专利名称：满山白糖浆中三种黄酮类化合物含量同时测定的方法
满山白糖浆中三种黄酮类化合物含量同时测定的方法
技术领域：
本发明涉及一种多组分同时测定的方法，尤其涉及一种满山白糖浆中三种黄酮类化合物含量同时测定的方法。
背景技术：
满山白是杜醇科植物毛果杜胃$ (Rhododendron senniavinii Maxim.)的干燥嫩枝和叶，具有祛痰止咳功效，是福建省地方药材；满山白止咳糖浆系列产品是以满山白药材作为主要原料的临床应用中成药。满山白止咳糖浆系列产品中的金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素等黄酮类化合物是其药理活性的物质基础，金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素三者的含量水平直接影响到药材原料的质量，并最终影响成药的质量。开发并应用满山白糖浆中黄酮类化合
物的快速定量测定方法，是满山白糖浆质量科学监控的必要手段。目前满山白糖浆中金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素的相关检测方法的主要文献报道为《满山白糖浆的质量标准研究》。所报道的方法是应用高效液相色谱方法分别对金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素进行单独的定量测定，使得测定满山白糖浆中多种黄酮类化合物的含量所需耗费的时间较长。因此，从业人员有待研究一种能够同时对满山白糖浆中的多种黄铜类化合物的含量进行测定的方法。

发明内容本发明所要解决的技术问题在于提供一种满山白糖浆中三种黄酮类化合物含量同时测定的方法，本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的一种满山白糖浆中三种黄酮类化合物含量同时测定的方法，所述三种黄酮类化合物分别为金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素；该方法操作如下(I)标准溶液的制备以2 I I的质量比分别称取适量纯度为98%的金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素对照品并混合，之后采用甲醇对混合后的对照品进行溶解并定容以获得标准溶液的母液，该母液的总浓度为4. 000mg/mL，然后将母液稀释成不同浓度梯度的标准溶液；(2)提取液的制备取适量糖浆并加入水饱和正丁醇进行萃取，且糖浆和水饱和正丁醇的体积比为3 1-1 2，共萃取1-5次，合并萃取液，并将合并后的萃取液减压浓缩至干得，之后加入甲醇溶解并转入25mL容量瓶定容，然后采用45nm孔径滤膜过滤即得满山白糖浆黄酮类化合物的提取液，该提取液即为待测液；(3)高效液相色谱检测在色谱柱上，以乙腈-水为流动相，梯度洗脱分离黄酮类化合物，色谱条件如下检测仪器高效液相色谱仪色谱柱C18色谱柱；流动相乙腈-水；
柱温25°C;检测波长360nm;进样量20iiL;流动相变化过程0min 25min内，乙腈水的体积比为70 30 ；25min 26min内，乙腈与水的体积比由70 30等度梯度转变至60 40 ；26min 55min内，乙腈与水的体积比为60 40 ；(4)测定分别取制备获得的标准溶液及待测液，并采用上述色谱条件进行进样检测，记录色谱图，经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算得到待测液中金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的浓度。进一步地，所述提取液的制备操作中超声提取结束后将溶液采用滤纸进行过滤。本发明满山白糖浆中三种黄酮类化合物含量同时测定的方法的有益效果在于能够对满山白糖浆中三种黄酮类化合物即金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素的含量进行同时测定，从而减少了测定的步骤、降低了测定所需耗费的时间。

下面参照附图结合实施例对本发明作进一步的描述。图I是本发明标准溶液的高效液相色谱图。图2是本发明实施例一中待测液高效液相色谱图。图3是本发明实施例二中待测液高效液相色谱图。图4是本发明实施例三中待测液高效液相色谱图。
