专利名称：补气养阴中药复方制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及中药复方制剂的质量检测方法，具体涉及一种补气养阴中药复方制剂的质量检测方法。
背景技术：
心脑舒口服制剂是一种已经上市的中药复方制剂，具有补气养阴的作用。临床上主要用于气阴两虚而致的头昏目眩，失眠健忘，心悸怔忡，短气肢倦，自汗盗汗，不耐烦劳等症。但现有制剂标准落后，质量控制指标较少，仅有人参对照品的薄层鉴别项，现有技术的质量检测方法不能有效控制心脑舒制剂的质量，从而将影响产品的生产质量控制和用药安全。

发明内容
本发明的目的在于提供一种质量可控的补气养阴中药复方制剂的质量检测方法，能够有效控制心脑舒制剂的质量，其专属性好、重现性好、稳定性强。本发明所述的补气养阴中药复方制剂的质量检测方法，包括对内容物的鉴别和人参皂苷Rgl含量的检测(I)补气养阴中药复方制剂处方如下人参65 75g ;麦冬130 145g ;五味子85 IOOg ;党参85 IOOg ;黄芪30 45g ；所述的补气养阴中药复方制剂为口服液；(2)薄层色谱法鉴别如下①人参的鉴别供试品溶液的制备取口服液样品20ml，置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并提取液蒸干，残渣加硫酸的45%乙醇溶液15ml，硫酸与乙醇溶液两者体积比为7 100，加热回流I I. 5小时，挥去乙醇，加三氯甲烷提取2次，每次10ml，分取三氯甲烷层，加适量无水硫酸钠脱水，过滤，滤液加于已处理好的中性氧化铝柱上用甲醇IOml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，使成0. 5ml，作为供试品溶液；中性氧化铝柱的参数为内径I. 5cm, 100 120目，4g ;对照品溶液的制备取人参二醇与人参三醇对照品，加无水乙醇制成每Iml各含Img的混合溶液,作为对照品溶液；薄层板自制的以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，规格为10X20cm，涂布厚度为0. 3mm ；点样专用定量毛细管接触式圆点状点样，点样量为供试品溶液5 10iU、对照品溶液5 10 ill ;展开剂环己烷-丙酮，两者体积比为3 2；展开方式双槽展开缸，上行展开，展距为12 14cm;
显色与检视10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在105°C加热至斑点显色清晰，紫外灯365nm下检视；
结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；②黄芪的鉴别供试品溶液的制备取口服液样品20ml,用乙酸乙酷振摇提取2次,每次30ml,弃去乙酸乙酯液，下层液用水饱和的正丁醇振摇提取5次，第一次30ml，其余每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，分别为100ml、80ml，分取正丁醇溶液蒸干，残渣加10%乙醇5ml溶解，通过已处理好的DlOl型大孔吸附树脂柱，分别用水50ml、40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇Iml溶解，作为供试品溶液，大孔吸附树脂柱内径I. 5cm，高12-18cm ；对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品，用甲醇制成每Iml含Img的溶液；薄层板自制的以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，规格为10X20cm，涂布厚度为0. 3mm ；点样专用定量毛细管接触式圆点状点样，点样量为供试品溶液10 15 yl、对照品溶液4u I ；展开剂氨蒸汽饱和的正丁醇-乙酸乙酯-水上层液与甲醇的混合溶液，两者体积比10 1，正丁醇乙酸乙酯水三者的体积比4 :1:5;展开方式双槽展开缸，上行展开，展距为10 12cm，取出，晾干；再放入展开剂中展开，展距10 12cm ；显色与检视10%硫酸乙醇溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰；结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰；③五味子的鉴别供试品溶液的制备取口服液样品20ml，加三氯甲烷20ml，回流提取30分钟，分取三氯甲烷层，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液；对照品溶液的制备取五味子对照药材0. 5g，同法制成对照品溶液；阴性溶液的制备将处方中的五味子除去，其他四味按与口服液相同的制备方法进行制备得到阴性对照样品；然后照供试品溶液的制备方法同法制备；薄层板自制的以0. 5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板，规格为10 X 20cm，涂布厚度为0. 3mm ；点样专用定量毛细管接触式圆点状点样，点样量为供试品溶液10 yl、对照品溶液 5 y I ;展开剂以石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，三者的体积比为5:5: 1，制备混合液时，石油醚温度为30 60°C ;展开方式双槽展开缸，上行展开，展距为10 12cm，取出，晾干；显色与检视置紫外光灯254nm下检视；结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰；(3)人参皂苷Rgl含量测定
