专利名称：在控制区域上含有非蛋白捕获物质的检测装置的制作方法
技术领域：
本发明属于诊断类装置，具体的说，是关于一种新型的诊断试剂条，在试剂条的控制区域上包括一定量的一种或多种非蛋白捕获物质。
背景技术：
利用免疫学原理反应的干化学试纸条被大量运用在临床诊断中，例如早早孕试剂条来检测HCG。这类试纸条以及它们的运用在很多专利文献里都有描述，例如中国已经被授权实用新型专利01239923. X和02202021. 7，以及申请公开专利02122907. 4和02139704. X,01131834. I等等所揭示的那样。例如，最常见利用三明治原理的一步法检测的试纸条，在检测试纸条上的样本接受区域上加入所要检测的样本，该样本中由于毛细层吸作用沿着试纸向前纵向流动，经过标记区域，如果样本中存在被分析物，该被分析物与标记区域上另一物质特异结合形成复合物；该复合物随着液体继续向前流动，经过包括有捕获被分析物区域的检测区域，再与捕获被分析物区域上的捕获物特异结合，从而复合物被捕获，使在检测区域累积起来。标记区域上的另一特异物质可以被标记物质标记；该标记物质可以是现有技术公知的非水溶解性的带颜色颗粒，例如金颗粒胶体和乳胶颗粒，也可以是荧光标记，还可以是水溶解性的标记颗粒，例如由右旋糖苷聚合形成的标记颗粒等等。当标记区域上含有带颜色颗粒，则在检测区域上出现一带颜色的符号，该符号既可以直接用肉眼就可以读出结果，也可以借助仪器更加准确的定性和定量的读出结果。这种被分析物和在捕获被分析物区域上的捕获物特异结合之间的配对，以及被分析物和带有标记的物质之间的结合是现有技术公知的物质，这些结合既可以它们之间的直接特异结合也可以是间接的特异结合，常见的如双抗体夹心，双抗原夹心或其间接法，还有竞争法等等。这些配对有很多方式，例如抗原和其抗体配对，抗体和抗抗体配对，抗体和半抗原配对，生物素和抗生物素的抗体之间的配对，生物素和抗体配对，以及他们之间的形成多个配对组合等等，抗体还包括抗体片段的抗体，例如抗Fe位点的抗体等等。同时，在这些试剂条上的捕获被分析物区域的下游还有一检测结果控制区域，在该区域上还固定有一定量的抗体或者特殊蛋白物质，这些抗体或特殊蛋白物质(蛋白A或蛋白B)可以捕获溶液里多余的标记复合物质而在检测结果控制区域里累积起来。一般，在检测结果控制区域里出现颜色则表示检测区域上的检测结果是有效的，否则是无效的，例如美国专利US 5，541，059和欧洲专利EP O 560 411所揭示的那样。另外，在一些专利文献中揭示把抗体固定在阳性控制区域上，无论样本中是否存在被分析物质，在阳性控制区域上都出现颜色线条，该线条和特异结合被分析物质区域交叉形成特殊的可以直接识别的符号，例如美国专利US 4, 916, 056,US 5，160，701和US 5，075，078所揭示的那样。从现有技术来看，在检测结果控制区域或阳性控制区域上固定特异的抗体或其它类似的特异蛋白物质作为捕获物质是被普遍使用的方法，因此，在大量生产中，一方面在控制区域上会因为使用高价格的特异抗体或者类似蛋白物质而大大提高生产产品的成本；另ー方面还会造成大量带有标记物质的特异结合分子的浪费，因为要形成控制线条，一般在试剂区域上的带有标记物质的特异结合分子是过量的。在美国公开申请专利2004/0161859中掲示了另ー种检测结果控制区域，在试剂条未被使用之前，在试剂条上的检测结果控制区域上就已经存在一条蓝色线条，当反应进行的时候，该蓝色线条就会变成红色而表示反应已经结束或者检测结果是有效的。该试剂条虽然降低了生产的成本，可是，该试剂条在未使用前在检测结果控制区域上就已经存在了一个明显的线条，这样很容易让使用者产生错觉，认为该试剂条已经被使用过了。在美国专利6，855，561掲示了利用ー种染料固定在阳性控制区域上的检测装置。在具体实施方式
中，该装置未參加反应之前，本身带有ー种颜色的该染料被隐藏在硝酸纤维膜下面；当检测时候，由于硝酸纤维素膜被水打湿而变得透明，从而使隐藏在膜下的染料显现出来和结合被分析物质的区域组成一定的可识别的形状。在实际生产中，要使用特殊的设备和需要复杂烦琐的エ艺才能生产出实际满足商业需求如该专利所掲示的产品。 在中国申请专利，申请号为200510049177. I中所掲示的在阳性控制区域上包括一种或多种在干的时候是一种颜色在湿的时候是另ー种顔色的物质，该阳性控制区域和被分析物质结合区域可以形成一定的可识别的符号。在实际生产中，要把这种在干和湿两种不同情形下显示不同顔色的物质直接处理在硝酸纤维素膜上是比较困难的事情，是因为把含有该物质的溶液直接处理在膜上，该物质会在膜上自由扩散使处理的效率大大降低。为了克服现有技术中的这些缺陷和不足，我们很惊讶的发现在这类检测装置中的控制区域上处理絮凝试剂或凝结物可以很好的达到商业上的要求。这类絮凝试剂或凝结物是污水处理经常用到的试剂，它们价格便宜，而且容易获得。这样既可以节约大量因购买昂贵的抗体或者蛋白所花费的成本，另ー方面，在ー个具体的实施方式中，不需要特殊的设备和复杂的エ艺就可以把该絮凝试剂或凝结物直接固定在硝酸纤维素膜上形成阳性控制区域。

发明内容
