专利名称：微乳液试剂盒的制备方法
微乳液试剂盒的制备方法本发明涉及一种试剂，具体涉及ー种稳定微乳液试剂盒制备的方法，可用于底物比色法測定血清脂肪酶试剂的配置。血清脂肪酶作为一项 胰腺功能检测的指标，其特异性很好，1,2- 二月桂-rac-甘油基-3-戊ニ酸-6-甲基试卤灵酯底物比色法已在临床诊断中得到了认可，然而市场上采用的底物比色法的试剂开封稳定性差，开封的时间越长，结果越偏低，开封不到半个月质控就下降到范围之外，冷藏稳定性比较差，冷藏几个月后会有底物沉淀，另外批间差也比较大，因此在使用上给检验人员带来许多不便，结果的可信度也有所下降。本发明为了克服现有技术的不足，提供了ー种微乳液试剂盒的制备方法。为了实现上述目的，本发明设计了ー种微乳液试剂盒的制备方法，包括试剂Rl的制备，以及试剂R2的制备，具体步骤如下，其中试剂Rl的制备取TAPS 缓冲液 100mM/L ；ColipaseO. 8mg/L ;脱氧胆酸钠 I. 6mM/L ;氯化钠 0. 5g/L ；氯化钙4mM/L ;牛黄脱氧胆酸I. 5mM/L ;叠氮钠0. lg/L ;试剂Rl的PH值为8. 0 ；试剂R2的制备A)取酒石酸缓冲液6mM/L ;胆酸钠4mM/L ;牛黄脱氧胆酸7mM/L ;防腐剤0. lg/L ;氯化钠0. 5g/L ;稳定剂，占试剂R2的OH ;试剂R2的PH值为3. 5 ；B)取有机溶剂a，600 iil，加入溴化十二烷基三甲基铵0. 0086g，再加表面活性剂b，0. 0086g，将IOmg底物加入溶解在此溶剂中；C)待步骤B中的溶液完全溶解后缓慢的加入到50ml步骤A中的溶液中，调节PH至3. 5，并在一定温度下下搅拌26分钟，搅拌后用超声仪20千赫兹的功率超声8分钟，可得澄清透明的橘黄色试剂。所述试剂R2的制备中，有机溶剂a为こ醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或异丁醇中的ー种。所述试剂R2的制备中，表面活性剂b为吐温系列、曲拉通系列、Brij系列、司盘系列、3- [ (3-胆固醇氨丙基)ニ甲基氨基]- I-丙磺酸或AEO系列中的ー种。所述试剂R2的制备中，稳定剂为山梨糖醇、丝氨酸或牛血清白蛋白中的ー种。所述试剂R2的制备中，搅拌温度最佳选择是在35-45°C之间。所述试剂R2的制备中，底物为I，2-二月桂-rac-甘油基-3-戊ニ酸-6-甲基试卤灵酷。所述试剂R2的制备中，酒石酸缓冲液的PH值为3. 0-4. O。本发明同现有技术相比，改良的乳化方法后，在不影响试剂其他性能的基础上，改善了试剂的稳定性和批间差大的问题。图I为本发明试剂盒线性的趋势图。图2为本发明试剂盒与免疫浊度法比较的相关性趋势图。图3为本发明试剂盒与底物比色法比较的相关性趋势图。下面结合附图
对本发明作进ー步描述。实施例I :本发明的试剂盒，包括试剂Rl的制备，以及试剂R2的制备，具体步骤如下，其中试剂Rl的制备取TAPS 缓冲液 100mM/L ；ColipaseO. 8mg/L ;脱氧胆酸钠 I. 6mM/L ;氯化钠 0. 5g/L ；氯化钙4mM/L ;牛黄脱氧胆酸I. 5mM/L ;叠氮钠0. lg/L ;试剂Rl的PH值为8. O。试剂R2的制备A)取酒石酸缓冲液6mM/L ;胆酸钠4mM/L ;牛黄脱氧胆酸7mM/L ;防腐剤0. lg/L ;氯化钠0. 5g/L ;牛血清白蛋白，占试剂R2的0. 1% -3% ;试剂R2的PH值为3. 5。B)取有机溶剂a正丁醇600 iil，加入溴化十二烷基三甲基铵0. 0086g，再加表面活性剂b，3-[(3-胆固醇氨丙基)ニ甲基氨基]-1-丙磺酸0.0086g，将IOmg底物1，2_ 二月桂-rac-甘油基-3-戊ニ酸-6-甲基试卤灵酯加入溶解在此溶剂中。