专利名称：一种判断肝胆细胞癌变及其转移和恶性程度的方法
技术领域：
本发明涉及一种判断癌变及其转移和恶性程度的方法，尤其是判断肝胆细胞癌变及其转移和恶性程度的方法。
背景技术：
DNA-PKcs是一个属于PI3-K激酶家族的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，它可以与另外两个亚基Ku70和Ku80共同构成DNA依赖蛋白激酶复合体(DNA-PK)，DNA-PKcs是其中的催化亚基。目前已知DNA-PK具有DNA修复、V(D)J重组等生理功能。另外，体外实验揭示DNA-PKcs可以磷酸化多种底物，包括一些转录因子信号转导分子，如hsp90、p53蛋白、Sp-1、Oct-1、Fos、JNK等，表明DNA-PKcs有更广泛的生物学功能有待揭示。
在相关的研究报道中，人体正常组织和肿瘤组织中的DNA-PKcs和Ku80、Ku70的表达分布是不均一的，可以表明DNA-PK具有广泛的生理功能，而且还有助于识别组织细胞对放射或DNA损伤药物的敏感性。至今，有关DNA-PK在肿瘤组织方面的研究主要涉及大肠癌、口咽部肿瘤、膀胱癌、血液系统肿瘤、食道癌、乳腺癌、前列腺癌、头颈部和脑部肿瘤等，所关注的问题基本上都是DNA-PK表达与肿瘤放、化疗敏感性的相关性。Moll等的研究指出，正常成人肝细胞中DNA-PKcs和Ku80经过免疫组化检测不表达或只在某些个体中存在很局限的表达灶。至于肝胆器官中肿瘤组织的DNA-PK表达状况如何，目前尚未有公开报道。
发明创造内容本发明的目的是提供一种判断肝胆细胞癌变及其转移和恶性程度的方法。
一种判断肝胆细胞癌变及其转移和恶性程度的方法，是对待检组织中的DNA-PKcs蛋白表达量进行分析DNA-PKcs表达呈阴性的是正常肝胆组织或癌旁组织，DNA-PKcs表达呈阳性的是癌组织。
所述对待检组织中的DNA-PKcs蛋白表达量进行分析是通过免疫组化技术进行的。
其中，所述癌组织可以是肝细胞癌组织、肝血管肉瘤癌组织、巨细胞性肝癌组织、透明细胞型肝癌组织、腺瘤样增生癌组织、肝胆管腺癌组织或胆囊腺癌组织。
在不同类型肿瘤中，DNA-PKcs的表达强弱具有差异，其中肝细胞癌的DNA-PKcs表达强阳性；肝胆管腺癌/瘤次之，表达阳性；透明细胞性肝癌等相对较弱，阳性；乳头状腺瘤则不表达，但伴有非典型增生表达明显增强。另外，胆囊腺癌的肌层浸润癌组织或转移灶DNA-PKcs阳性表达明显强于原发灶，说明DNA-PKcs表达与这类肿瘤的转移特性有关。
本发明揭示了肝胆肿瘤DNA-PKcs表达特性，由于与正常肝胆组织有显著差别，DNA-PKcs可以作为肝胆肿瘤组织的一个新的生物标记物，进行癌变的临床判断，特别是在某些类型肿瘤恶性程度和转移特性的判断上。同时，DNA-PKcs抗体在肝胆癌变治疗中也将是具有开发价值的潜在靶向载体。
下面结合附图对本发明做进一步说明。


图1为肝细胞癌的免疫组化2为肝细胞癌(右侧)和癌旁组织(左侧)的免疫组化3为伴有重度非典型增生者的乳头状腺瘤的免疫组化4、5、6为胆囊腺瘤组织的免疫组化图具体实施方式
实施例1、肝胆肿瘤组织DNA-PKcs表达的免疫组化分析一、实验材料的准备1、肝胆肿瘤组织病理切片患者均来自中国的中南地区，所有肿瘤都已得到病理确诊。
2、免疫组化分析DNA-PKcs抗体H-163(SC-9051)购自Santa Cruz公司，兔抗人多抗，位置是DNA-PKcs蛋白3965-4127位氨基酸残基。石腊包埋的组织病理切片，经过加热抗原修复后进行免疫组化反应。通过图象分析软件Mias2000观察和分析DNA-PKcs表达分布。