本发明提供ー种检测样品中是否含有被分析物的检测装置，检测装置包括支持液体样品流动的试剂条；该试剂条上包括检测区域和控制区域；在检测区域包括ー种特异结合的分子，在控制区域包括ー种或多种非蛋白成分的捕获物。在一个实施方案中，在吸水性试剂条上只有检测区域和检测结果控制区域，在检测区域上包括ー个特异结合分子，在检测结果控制区域上包括ー种或几种非蛋白成分的絮凝试剂或凝结物。在检测的时候，可以先把要检测的样本和带标记物质的另一特异结合的分子混合，如果样本中含有要检测的物质，则在检测区域上会出现颜色变化来显示样本中是否存在被分析物质，在检测结果控制区域上出现颜色变化来显示该检测结果是否有效。通常，在检测结果控制区域上有顔色出现表示该检测结果有效，否则为无效的检测結果。在另ー个实施方案中，支持液体流动的试剂条为硝酸纤维素试剂条，在检测区域上固定有特异结合被分析物的分子，完成反应必须的试剂区域包括带有标记物质的另ー个特异结合被分析物的分子，在检测结果控制区域上固定有一定量的非蛋白絮凝试剂或凝结物。在另ー个实施方案中，试剂条上还包括试剂区域，在试剂区域上包括两个区域，一个为带有染料的区域，另ー个区域为标记区域，在标记区域上包括带有标记物质的另ー个特异结合分子；在检测区域上包括一个特异结合的分子，在检测结果控制区域包括一定量的ー种或多种非蛋白絮凝试剂或凝结物。在ー个具体的实施方式中，带有标记物质的特异结合分子可以是抗体、抗体片段，生物素或核酸(DNA、RNA)片段之一，检测区域上的特异结合分子可以是另一抗体、抗体片段、抗生物素抗体或者抗核酸的抗体之一。在另ー个实施方案中，该试剂条是由吸水性材料组成，它包括样本接受区域，完成反应所必须的试剂区域、检测区域、检测结果控制区域和吸水区域，在检测结果控制区域上含有一定量的非蛋白絮凝试剂或凝结物，在检测区域上含有特异结合的分子，在试剂区域上包括标记区域和染料区域，在标记区域上含有带有标记物质特异结合的另一分子。在另ー个实施方案中，试剂条为硝酸纤维素膜试剂条，试剂区域包括带有标记物 质的特异结合分子和一定量的染料，在检测区域上包括特异结合被分析物质区域和阳性控制区域，在阳性控制区域上包括一定量的非蛋白絮凝试剂或凝结物，特异结合被分析物的区域和阳性控制区域相互交叉形成一定的形状。在本实施方式中，在检测区域的下游还可以包括检测结果控制区域和吸水区域，在检测结果控制区域上包括一定量的非蛋白絮凝试剂或凝结物。同时，在另ー个具体实施方式
中，阳性控制区域上可以固定ー些蛋白类捕获物，例如抗体、抗体片段、蛋白A、蛋白G或者是抗蛋白A的抗体等等，在检测结果控制区域上固定ー些非蛋白成分的絮凝试剂或凝结物，特异结合被分析物的区域和阳性控制区域相互交叉形成+/-、Y、X等容易识别的形状。在本实施方式中另ー个具体实施例子中，试剂条包括沿液体流动方向从上游到下游依次为样本接受垫、标记垫、含有检测区域和检测结果控制区域的硝酸纤维素膜和吸水垫，这些部件相连可以让液体从一端通过毛细吸附カ流到另一端；在样本接受垫上处理有ー些试剂来调节反应的pH值，在标记垫上处理有带有标记物质的特异结合分子，在硝酸纤维素膜上处理有特异结合被分析物质的分子和阳性控制区域，在阳性控制区域上处理有一定量的非蛋白絮凝试剂或凝结物，阳性控制区域和特异结合被分析物质的区域相互交叉形成一定的形状。这些非蛋白絮凝试剂或凝结物可以是ー些无机高分子絮凝试剂或有机高分子絮凝试剂。在反应试剂区域上的标记物质可以是带颜色的胶体颗粒，如金颗粒胶体、乳胶颗粒；还可以是如中国发明申请专利99809129. 4所掲示的水溶性标记物质。另ー方面，本发明提供了检测样本中被分析物质的方法。在一个实施方式中，向检测装置滴加液体样本，使样本从试剂条的样本接受区域顺次经过标记区域、检测区域和检测结果控制区域，当液体流过检测结果控制区域时，溶解在液体中的一部分未被检测区域上特异结合分子所捕获的标记物质被固定在检测结果控制区域上的ー种或多种非蛋白成分的捕获物所捕获，在检测结果控制区域上出现颜色变化表示该检测结果是有效的。在另ー个具体的实施方式中，非蛋白分子为有机或无机溶解于水的絮凝试剂或凝结物。在另ー个实施方案中，向检测试剂条样本接受区域滴加液体样本,该液体样本依靠毛细吸附カ依次流过标记区域、染料区域、检测区域和检测结果控制区域。当液体通过染料区域上的时候，该染料可以被液体样本溶解并流向检测结果控制区域，在检测结果控制区域该染料被非蛋白成分的凝结物或絮凝试剂捕获。在另ー个具体的实施方式中，检测区域包括特异结合被分析物的区域和阳性控制区域，阳性控制区域和特异结合被分析物质区域相互交叉形成一定的形状，在阳性控制区域上处理有一定量的非蛋白成分的絮凝试剂或凝结物。当溶解有染料的液体流过阳性控制区域时，在阳性控制区域上的絮凝试剂或凝结物会捕获液体里的染料而显示出颜色变化。如果样本中没有被分析物质，就在检测区域上只出现一条顔色线条负号(-)，表示检测结果为阴性；如果存在被分析物质，则在特异结合被分析物质区域上出现颜色线条，该线条和阳性控制区域上的线条交叉形成正号(+)，表示结果为阳性结果。在检测结果控制区域上的非蛋白成分的絮凝试剂或凝结物也会捕获液体里的染料并在检测结果控制区域上显示颜色，表示该检测结果为有效的结果，否则该检测结果无效。在另ー个实施方式中，在吸水性试剂条上只有检测区域和检测结果控制区域和样本接受区域，在检测区域上包括ー个特异结合分子，在检测结果控制区域上包括一种或几种非蛋白成分的絮凝试剂或凝结物。在检测的时候，可以先把要检测的样本和带标记物质的另ー特异结合的分子混合，然后把试剂条的样本接受区域插入到液体样本中去，如果样本中含有要被分析物质，则在检测区域上会出现颜色变化来显示样本中是否存在被分析物质，在检测结果控制区域上出现颜色变化来显示该检测结果是否有效。通常，在检测结果控 制区域上有顔色出现表示该检测结果有效，否则为无效的检测結果。