①仪器与试药仪器美国戴安高效液相色谱仪，Scienhome KromasilC18, 5 U色谱柱(250X4. 6mm)，P68 泵，UVD170 紫外检测器；②色谱条件的选择检测波长203nm; 流动相:流速I. 5ml/min ;乙腈-0. 05%磷酸两者体积比20 80 ；③供试品制备精密吸取样品15ml，水饱和正丁醇振摇提取4次，每次加入20ml，合并正丁醇液，用I %氢氧化钠溶液洗涤3次，每次20ml，再用水洗涤3次，每次20ml，分取正丁醇液，回收至干，残渣用流动相溶解并定容至5ml量瓶中，摇匀，滤过，即得；④对照品制备精密称取人参皂苷Rgl对照品适量，加流动相制成每Iml含200 u g的对照品溶液；⑤测试分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 yl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每IOml含人参以人参皂苷Rgl (C42H72O14)计不得少于0. 50mg。所述的补气养阴中药复方制剂的制备方法包括如下步骤(I)人参用80 90%乙醇回流提取3 5次，每次3 4小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成稠膏；(2)麦冬、党参、黄芪加水煎煮3次，第一次2. 5 3小时，第二次2 2. 5小时，第三次I I. 5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇使含醇量达70%，搅匀，放置12小时以上，取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏；(3)将步骤(I)和步骤(2)上述稠膏合并，加水与活性炭，煮沸，冷藏12小时以上，滤过,滤液备用；活性炭占稠膏总质量的0. 3% ；(4)五味子加水煎煮2 3次，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇使含醇量达70%，搅匀，放置12小时以上，取上清液回收乙醇后加水及活性炭，煮沸15 25分钟，滤过，滤液调pH值至4. 5 5. 0，冷藏12小时以上，滤过，滤液备用；活性炭占上清液回收乙醇后的溶液总质量的0. 3% ；(5)将步骤(3)和步骤(4)滤液合并，加水及蔗糖150_190g，煮沸25 35分钟，滤过，放冷后加防腐剂和矫味剂，搅勻，调pH值至4. 0 6. 5,加水至1000ml,搅勻，灌装,灭菌，即得；防腐剂占滤液总质量的2. 5% -3. 5%，矫味剂占滤液总质量的0. 8% -I. 2%。所述的防腐剂可以是苯甲酸钠、山梨酸、苯甲酸中一种。所述的矫味剂可以是香精、甜蜜素、甜菊苷中一种。本发明的有益效果如下本发明的质量检测方法能有效控制心脑舒制剂的质量，其专属性好、重现性好，稳定性强，从而使产品的生产质量控制和用药安全得到了保证。


图I是人参的薄层鉴别色谱图I ;图2是人参的薄层鉴别色谱图II ；
图3是黄芪的薄层鉴别色谱图I 3中1、2、3样品；4、对照品；5、阴性样品；图4是五味子的薄层鉴别色谱图I ;图5是五味子的薄层鉴别色谱图II ；图4 5中:1、2、3样品；4、对照药材；5、阴性样品；图6是人参皂苷Rgl对照品标准曲线图；图7是人参皂苷Rgl对照品HPLC图谱；图8是阴性对照液样品HPLC图谱；图9是人参药材HPLC图谱；图10是口服液样品HPLC图谱。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明作进一步的描述。实施例I处方人参70g、麦冬137. 5g、五味子92. 5g、党参92. 5g、黄芪47. 5g ；制法以上五味，人参用85%乙醇回流提取四次，每次3小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成稠膏；麦冬、党参、黄芪加水煎煮三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次I小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至适量,加乙醇使含醇量达70%，搅匀，放置12小时以上，取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏，将上述稠膏合并，加水与活性炭，活性炭占稠膏总质量的0. 3% ;煮沸，冷藏12小时以上，滤过，滤液备用。五味子加水煎煮三次,每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇使含醇量达70 %，搅匀，放置12小时以上，取上清液回收乙醇后加水及活性炭，活性炭占上清液回收乙醇后的溶液总质量的0. 3%，煮沸20分钟，滤过，滤液调pH值至4. 5 5. 0，冷藏12小时以上，滤过，滤液与上述滤液合并，加水及蔗糖170g，煮沸30分钟，滤过，放冷后加3g苯甲酸钠和Iml香精，搅匀，调pH值至