C)待步骤B中的溶液完全溶解后缓慢的加入到50ml步骤A中的溶液中，调节PH至3. 5，并在40°C下搅拌26分钟，搅拌后用超声仪20千赫兹的功率超声8分钟，可得澄清透明的橘黄色试剂。实施例2 将实施例I中的有机溶剂a 换成异丁醇，其他配置步骤和实施例I相同。实施例3 将实施例I中的表面活性剂b换成司盘40，其他配置步骤和实施例I相同。实施例4 将实施例I中稳定剂换成山梨糖醇，其他配置步骤和实施例I相同。用配置出的试剂Rl，200 illポ2，100111，血清样本，3111。主波长，570nm ;副波长，700nm，速率法，读点19-29。在日立7170生化仪上检测，用罗氏校准品和质控品来定标和做
质控，放在试剂仓内做开封稳定性。一个月开封数据见下表
权利要求
1.ー种微乳液试剂盒的制备方法，包括试剂Rl的制备，以及试剂R2的制备，具体步骤如下，其中 试剂Rl的制备 取 TAPS 缓冲液 100mM/L ；ColipaseO. 8mg/L ;脱氧胆酸钠 I. 6mM/L ;氯化钠 0. 5g/L ;氯化钙4mM/L ;牛黄脱氧胆酸I. 5mM/L ;叠氮钠0. lg/L ;试剂Rl的PH值为8. 0 ； 试剂R2的制备 A)取酒石酸缓冲液6mM/L;胆酸钠4mM/L ;牛黄脱氧胆酸7mM/L ;防腐剂0. lg/L ;氯化钠0. 5g/L ;稳定剂，占试剂R2的OH ;试剂R2的PH值为3. 5 ； B)取有机溶剂a，600iU，加入溴化十二烷基三甲基铵0.0086g，再加表面活性剂b，0. 0086g，将IOmg底物加入溶解在此溶剂中； C)待步骤B中的溶液完全溶解后缓慢的加入到50ml步骤A中的溶液中，调节PH至3. 5，并在一定温度下搅拌26分钟，搅拌后用超声仪20千赫兹的功率超声8分钟，可得澄清透明的橘黄色试剂。
2.根据权利要求I所述的微乳液试剂盒的制备方法，其特征在于所述试剂R2的制备中，有机溶剂a为こ醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或异丁醇中的ー种。
3.根据权利要求I所述的微乳液试剂盒的制备方法，其特征在于所述试剂R2的制备中，表面活性剂b为吐温系列、曲拉通系列、Brij系列、司盘系列、3-[(3_胆固醇氨丙基)ニ甲基氨基]-1-丙磺酸或AEO系列中的ー种。
4.根据权利要求I所述的微乳液试剂盒的制备方法，其特征在于所述试剂R2的制备中，稳定剂为山梨糖醇、丝氨酸或牛血清白蛋白中的ー种。
5.根据权利要求I所述的微乳液试剂盒的制备方法，其特征在于所述试剂R2的制备中，搅拌温度最佳是在35-45°C之间。
6.根据权利要求I所述的微乳液试剂盒的制备方法，其特征在于所述试剂R2的制备中，底物为I，2-二月桂-rac-甘油基-3-戊ニ酸-6-甲基试卤灵酷。
7.根据权利要求I所述的微乳液试剂盒的制备方法，其特征在于所述试剂R2的制备中，酒石酸缓冲液的PH值为3. 0-4. O。
全文摘要
本发明涉及一种试剂，具体涉及一种稳定微乳液试剂盒制备的方法，包括试剂R1，以及试剂R2，其中试剂R1，包括TAPS缓冲液；Colipase；脱氧胆酸钠；氯化钠；氯化钙；牛黄脱氧胆酸；叠氮钠；试剂R1的pH值为8.0。试剂R2包括酒石酸缓冲液；胆酸钠；牛黄脱氧胆酸；防腐剂；氯化钠；稳定剂，试剂R2的pH值为3.5。本发明同现有技术相比，改良的乳化方法使试剂在不影响其他性能的基础上，改善了试剂的稳定性和批间差大的问题。
文档编号G01N21/78GK102621138SQ20121009958
公开日2012年8月1日 申请日期2012年4月6日 优先权日2012年4月6日
发明者张祥洪, 李子樵 申请人:上海蓝怡科技有限公司