图I为本发明提供了一个实施方式。在试剂条I上包括样本接受区域25、试剂区域115、检测区域95、检测结果控制区域85和吸水区域65，箭头表示液体流动方向，在检测结果控制区域85上包括有一定量的非蛋白成分凝结物或絮凝试剂。图2为本发明提供了另ー实施方式。与图I相比，不同之处在于，在试剂条2上的试剂区域115上包括带颜色颗粒的标记区域15和带有染料的染料区域35，在检测结果控制区域85上包括非蛋白成分的絮凝试剂或凝结物。图3为本发明提供了另ー个实施方式。与图2相比，在检测区域95上包括ー个阳性控制区域55和被分析物质结合区域45，检测结果控制区域85，其中在检测结果控制区域85和阳性控制区域55上都处理有一定量的凝结物或絮凝试剂，同时阳性控制区域55和被分析物质结合区域交叉形成一个十子架形(+ )。图4为本发明提供了图3所示的ー个具体实施方式
。试剂条4由样本接受片425、标记片4115、硝酸纤维素膜475和吸水片465相连，液体可以从样本接受片425流到吸收片465上，其中检测区域495和检测结果控制区域485位于硝酸纤维素膜475上。在标记片415上上处理有带有颜色标记物质的特异结合分子和染料，在结合被分析物质区域445上包括特异结合被分析物质的分子。在阳性控制区域455和检测结果控制区域485上处理有一定量的凝结物或絮凝试剂。图5为本发明提供了另ー个实施方式，与图3相比，在试剂区域115上只包括ー个标记区域15，同时没有检测结果控制区域85和染料区域35，在阳性控制区域55上包括一定量的凝结物或絮凝试剂。图6为本发明提供了图5所示的ー个具体实施方式
，与图4相比，该试剂条6上没有了检测结果控制区域485，在标记片4115上只包括带颜色颗粒的特异结合分子，在阳性控制区域455上包括一定量的非蛋白凝结物或絮凝试剂。图7为本发明提供了ー个具体的实施方式，与图2示的实施方式不同之处在于，标记区域15上处理有带有颜色水溶性染料的特异结合分子。图8为本发明提供了另ー实施方式，与图7示的实施方式不同之处在于，试剂条8上没有检测结果控制区域存在，在阳性控制区域上处理有一定量的凝结物或絮凝试剂。附图标记说明
试剂条1、2、3、4、5、6、7、8，样本接受区域25，试剂区域115，标记区域15，染料区域35，检测区域95，被分析物质结合区域45，检测结果控制区域85，阳性控制区域55，吸水区域65，样本接受片425，标记片4115，硝酸纤维素膜475，硝酸纤维素膜上的检测区域495，硝酸纤维素膜上检测结果控制区域485，硝酸纤维素膜上的被分析物质结合区域445，硝酸纤维素膜上的阳性控制区域455。
具体实施例方式在下面的详细描述中，图例附帯的參考文字是这里的ー个部分，它以举例说明本发明可能实行的特定具体方案的方式来说明。我们并不排除本发明还可以实行其它的具体方案和在不违背本发明的权利要求范围的情况下改变本发明的结构。检测区域
这里所说的检测区域是指在该区域上可以进行反应来检测样本中是否存在感兴趣的被分析物质。这里所说的反应可以是免疫反应，如一歩法免疫试剂条等等。如图I、图2和图7所示，试剂条上含有一个检测区域95，在检测区域95上固定了ー些特异结合分子，在该区域上来检测样本中是否含有被分析物质。在一个实施方式中，在检测区域95上固定一个特异结合被分析物质的分子，试剂区域115上包括带有标记物质的特异结合被分析物质的另ー个分子。当样本中含有被分析物质的时候，被分析物质和试剂区域上的一部分另ー个特异结合分子形成复合物质，该复合物经过检测区域上，被固定在检测区域上的另ー个特异结合分子捕获而聚集在检测区域上，由于复合物上带有颜色，所以在检测区域上也会出现颜色变化来显示被分析物质是否存在于样本中。在具体实施方式
中，带标记物质的另ー个特异结合分子可以是抗体或抗体片段，固定在检测区域上的另ー个特异结合分子也可以是抗体或抗体片段。通常为双抗体夹心法或双抗原夹心法来检测。在另ー实施方式中，试剂条上不含有带有标记物质的特异结合被分析物质的另一个分子，而是在反应前，先把样本和带有标记物质的另一分子混合形成水溶液，然后再把试剂条插入到该混合溶液中去或者把混合溶液滴加到试剂条上，这样在试剂条的检测区域也会出现颜色变化来显示样本中是否存在被分析物质。在另ー个实施方式中，带有标记的特异结合分子是被分析物质的类似物，在检测区域上固定有特异结合被分析物的分子。当样本中含有被分析物质的时候，被分析物质和带标记的类似物质会相互竞争结合检测区域上的特异结合分子，这样在检测区域上会因为被分析物质的多少而出现不同深浅颜色来显示被分析物质的多少，如果被分析物质越多，在检测区域上出现的颜色就越浅，反之就越深。例如常见利用竞争法进行毒品检测试剂条。如图3_6，8所示。在另ー些实施方式中，该检测区域95包括阳性控制区域55和被分析物质结合区域45，在阳性控制区域上可以固定有抗体、抗体片段等蛋白成分捕获物质，也可以固定ー些非蛋白成分的捕获物质，例如无机凝结物或絮凝试剂捕获物，在被分析物质结合区域上包括特异结合被分析物质的分子。该阳性控制区域和被分析物结合区域相互交错形成一定的可识别符号来直接显示检测的結果。例如形成正号(+ )或者负号(_)等等(图5和图3)。在本实施方式中，无论结合被分析物区域是否有顔色出现，该阳性控制区域上都有顔色出现。具体的说，如果样本中存在被分析物质，就在检测区域95上出现表示为阳性结果的符号( + )，如果不存在被分析物质则出现表示阴性结果的符号(_)。检测区域上固定一定量的特异结合分子的技术和利用该技术来检测样本中是否存在被分析物质是本领域一般技术人员所能知道的，这些技术都在现有技术中详细的说明和阐述，例如美国专利号5，075，078 ;5，541，059和欧洲专利EP O 560 411等所掲示的那样。控制区域