4.0 6. 5，加水至1000ml，搅匀，灌装，灭菌，即得。质量检测方法如下一、薄层鉴别(I)人参的鉴别取本品20ml，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加硫酸的45%乙醇溶液(7 — 100) 15ml，加热回流I小时，挥去乙醇，加三氯甲烷提取2次，每次10ml，分取三氯甲烷层，加适量无水硫酸钠脱水，滤过，滤液加于已处理好的中性氧化铝柱上(内径I. 5cm, 100 120目，4g)，用甲醇IOml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，使成0. 5ml，作为供试品溶液。另取人参二醇与人参三醇对照品，加无水乙醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10 yl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮(3 2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热数分钟，至斑点显色清晰后，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(2)黄芪的鉴别取本品20ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，弃去乙酸乙酯液，下层液用水饱和正丁醇振摇提取5次，第一次30ml，其余每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次(100ml、80ml)，分取正丁醇溶液蒸干，残渣加10%乙醇5ml使溶解，通过已处理好的DlOl型大孔吸附树脂柱(内径I. 5cm，高12cm)，分别用水50ml、40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10 15 yl，对照品溶液4iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氨蒸汽饱和的[正丁醇-乙酸乙酯-水(4:1:5)上层液]-甲醇(10 I)为展开剂，展开10 12cm时，取出，晾干，再放入展开剂中展开10 12cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105°C下加热至显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相 同颜色的斑点。(3)五味子的鉴别取本品20ml，加三氯甲烷20ml回流提取30分钟，分取下层液，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材0. 5g同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液IOii I,对照药材溶液I,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的娃胶GF254薄层板上，以石油醚(30 60°C)_甲酸乙酯-甲酸(5 5 I)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。二、人参皂苷Rgl含量测定色谱条件与系统适用性试验仪器ScienhomeKromasilC18, 5 U 色谱柱(250 X 4. 6mm), UVD170 紫外检测器；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05%磷酸溶液(20 : 80)为流动相；检测波长203nm。流速I. 5ml/min。理论板数按人参阜苷Rgl峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rgl对照品适量，加流动相制成每Iml含200 u g的对照品溶液。供试品溶液的制备精密吸取本品15ml，加水饱和正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用I %氢氧化钠溶液洗涤3次，每次20ml，再用水洗涤3次，每次20ml，分取正丁醇液，回收至干，残渣用流动相溶解并定容至5ml，摇匀，滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 yl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每IOml含人参以人参皂苷Rgl (C42H72O14)计不得少于0. 