二、肝胆肿瘤组织DNA-PKcs表达的免疫组化分析对38例临床病例肿瘤切片的免疫组化检测，其免疫组化检测结果如表1所示。除1例巨细胞性肝癌、两例乳头状腺瘤为表达阴性外其余均为程度不同的阳性表达结果，其中7例肝细胞癌都是强阳性表达(如图1所示)，其次是腺癌。值得注意的是癌旁组织是阴性或微弱阳性表达(阳性细胞＜5％)，形成明显的对比(如图2所示)。乳头状腺瘤为良性肿瘤，在所检测的3例标本中2例为表达阴性，1例伴有重度非典型增生者约有45％的阳性表达细胞(如图3所示)，提示DNA-PKcs表达与这类肿瘤恶性程度有关。胆囊腺瘤组织的表达阳性细胞在15-80％之间，而且同一个体肿瘤的肌层浸润癌组织或转移灶表达阳性细胞率在80％以上，要明显高于原发灶(如图4、5、6所示)，提示DNA-PKcs表达可能与这类肿瘤的转移特性有关。
表1不同类型肿瘤中DNA-PKcs表达水平肿瘤名称 观察例数表达水平肝细胞癌 7 +++(＞95％)①肝血管肉瘤1 ++(80％)巨细胞性肝癌 1 -透明细胞型肝癌1 +(15％)腺瘤样增生3 +(10-45％)肝胆管腺癌12 +/++(45-85％)胆囊腺癌 10 +/++(15-90％)②乳头状腺瘤3 -/++③标注①+++，强阳性表达细胞＞95％；++，阳性表达细胞＞50％；+，阳性表达细胞＜50％；-为全部阴性细胞。
②其中3例肌层浸润癌组织表达阳性细胞＞80％。
③两例阴性，1例伴重度非典型增生为++。
权利要求
1.一种判断肝胆细胞癌变及其转移和恶性程度的方法，是对待检组织中的DNA-PKcs蛋白表达量进行分析DNA-PKcs表达呈阴性的是正常肝胆组织或癌旁组织，DNA-PKcs表达呈阳性的是癌组织。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述对待检组织中的DNA-PKcs蛋白表达量进行分析是通过免疫组化技术进行的。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述癌组织是肝细胞癌组织、肝血管肉瘤癌组织、巨细胞性肝癌组织、透明细胞型肝癌组织、腺瘤样增生癌组织、肝胆管腺癌组织或胆囊腺癌组织。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述肝细胞癌的DNA-PKcs表达呈强阳性；肝胆管腺癌/瘤表达呈阳性；透明细胞性肝癌的表达呈弱阳性；胆囊腺癌的肌层浸润癌组织或转移灶阳性表达强于原发灶。
5.权利要求1所述的DNA-PKcs作为判断肝胆细胞癌变及其转移和恶性程度的生物标记物的应用。
6.权利要求1所述的DNA-PKcs的抗体作为靶向载体的应用。
全文摘要
本发明公开一种判断肝胆细胞癌变及其转移和恶性程度的方法，是对待检组织中的DNA－PKcs蛋白表达量进行分析DNA－PKcs表达呈阴性的是正常肝胆组织或癌旁组织，DNA－PKcs表达呈阳性的是癌组织。本发明揭示了肝胆肿瘤DNA－PKcs表达特性，由于与正常肝胆组织存在显著的差别，DNA－PKcs可以作为肝胆肿瘤组织的一个新的生物标记物，有助于进行癌变的临床判断，特别是在某些类型肿瘤的恶性程度和转移特性的判断上，DNA－PKcs抗体在肝胆癌变治疗中也将是一个具有开发价值的潜在靶向载体。
文档编号G01N33/574GK1566957SQ0313777
公开日2005年1月19日 申请日期2003年6月24日 优先权日2003年6月24日
发明者周平坤, 隋建丽 申请人:中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所