这里所说的控制区域有几个方面的作用。一是可以作为检测结果控制区域来控制显示 在检测区域上的检测结果是否有效，或显示在检测区域上反应的过程是否完成或者是已经完成了多少时间。还可以作为阳性结果控制区域，另ー个就是和检测区域上的另ー个被分析物质结合区域组成一定的形状来直观反应检测结果，样本中含有被分析物质的时候，就直观显示阳性结果，如样本中不存在被分析物质的时候，就直观显示阴性結果。下面详细给以说明。检测结果控制区域。在现有技术中，ー些蛋白成分的抗体或者抗体片段被固定在检测区域下游的检测结果控制区域上，而过量的带有标记物质的特异结合分子被处理在检测区域的上游区域。在进行检测时，没有被检测区域上的另ー特异结合分子所捕获的这些带有标记物质的特异结合分子会被检测结果控制区域上的这些蛋白成分捕获物质所捕获，从而显示该检测结果是有效的。相反，如果在检测结果控制区域上没有颜色变化，表示该检测结果是无效的，那么该检测还得从新检測。另ー方面，检测结果控制区域还可以充当检测区域上反应进程的指示作用，例如在检测结果控制区域上出现了颜色变化，可以认为检测区域上的反应已经结束了，检测区域上显示的结果是检测的最終結果。检测结果控制区域和检测区域的距离是也可以根据不同要求任意调节的，例如检测结果控制区域可以距离检测区域比较远，大约距离液体从检测区域流到检测结果控制区域需要5分钟到10分钟的距离。这种距离的设定可以根据在液体流过硝酸纤维素的速度来自由设计。这样，当检测结果控制区域出现颜色变化的时候，表示检测区域上进行的反应持续了大约5-10分钟了。试剂条上的控制区域可以是ー个或多个，为了更加准确的控制检测反应的进程，可以在距离检测区域下游大约5分钟处设立第一个检测结果控制区域，在距离10分钟处设立第二个检测结果控制区域，当第一个检测结果控制区域出现颜色时候表示检测区域上的反应持续了约5分钟了，当第二个检测区域2出现了颜色变化表示检测区域上的反应持续了 10分钟了，或者认为在10分钟的时候检测区域上的结果是有效的，过了 10分钟表示检测区域上的结果是无效的。本发明所说的“上游”或“下游”是指液体流动方向上的上游或者下游。正常情况下，液体是从上游区域流动到下游区域的。例如液体从样本接受区域开始流动，依次经过检测区域和检测结果控制区域向下游流动，则样本接受区域位于检测区域的上游，检测区域位于检测结果控制区域的上游，检测结果控制区域位于样本接受区域和检测区域的下游。阳性控制区域。同时，在现有技术中，大量的蛋白成分的抗体或者抗体片段被固定在检测区域上的阳性控制区域，无论检测结果如何，在阳性控制区域上都会出现颜色变化。检测区域上的另ー个被分析物质结合区域和阳性控制区域组成一定的形状来直观反应检测結果。这些固定在阳性控制区域上的抗体或抗体片段也是用来捕获过剩的带有标记的特异结合分子的。这样，在大量生产中，需要大量蛋白成分的抗体或者抗体片段，同时，也需要大量的带有颜色标记物质的特异结合分子。这样生产出的试剂条产品的成本会大幅度的提高，因为生产或购买蛋白抗体或者抗体片段和带有标记物质的特异结合分子的成本是非常高昂的。另外，现有技术中把ー些化学物质处理在阳性控制区域上，例如美国专利6，855，561和美国专利申请公开2006/0029924中描述的利用在阳性控制区域上处理ー些化学染料或ー些利用化学反应来显示颜色变化，从而和被分析物结合区域组合直观显示检测结果。但是在实际过程中，把这些化学物质直接处理在硝酸纤维素膜上是非常困难的，处理在上面的化学物质容易扩散，同时由于化 学反应还会影响检测结果，另外生产这种产品的成本也非常高昂。利用本发明提供的试剂条，在控制区域上处理一定的非蛋白捕获物质可以使生产的试剂条成本低廉，容易生产而且不会影响试剂条的质量。如图I所示的一个实施方式中，在试剂条I上包括一个检测结果控制区域85，在检测结果控制区域上固定有一定量的非蛋白成分的凝结物或絮凝试剂捕获物。在试剂区域115上处理有可移动的带有标记物质的特异结合分子。当这些带有标记物质的特异结合分子被液体带到检测结果控制区域85处，固定在检测结果控制区域上的凝结物或絮凝试剂捕获这些带标记物质的分子。这样就在检测结果控制区域上出现颜色变化显示检测结果是有效的，否则检测结果无效的。在另ー个具体的实施方式中，带有一定量的非蛋白成分的凝结物或絮凝试剂的检测结果控制区域位于检测区域下游大约10分钟的距离，当在检测结果控制区域上出现颜色变化时则表示反应已经进行了 10分钟了。如图2所示的另ー个实施方式中，在检测结果控制区域85上固定有一定量的凝结物或絮凝试剂，在检测区域95上游的染料区域35上处理有一定量的染料，该染料上不带有任何特异结合分子，同时在染料区域上游的标记区域15上处理带有颜色颗粒的特异结合分子。在进行检测时，染料被液体带到检测结果控制区域85上被凝结物或絮凝试剂所捕获而累积，从而在检测结果控制区域上出现了颜色变化表示检测结果是有效的，如果没有颜色变化则表示检测结果是无效的。同时，检测区域95上的特异结合分子和标记区域15上的带有标记物质的分子进行免疫反应来检测样本中是否存在被分析物质。在ー个具体实施方式