50mg。本发明的方法是经过筛选得到的，筛选过程经过了多次试验，具体情况如下(I)人参的鉴别供试品溶液的制备取口服液20ml，置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，提取液蒸干，残渣加硫酸的45%乙醇溶液(7 — 100) 15ml，加热回流I小时，挥去乙醇，加三氯甲烷提取2次，每次10ml，分取三氯甲烷层，加适量无水硫酸钠脱水，滤过，滤液加于已处理好的中性氧化铝柱上(内径I. 5cm，100 120目，4g)，用甲醇IOml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，使成0. 5ml，作为供试品溶液。对照品溶液的制备取人参二醇与人参三醇对照品，加无水乙醇制成每Iml各含Img的混合溶液,作为对照品溶液。
阴性溶液的制备将处方中的人参除去，其他四味按质量标准中的制法项进行制备阴性对照样品；然后照供试品溶液的制备方法同法制备。薄层板自制的以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，规格为10X20cm，涂布厚度为0. 3mm。点样专用定量毛细管接触式圆点状点样，点样量为供试品溶液5 10iU、对照品溶液5 lOiil。展开剂环己烷-丙酮(3 2)。展开方式双槽展开缸，上行展开，展距为12-14cm。显色与检视10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在105°C加热数分钟，紫外灯(365nm)下检视。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。三批样品的人参薄层鉴别色谱图见图I。试验时，供试品制备曾经用乙醚和乙酸乙酯代替三氯甲烷进行提取，结果阴性对照有干扰，见图2。因此还是用三氯甲烷进行提取。(2)黄芪的鉴别供试品溶液的制备取口服液20ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，弃去乙酸乙酯液，下层液用水饱和的正丁醇振摇提取5次，第一次30ml，其余每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次(100ml、80ml)，分取正丁醇溶液蒸干，残渣加10%乙醇5ml使溶解，通过已处理好的DlOl型大孔吸附树脂柱(内径I. 5cm,高12cm以上)，分别用水50ml、40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品，用甲醇制成每Iml含Img的溶液。阴性溶液的制备将处方中的黄芪除去，其他四味按质量标准中的制法项进行制备阴性对照样品；然后照供试品溶液的制备方法同法制备。薄层板自制的以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，规格为10 X 20cm,涂布厚度为0. 3mm。点样专用定量毛细管接触式圆点状点样，点样量为供试品溶液10 15 yl、对照品溶液4iU。展开剂氨蒸汽饱和的[正丁醇-乙酸乙酯-水(4 I 5)上层液]-甲醇(10 I)。展开方式双槽展开缸，上行展开，展距为10 12cm，取出，晾干；再放入展开剂中展开，展距10 12cm。显色与检视10%硫酸乙醇溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。三批样品的黄芪薄层鉴别色谱图见图3。由于三氯甲烷毒性大，在供试品的制备过程中，用乙酸乙酯代替，不影响鉴别结果。
试验中发现，二次展开比一次展开16cm斑点分离效果好，而且两者展开用的时间几乎一样，所以，选定二次展开。(3)五味子的鉴别
供试品溶液的制备取口服液20ml，加三氯甲烷20ml，回流提取30分钟，分取三氯甲烷层，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液。 对照药材溶液的制备取五味子对照药材0. 5g，同法制成对照药材溶液。阴性溶液的制备将处方中的五味子除去，其他四味按质量标准中的制法项进行制备阴性对照样品；然后照供试品溶液的制备方法同法制备。薄层板自制的以0. 5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板，规格为10 X 20cm,涂布厚度为0. 3mm。点样专用定量毛细管接触式圆点状点样，点样量为供试品溶液10iU、对照品溶液 5 ii I o展开剂以石油醚(30 60°C )_甲酸乙酯-甲酸(5 5 I)的上层溶液为展开剂。展开方式双槽展开缸，上行展开，展距为10 12cm，取出，晾干。显色与检视置紫外光灯(254nm)下检视。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。