根据权利要求I或2所述的试剂盒，其特征在于 所述SM总量为所述16: OSM和所述18: OSM含量的总和； 所述饱和LPC总量为所述14:0LPC、所述16:0LPC、所述18:0LPC、所述20: OLPC和所述22: OLPC含量的总和。
4.根据权利要求1-3中任一所述的试剂盒，其特征在于 所述用于检测磷脂含量的装置为液质联用仪。
5.根据权利要求1-4中任一所述的试剂盒，其特征在于 所述检测采用的流动相为体积比为90 10 :0. I的甲醇、水、氨水混合物； 所述磷脂含量为离体血浆中所述磷脂含量。
6.根据权利要求1-5中任一所述的试剂盒，其特征在于 所述试剂盒由所述用于检测磷脂含量的装置和所述由所述磷脂含量建立的比对卡组成。
7.权利要求1-6中所述的试剂盒在制备区分或辅助区分结直肠腺瘤和结直肠癌的产品中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种区分结直肠腺瘤和结直肠癌的试剂盒。本发明提供了一种区分或辅助区分结直肠腺瘤和结直肠癌的试剂盒，包括用于检测磷脂含量的装置和由所述磷脂含量建立的比对卡；所述磷脂为SPC、16:0SM、18:0SM、14:0LPC、16:0LPC、18:0LPC、20:0LPC和22:0LPC。本发明以饱和LPC、SPC和SM为标志物，建立了区分结直肠腺瘤和结直肠癌的分子模型，该模型判别结直肠癌的灵敏性和特异性分别为90%和93%。
文档编号G01N30/02GK102680597SQ201210141389
公开日2012年9月19日 申请日期2012年5月8日 优先权日2012年5月8日
发明者丛羽生, 宋建稳, 张俊杰, 徐燕, 李颂, 桑建利 申请人:北京师范大学