中，标记区域上的标记物质为颗粒状的金属胶体或乳胶胶体，标记物质上的特异结合分子可以是抗体或抗体片段，也可以是抗原或抗原片段等等。在另ー实施方式中，与图2示的实施方式不同之处在于，标记区域15上处理有带有水溶性染料的特异结合分子(图7)。如图所示的另ー个实施方式中，在检测区域95上含有特异结合被分析物质的区域45和阳性控制区域55，在检测区域95的下游有ー检测结果控制区域85，在检测区域上游有试剂区域115，试剂区域上包括标记区域15和染料区域35。其中，在阳性控制区域55和检测结果控制区域85上分別固定有凝结物或絮凝试剂捕获物，特异结合被分析物质的区域45和阳性控制区域55相互交叉形成十子架形状。当检测时，染料区域上的染料被阳性控制区域的凝结物或絮凝试剂捕获形成阳性控制线条，被检测结果控制区域85上的凝结物或絮凝试剂捕获形成结果控制线条。同时，标记区域上的带有颜色标记物质的特异结合分子只是參与和特异结合被分析物质的反应来检测结果，而不用处理过量的标记物质来參加形成阳性控制线或者检测结果控制线。这样一部分昂贵的带有标记物质的结合分子就被很好的节约了。在另ー个具体的实施方式中，阳性控制区域55上也可以处理ー些蛋白成分的抗体或抗体片段，或者其他可以捕获标记物质的蛋白捕获物质，同时在检测结果控制区域上固定有凝结物或絮凝试剂。图5所示的另ー个实施方式中，在检测区域上包括含有特异结合被分析物质分子的区域和和阳性结果控制区域55，在阳性结构控制区域上处理有一定量的凝结物或絮凝试剂捕获。同时，在试剂区域上只处理有可以移动的带有颜色标记物质的特异结合分子。这样，当进行检测时，阳性控制区域上的凝结物或絮凝试剂捕获多余的标记物质而形成控制线条。该阳性控制线条可以和特异结合被分析物质区域形成可以识别的符号来显示检测结果O 非蛋白捕获物
把现有技术控制区域上的抗体或抗体片段、或者ー些蛋白成分的捕获物质替换成非蛋白成分的捕获物，这样大大降低了试剂条的成本而又不改变试剂条检测的灵敏度和特异性。采用絮凝试剂或凝结物来分离和去除废水中的胶体状态的污染物在废水处理领域里被大量运用。本发明利用絮凝试剂或凝结物具有凝结和沉淀液体样本中颗粒这一性质在控制区域形成颜色变化。这种絮凝试剂或凝结物引起的吸附和沉淀是非特异性的吸附和沉淀。这里非特异性是溶液里带有的颗粒状物质都可以被絮凝试剂或凝结物沉淀和吸附下来。这里所说的非蛋白是和现有技术常用的抗体、抗体片段或者蛋白A、蛋白B相対的物质，并不是指这些絮凝试剂或凝结物不含有任何蛋白物质，而是这些絮凝试剂或凝结物在实质上不是以特异结合方式来捕获溶液中的另ー些特异结合分子，而是他们以非特异结合的方式来无选择性的捕获溶液中颗粒或微粒物质。在ー个具体的实施方式中，如图I所示，在检测结果控制区域85上固定一定量的絮凝试剂或凝结物，在检测区域95上游的试剂区域上115处理一定量带颜色胶体颗粒的特异分子。当进行检测时候，来自样本接受区域25的液体依次流过试剂区域115，检测区域95和检测结果控制区域85。在流经检测结果控制区域85时，被包含在液体里的带颜色胶体颗粒会被固定在检测区域上的絮凝试剂或凝结物所沉淀下来。如图2所示，在另ー个具体的实施方式中，为了节约带颜色标记物质的特异结合分子，在试剂区域115上还可以处理ー些带颜色的染料(35)，在进行检测时候，染料区域里的染料被液体带到检测结果控制区域上而被絮凝试剂或凝结物沉淀下来，这样就在检测结果控制区域上显示颜色表示检测结果是有效的。如图3-6,和图8所不的另一些实施方案中，在阳性控制区域55、455上可以处理一些絮凝试剂或凝结物，这些絮凝试剂或凝结物可以沉淀液体里的胶体颗粒或者染料颗粒，不管样本中是否含有被分析物质，在阳性控制区域上都会有顔色出现。本发明所指的絮凝试剂或凝结物包括污水处理中常用到的试剂。例如无机高分子絮凝试剂(IPF)和有机高分子絮凝试剂。其中无机高分子絮凝试剂主要是以聚合氯化铝为基本原料而制备的许多衍生物，如聚合铝铁、聚合硅铝以及有机复合型絮凝试剂。最为常用的是有机高分子絮凝试剂，有机高分子絮凝试剂有人工合成和天然两种。这些絮凝试剂按官能团的不同可以分子阳离子型、非离子型和阴离子型。按是否溶于水可以分为水溶性和非水溶性絮凝试剂。例如非离子型的聚丙稀酰胺(PAM)、聚氧化こ烯、阴离子型聚丙稀酸(PAA)、聚甲基丙稀酸水解聚丙稀酰胺(HPAM)、聚磺基苯こ烯；阳离子型的为丁基溴こ烯吡、聚丙基ニ甲基胺(PDADMA)。有机高分子絮凝试剂具有在颗粒间形成更大的絮体以及由此产生的巨大表面吸附作用。那些高聚合度的水溶性有机高分子聚合物或共聚物的分子中含有许多能与胶颗粒和细微颗粒悬浮物颗粒表面某些位点起作用的活性集团，分子量在数十万到数百万。高分子絮凝试剂的非离子型官能团为羟基(-0H)、(_CN)和酰胺(-C0NH2);阳离子型官能团为伯胺(-NH2)、仲胺(NH-R)、叔胺(NH-RR)和季胺(R-N-RR)、阴离子官能团如羧酸(-C00H)、磺酸(-S03H)和硫酸脂(-0S03H)等等。这些絮凝试剂或凝结物在中国申请公开专利200510023481、200410024480、200310122818、00130879、和 01129968，以及中国专利99116150、98116440和86104833 中都有详细的描述。这些有机或无机絮凝试剂可以通过向无锡蓝波化学品有限公司购买。在本 发明的一个优选的实施方式中，使用的絮凝试剂为水溶性高分析有机絮凝试剂。