具体实施方式结合如下实施例对本发明满山白糖浆中三种黄酮类化合物(即金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素)含量同时测定的方法进行进一步说明。实施例一I.标准溶液的制备分别称取20mg金丝桃苷、IOmg槲皮苷、IOmg槲皮素对照品并混合，之后采用甲醇对混合后的对照品进行溶解并定容以获得总浓度为4. 000mg/mL的母液，然后将母液分别稀释成6个浓度梯度，浓度梯度分别为母液浓度的0. 01、0. 1、0. 2、0. 5、0. 8和I. 0倍；其中金丝桃苷、槲皮苷、及槲皮素对照品的纯度均为98%。2.待测液的制备取ISmL糖浆并加入6mL水饱和正丁醇进行萃取(即糖浆和水饱和正丁醇的体积比为3 1)，共萃取3次，合并萃取液，并将合并后的萃取液减压浓缩至干，之后加入甲醇溶解并转入25mL容量瓶定容(，然后采用45nm孔径滤膜过滤即得满山白糖浆黄酮类化合物的提取液，该提取液即为待测液；3.高效液相色谱检测在色谱柱上，以乙腈-水为流动相，梯度洗脱分离黄酮类化合物，色谱条件如下检测仪器Agilent 1200型高效液相色谱仪色谱柱C18色谱柱；流动相乙腈-水；柱温25°C；
检测波长360nm；进样量20iiL;流动相变化过程0min 25min内，乙腈水的体积比为70 30 ；25min 26min内，乙腈与水的体积比由70 30等度梯度转变至60 40 ；26min 55min内，乙腈与水的体积比为60 :40。4.测定分别取制备获得的标准溶液及待测液注入上述色谱条件的高效液相色谱仪中进行分析测定，得到三种对照品的线性回归方程及样品的高效液相色谱图，具体地，三种对照品的线性回归方程如下表I所示，标准溶液的高效液相色谱图如图I所示，待测液的高效液相色谱图如图2所示，且经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算得到待测液中金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的浓度分别为0. 0349mg/mL、0. 0206mg/mL和0. 0102mg/mL。。表I三种对照品线性回归方程、相关系数、线性范围
权利要求
1.一种满山白糖浆中三种黄酮类化合物含量同时测定的方法，其特征在于所述三种黄酮类化合物分别为金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素；该方法操作如下 (1)标准溶液的制备以2 I I的质量比分别称取适量纯度为98%的金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素对照品并混合，之后采用甲醇对混合后的对照品进行溶解并定容以获得标准溶液的母液，该母液的总浓度为4. OOOmg/mL，然后将母液稀释成不同浓度梯度的标准溶液； (2)提取液的制备取适量糖浆并加入水饱和正丁醇进行萃取，且糖浆和水饱和正丁醇的体积比为3 1-1 2，共萃取1-5次，合并萃取液，并将合并后的萃取液减压浓缩至干，之后加入甲醇溶解并转入25mL容量瓶定容，然后采用45nm孔径滤膜过滤即得满山白糖浆黄酮类化合物的提取液，该提取液即为待测液； (3)高效液相色谱检测在色谱柱上，以乙腈-水为流动相，梯度洗脱分离黄酮类化合物，色谱条件如下 检测仪器高效液相色谱仪； 色谱柱C18色谱柱； 流动相乙腈-水； 柱温25°C ； 检测波长360nm ； 进样量20iiL ; 流动相变化过程0min 25min内，乙腈水的体积比为70 30 ；25min 26min内，乙腈与水的体积比由70 30等度梯度转变至60 40 ；26min 55min内，乙腈与水的体积比为60 40 ； (4)测定分别取制备获得的标准溶液及待测液，并采用上述色谱条件进行进样检测，记录色谱图，经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算得到待测液中金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的浓度。
2.根据权利要求I所述满山白糖浆中三种黄酮类化合物含量同时测定的方法，其特征在于所述提取液的制备操作中超声提取结束后将溶液采用滤纸进行过滤。
全文摘要
本发明提供一种满山白糖浆中三种黄酮类化合物含量同时测定的方法，先配制标准溶液与待测液，然后将标准溶液及待测液进行高效液相色谱检测，其中，色谱条件为色谱柱C18色谱柱；流动相乙腈-水；柱温25℃；检测波长360nm；进样量20μL；流动相变化过程0min～25min内，乙腈水的体积比为7030；25min～26min内，乙腈与水的体积比由7030等度梯度转变至6040；26min～55min内，乙腈与水的体积比为6040。本发明的优点在于能够对满山白糖浆中三种黄酮类化合物含量进行同时测定，从而减少了测定的步骤、降低了测定所需耗费的时间。
文档编号G01N30/02GK102788853SQ20121027641
公开日2012年11月21日 申请日期2012年8月3日 优先权日2012年8月3日
发明者林峰, 赵云青, 陈菁瑛, 黄颖桢 申请人:福建省农业科学院农业生物资源研究所