把絮凝试剂处理到控制区域上可以用现有技术公知的方法。这些商业上使用的试剂可以直接使用，一般无机絮凝试剂可以调节合适的PH值后使用效果更好；对高分子絮凝试齐U，为了得到更好的分散状态，一般优先应选用能在水中均匀分散、溶解，具有吸附活性基团的高分子化合物质或水溶性高分子化合物质。在ー个具体的实施方式中，商业上污水处理常用的絮凝试剂可以先用纯水或软水稀释到一定的浓度，然后用一个微处理机器控制的微量调节喷膜机器直接喷在硝酸纤维素膜上，然后干燥，除此之外，用移液枪手工处理絮凝试剂到硝酸纤维素膜上也是可以的。这些エ业上污水处理的絮凝试剂也可以用ー些缓冲溶液稀释一定的浓度后再被处理到膜上。对所处理的膜没有特别的要求，只要可以固定ー些蛋白的膜都是可行的，例如硝酸纤维素膜、尼龙膜、醋酸纤维素膜、滤纸等等。任何本领域ー般技术人员结合本发明都可以想到的膜材料。在一个优选的实施方式中，还可以在絮凝试剂稀释溶液中添加ー些表面活性试剂。试剂区域和特异结合分子
试剂区域上包括带有标记物质的特异结合分子的标记区域，检测区域上固定有另ー特异结合分子，带有标记物质的特异结合分子和另ー个特异结合分子可以在检测区域上特异结合形成一信号。产生信号可以是基于三明志的夹心法或者竞争法，或者它们衍生而出的其它方法。被分析物的特异性的结合分子是指和被分析物相结合并且不能和样品中的其它任何分子牢固结合的结合分子。被分析物的特异性的结合分子也可以和表明样品中被分析物的存在或者与被分析物的存在相关联的分子相结合。牢固结合是指结合达到改变试验结果或者使试验结果不明显的程度。在ー些具体方案中，特异性的结合分子可能是ー种抗体或者ー种抗体片段(例如，ー种抗体的Fab区)，ー种抗原，一种结合配体的受体或者受体的片段，或者生物素ー链霉菌抗生物素蛋白结合对的ー个成分或者其它类型的结合对。这样试剂区就可以提供标记，当样品流过试剂区的时候，被分析物结合了可以产生可检测信号的标记。“标记区块”是指基质上含有标记样品中可能存在的被分析物的物质的部位。因此一个试剂区就是ー个标记区块。“标记”可以是产生可检测信号的任何合适的标记。例如，标记可以是可溶性颗粒,突光颗粒,化学发光颗粒，金属或者合金(例如，胶体金)，或者囊，特别是包含可见染料的脂质体。疏水溶胶也是有用的，疏水的有机染料或者色素在水中不可溶或者只有很有限的一小部分可溶。标记还可以是聚合体颗粒，例如有色的聚苯こ烯颗粒(例如，球状的)。其它有用的颗粒状的标记包括铁蛋白，藻红蛋白，藻胆素ー蛋白，沉淀的或者可溶性的金属或者合金，真菌，海藻，或者细菌的色素或衍生物，例如细菌的叶绿素或者其它的植物原料。在某些具体方案中，标记是有色颗粒，例如右旋糖苷颗粒。在其它的具体方案中，用作阳性对照的标记和染料选择相同的顔色，以加强两种信号在基质上或者基 质内产生単一的明显的符号时的相互作用。在其它的具体方案中，标记可能是被分析物的ー种被标记了的特异性结合分子(例如，ー种抗体)。例如，在ー个具体方案中，目标被分析物是人绒毛膜促性腺激素(hCG)，结合hCG的标记是金溶胶标记的抗hCG抗体。当样品到达试剂区(或者标记区块)时，样品中的hCG被金溶胶标记的抗hCG抗体結合。标记抗体并不干扰被分析物结合区的捕获分子和标记的hCG相结合。例如，标记可以结合被分析物的ー个部分，而捕获分子可以结合被分析物的另ー个部分或者结合标记。hCG-抗-hCG抗体-金复合物移动到基质的下游。当复合物到达被分析物结合区时和捕获分子相结合形成金-抗_hCG抗-hCG-抗-hCG抗体。捕获分子可能是hCG的另ー种特异性结合分子，或者是结合hCG被分析物的半体的特异性结合分子。当金-抗-hCG特异性结合分子-hCG-抗-hCG特异性结合分子复合物结合到被分析物结合区时，被分析物结合区被复合物上的金标记着色并且在被分析物结合区金标记变得肉眼可见。在ー个具体方案中，特异性的结合分子是抗体或者抗体片段。标记和捕获结合分子能够结合被分析物上不同的抗原决定部位，在ー个具体方案中，标记的特异性结合分子结合了 β-hCG，而捕获结合分子结合了 a-hCG。“抗体”是指免疫球蛋白，无论是天然的还是部分或者全部合成的。这个术语还包括其中保持结合能力的抗体的衍生物，也包括任何含有与免疫球蛋白的结合域同源的或者很大程度上同源的结合域的蛋白质。这些蛋白质可能是源自天然物质，也可能是部分或者全部合成的。ー种抗体可能是单克隆的或者是多克隆的。ー种抗体可能是任何免疫球蛋白类型中的ー员，包括任何人类的免疫球蛋白类型IgG，IgM, IgA, IgD, IgG和IgE。“抗体片段”是抗体的衍生物或者抗体的小于全长的ー个部分。抗体片段能够保留至少ー个全长抗体的结合能力的显著位点。抗体片断的例子包括Fab, Fab’，F(ab’)2, scFv, Fv,dsFv ニ聚体，和Fd碎片，但是不仅仅包括以上这些。抗体片段可以由任何方式生成。例如，抗体片段可以通过酶解或者化学裂解ー个完整的抗体来生成，或者也可以通过从编码部分抗体序列的基因重组。换句话说，抗体片段可以部分地或者全部地重组产生。抗体片段可以是任意的单链抗体片段。换句话说，抗体片段可以包含多条相互联结的肽链，例如，通过ニ硫键相联结。抗体片段也可以是任意的一种多分子复合物。ー个有功能的抗体片段通常包含至少大约50个氨基酸，而更多的抗体片段通常包含至少大约200个氨基酸。单链Fvs (scFvs)是重组的抗体片段，它仅由可变轻链(\)和可变重链(Vh)相互以多肽链共价结合。ん和Vh中一方具有胺基端区域。多肽链长度和组成是可变的，其长度可以使两个可变域相互桥联并且对原子的排列没有严重影响。多肽链通常主要由甘氨酸和丝氨酸残基延伸构成，其中有一些谷氨酸和赖氨酸残基散在分布以增加其溶解度。“ニ聚体”是指单链Fvs的ニ聚物。ニ聚体的単体包含的肽链通常比大多数单链Fvs的短，并且它们显示出形成ニ聚物的倾向。“Fv”片段由ー个Vh和ー个\域以非共价相互连接组成。术语“dsFv”在这里是指包含一个稳定Vh -I对的分子间ニ硫键的Fv。“F(ab’)2”片段是抗体的ー个片段，本质上和用胃蛋白酶在PH 4. 0-4. 5时消化免疫球蛋白(通常是IgG)得到的片段相同。这个片段也可以重组合成。“Fab’ ”片段是ー种抗体片段，本质上和通过减少F (&ピ)2片段上的两条重链相互连接的双硫键得到的片段 相同。Fab’片段也可以重组合成。“Fab”
片段是一种本质上和用木瓜蛋白酶消化免疫球蛋白(通常IgG)得到的片段相同的抗体片段。Fab片段也可以重组合成。Fab片段上的重链片段是Fd碎片。本发明所说的试剂区域可以包括一个或几个试剂区域，当然这些试剂区域不一定都存在试剂条上。在一个实施方式中，试剂区域115位于检测区域95的上游(如图1-8)。在ー个具体的实施方式中，试剂区域115可以包括一个标记区域15和染料区域35，在标记区域上处理有带颜色标记物质的特异结合分子，在染料区域上处理有带颜色的染料，该染料上没有特异结合分子存在(图2)。在另ー些实施方式中，试剂区域上还处理有调节反应条件的化学试剂，这些化学试剂可以为检测区域上的特异结合分子和带颜色颗粒标记物质分子之间的反应提供最好的条件，例如调节反应的PH值，減少样本里其它干扰反应的干扰物质。这些化学试剂可以处理在样本接受区域里，也可以处理在染料区域和检测区域之间。在另ー实施方式中，反应试剂可以先和样本混合，然后再把含有检测区域和控制区域的试剂条插入到溶液中去进行反应。在另ー个实施方式中，在试剂区域上包括标记区域15，在标记区域上处理有过量的带有标记物质的特异结合分子，这样当液体流过阳性控制区域55时，溶液中的一部分标记物质被絮凝试剂或凝结物非特异性的捕获而产生颜色变化；在特异结合被分析物区域上，特异结合分子和带有标记物质的特异结合分子产生特异结合(图5)。带标记物质的特异结合分子和标记物质
这里所说的带标记物质的特异结合分子是指该分子和固定在检测区域上的另ー特异结合分子是ー对ー的结合。所谓特异性结合是ー个分子通过物理或化学方式特异结合另ー个分子，这两个分子之间的相互结合可以和其它结合相区別。这种两分子之间的特异结合除了包括抗原和抗抗原的抗体之外，还包括抗体和抗该抗体的另ー抗体，生物素和抗生物素的蛋白，多肽片段之间，DNA和DNA，RNA和RNA，以及通过重组技术获得的特异结合配对分子等等。这种结合可以是直接的结合，还可以是通过它特异配对分子间接结合。具体的说，固定在检测区域上的特异结合分子和带标记物质的分子之间的结合可以双抗体夹心法来检测抗原，双抗原夹心法来检测抗体、或者是由它们所衍生其它直接和间接法。这些特异结合是本领域技术人员结合分发明容易向到的。这里所说的标记物质是指ー类可以通过肉眼直接观察或者机器读取的物质。很多种类的标记物质可以通过物理或化学方式产生可以识别的信号。例如酶、荧光物质、化学发光物质、放射性物质，其它的物质包括自身带颜色颗粒状物质，该颗粒状物质可以是金属胶体或乳胶胶体等等，还可以是水溶性染料。样品的类型和被分析物质任何类型的样品都能够用本发明的装置进行试验，包括体液(例如，尿液和其它体液，以及临床样品)。液体样品可能源自固体的或者半固体的样品，包括粪，生物组织和食物样品。这些固体的和半固体的样品可以通过任何适合的方法转变成液体样品，例如在ー种适当的液体中混合，跺碎，浸软，孵育，溶解或者酶解固体样品(例如，水，磷酸盐缓冲液或者其它缓冲液)。“生物样品”包括源自活的动物、植物和食物的样品，也包括尿液、唾液、血液和血液成分、脑脊液、阴道拭子，精液、粪便、汗液、分泌物、组织、器官、肿瘤、组织和器官的培养物，细胞培养物和那里的条件介质，不管是人的还是动物的。食物样品包括加工过的食物成分和最后的产品，肉，奶酪，酒，牛奶和饮用水。植物样品包括源自任何植物、植物组织、植物细胞培养物和那里的条件介质的样品。“环境样品”是那些源自环境的样品(例如，湖水样品或者其它水体的样品，污水样品，土壤样品，地下水样品，海水样 品，废物水的样品)。污水和相关的废物也可以包含在环境样品中。用本发明可以分析任何被分析物质。能够用本发明检测的被分析物的例子包括(但是不仅仅包括)人绒毛膜促性腺激素(hCG)，黄体生成素(LH)，卵巣刺激素(FSH)，丙肝病毒(HCV)，こ肝病毒(HBV)，こ肝表面抗原，艾滋病病毒和任何滥用的药物。被分析物能够在任何的液体或者液化样品中检测到，例如尿液，唾液，ロ水，血液，血浆，或者血清。其它的被分析物的例子还有肌氨酐酸，胆红素，亚硝酸盐，蛋白质(非特异性的)，血液，白细胞，血糖，重金属和毒素，细菌成分(例如，特定类型的细菌的特殊的蛋白质和糖分，例如大肠杆菌0157:H7，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，产气荚膜梭菌，弯曲杆菌，单核增生李斯特菌，肠炎弧菌，或者腊状芽孢杆菌)。任何其它的适合侧流试验形式的被分析物都可以用本装置检測。
_3] 试剂条以及带有试剂条的装置
这里所说的试剂条指的可以让液体在上流动的试剂条，在试剂条上至少包括检测区域和控制区域。该试剂条可以由很多材料做成，例如纤维素、滤纸、硝酸纤维素膜或者尼龙膜等等，反正只要可让液体从试剂条的一端流向另一端的材料就可以了。在ー个具体的实施方式中，该试剂条为硝酸纤维素膜试剂条。具体的说，如图6所示，该试剂条6由四部分构成，包括样本吸收片425、标记片4115和硝酸纤维素片475和吸水片465。这几部分相互连接可以让液体从样本接受片425上经过标记片4115、硝酸纤维素膜475到达吸水片465。其中，在标记片上处理有带有颜色颗粒的特异结合分子，在硝酸纤维素膜475上包括检测区域495，检测区域495包括含有特异结合被分析物质的区域445和阳性控制区域455，在阳性控制区域上固定有一定量的絮凝试剂或凝结物。构成这些片的材料可以ー些常见的吸水材料，如玻璃纤维素、聚脂纤维素、滤纸等等。在一个优选的实施例中，样本接受片为玻璃纤维素片、标记片为聚脂膜片、吸水片为滤纸片。在另ー个具体实施方式
中，与图6所示的实施方式不同之处在于在检测区域的下游还有一个检测结果控制区域485，在检测区域上固定有一定量的絮凝试剂或凝结物(图4)。在上面描述的任何ー个实施方式中，组成试剂条的部分可以被固定在ー个疏水性的垫板上。在另ー个实施方式中，该试剂条可以被放置到含有上板和下板的装置中去，在该装置的上板上有一液体通孔和试剂条上的样本接受区域相通，上板的结果读取窗和检测区域和检测结果控制区域对应。这些试剂条的材料和装置是本领域技术人员结合本发明容易想到的，它们不是本发明的重点，构成试剂条各个部分的材料以及容纳试剂条的装置都在美国专利5，602，040 ;5，989，921 ；6，352，862 ；6, 319，676,5, 824，268 ；6, 184，040 ；6, 472，160 ；6, 267，722 ；6, 649，418 ；6，537，828 ；5, 739，041中都有详细的掲示。为了更好的说明发明的有益效果，现予以实验说明
实验I用带有絮凝试剂的检测条检测人绒毛腺促进激素(HCG)
这个例子描述了运用本发明的试剂条检测尿液中的HCG的ー个具体方案试剂的准备。絮凝试剂处理用双蒸水稀释BWD-Ql脱色絮凝试剂(无锡蓝波化学品有限公司)并加S-IO的表面活性制剂。稀释的比 例依次为(絮凝试剂水)(体积比)1 50,I 100,1 200,1 400,1 :800，I :1600。染料处理用pH为7的PBS缓冲液体稀释曙红Y染料(上海三思试剂有限公司)。稀释的终浓度为0. 2%, O. 1%, O. 055%, O. 025%, O. 0125%, O. 006255%。本发明的试剂条准备。试剂条是根据本领域内普通方法制造。參照图6，在标记片4115上处理含有金溶胶标记的小鼠抗β hCG IgG和曙红Y染料，在硝酸纤维素膜475的被分析物质结合区域445上处理羊抗aHCG IgG (4. Omg/ml),在硝酸纤维素膜475的阳性控制区域455上处理BWD-Ql脱色絮凝试剂。把这些试剂处理在硝酸纤维素膜上可以用ー个微处理器控制的微量喷洒装置任意的喷洒在膜上。然后把这些带有处理好了的片材(4115，475)干躁。等干燥好后，样本接受片425、标记片4115、硝酸纤维素膜475和吸水片465按照图6所示依次连接起来。标记片上处理的染料浓度和阳性控制区域上的BWD-Ql脱色絮凝试剂的浓度按照表I所示的组合来处理试剂条。对照试剂条的制备。与本发明试剂条的区别就是对照试剂条的阳性控制区域上处理有抗人IgG (1.3mg/ml)，在试剂区域上没有染料。其他的都一祥。检测阴性和阳性尿液体。按照以上处理的试剂条分别来检测阴性(10个)和阳性尿液体(10)，同时做对照实验。实验结果I :
表I :控制区域上的不同BWD-Ql脱色絮凝试剂浓度的控制线条实验结果 麵读剂稀眺胸!類aawg
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实验结果2
表2 :控制区域上处理的絮凝试剂和处理的特异抗体对检测结果的影响
权利要求
1.一种检测样品中是否含有被分析物的检测装置，包括支持液体样本流动的试剂条，在试剂条上包括试剂区域，检测区域和阳性控制区域，试剂区域上有标记物质，检测区域包括一种特异性的结合分子，其特征在于，所述的阳性控制区域上包括絮凝试剂或凝结物。
2.如权利要求I所述的检测装置，其特征在于，该阳性控制区域和所述检测区域上的被分析物质结合区域交叉形成一个可以识别的符号。
3.如权利要求2所述的检测装置，其特征在于，所述的阳性控制区域和所述的检测区域交叉形成一个十字架形。
4.如权利要求3所述的检测装置，其特征在于，所述的试剂区域还包括标记区域，所述的标记物质位于标记区域。
5.如权利要求4所述的检测装置，其特征在于，所述的试剂区域还包括一个染料区域，在染料区域上包括带有颜色的染料。
6.如权利要求5所述的检测装置，其特征在于，该染料区域位于标记区域的下游，检测区域的上游。
7.如权利要求1-6之一所述的检测装置，其特征在于，所述的试剂条为硝酸纤维素膜试剂条，试剂条上包括样本接收区域，其中沿液体流动方向上从上游到下游依次为样本接收区域、试剂区域和检测区域。
8.如权利要求I所述的检测装置，其特征在于，所述的絮凝试剂或凝结物为水溶性有机高分子絮凝试剂。
全文摘要
本发明提供一种检测样品中是否含有被分析物的检测装置，检测装置包括支持液体样品流动的试剂条；该试剂条上包括检测区域和控制区域；在检测区域包括一种特异结合的分子，在控制区域包括一种或多种非蛋白捕获物。在一些具体的实施方式中，在检测控制区域或阳性控制区域上包括一种或多种非蛋白的絮凝试剂或凝结物。生产本装置的成本低廉但不改变检测的结果。
文档编号G01N33/558GK102680680SQ201210040179
公开日2012年9月19日 申请日期2006年4月12日 优先权日2006年4月12日
发明者吴银飞, 蔡江涛, 高飞, 黄富强 申请人:艾博生物医药(杭州)有限公司