三批样品的五味子薄层鉴别色谱图见图4。试验曾以石油醚(30 60°C)_甲酸乙酯-甲酸(10 5 I)的上层溶液为展开剂进行试验，结果在色谱图中，供试品与对照药材对应点Rf值较小，不易观察。见图5。因此换用石油醚(30 6(TC)-甲酸乙酯-甲酸(5 5 I)的上层溶液为展开剂进行试验，结果显示，样品中与对照药材对应斑点Rf值适宜，易于识别，阴性对照无干扰。见图4。(4)人参皂苷Rgl含量检测I、仪器与试药仪器美国戴安高效液相色谱仪，Scienhome KromasilC18, 5 U色谱柱(250X4. 6mm), P68 泵，UVD170 紫外检测器，CHROMELEON 数据处理软件，startorius BP211D电子分析天平d = 0. Olmg试剂乙腈为色谱纯,水为重蒸水,其余试剂均为分析纯。对照品人参皂苷Rgl对照品(中国药品生物制品检定所，20mg，110703-200322)。归一化法测定，本品纯度为100%。样品由荣昌制药淄博有限公司制备。2、色谱条件的选择2. I检测波长的确定根据《中国药典》2005版一部7页人参药材含量测定项下的含量测定，确定检测波长为203nm。2. 2流动相的选择采用美国戴安高效液相色谱仪，P680泵UVD170紫外检测器，流速I. 5ml/min。流动相曾试用以下几个系统乙腈-0.05% 磷酸(20 80)结果出峰时间40分钟左右，对照品及样品峰形良好，样品中被测成分峰与杂质分离度良好；乙腈-0.05%磷酸-四氢呋喃(15 80 5)结果出峰时间30分钟左右，对照品及样品峰形良好，但基线飘移严重。
通过以上试验结果可知当流动相为乙腈-0.05%磷酸(20 : 80)，对照品及样品峰形良好，样品中被测成分峰与杂质分离度良好，故选择流动相为乙腈-0. 05 %磷酸(20 80)。3、提取条件的选择3. I提取方法的选择吸取080201同批样品，分别照以下方法进行提取方法一精密吸取本品15ml，水饱和正丁醇振摇提取4次，每次20ml，分取正丁醇 液，回收至干，残渣用流动相溶解并定容至5ml量瓶中，摇匀，滤过，即得。方法二 精密吸取本品15ml，水饱和正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用I %氢氧化钠溶液洗涤3次，每次20ml，再用水洗涤3次，每次20ml，分取正丁醇液，回收至干，残渣用流动相溶解并定容至5ml量瓶中，摇匀，滤过，即得。方法三精密吸取本品15ml，加水饱和正丁醇50ml超声处理30分钟，分取正丁醇液，用I %氢氧化钠溶液洗涤3次，每次20ml，再用水洗涤3次，每次20ml，分取正丁醇液，回收至干，残渣用流动相溶解并定容至5ml量瓶中，摇匀，滤过，即得。分别吸取以上样品液各20 Ul注入液相色谱仪测其含量，结果见下表I :表I提取方法选择结果表
提取方法方法一方法二方法三
人参皂苷Rgl含量(mg/支) 0 700 71070结果表明三方法中人参皂苷Rgl含量相差不大，但方法一杂质较多，方法二较方法三简单省时，故选方法二为提取方法，但对方法中各步骤仍需进一步细化与优选。3. 2提取次数的选择提取次数是影响提取效果的主要因素之一，为最大程度的提取有效成分，同时节约试剂，本试验对提取次数进行了优选。取080201批样品三份，每份15ml，分别用水饱和正丁醇提取3次，4次，5次，其余操作不变，制备供试液。分别吸取以上样品液各20 u I注入液相色谱仪测其含量，结果见下表2 表2提取次数选择结果表
提取次数
人参皂苷Rgl含量(mg/支) 0680 71071结果表明样品提取得4次时，有效成分已提取完全，故确定提取次数为4次。4、线性范围考察取对照品适量，精密称定，加流动相制成每Iml含人参皂苷Rgl 349 U g的对照品溶液，分别精密吸取20 yl、15 yl、10 iil、8ia、4 ill进样，测定其峰面积。结果见表3。以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归，得标准曲线方程，得人参皂苷Rgl标准曲线方程为Y=3. 8688X-0. 1096 (r = 0. 9998)，如图6所示，以上结果表明人参皂苷Rgl在I. 396 y g
6.980 u g范围内，峰面积值与进样量有良好的线性关系。表3人参皂苷Rgl对照品测定结果
权利要求
1.一种补气养阴中药复方制剂的质量检测方法，其特征在于包括对内容物的鉴别和人参皂苷Rgl含量的检测 (1)补气养阴中药复方制剂处方如下 人参65 75g ;麦冬130 145g ;五味子85 IOOg ;党参85 IOOg ;黄芪30 45g ； 所述的补气养阴中药复方制剂为口服液； (2)薄层色谱法鉴别如下 ①人参的鉴别 供试品溶液的制备取口服液样品20ml，置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并提取液蒸干，残渣加硫酸的45%乙醇溶液15ml，硫酸与乙醇溶液两者体积比为7 100，加热回流I I. 5小时，挥去乙醇，加三氯甲烷提取2次，每次10ml，分取三氯甲烷层，加适量无水硫酸钠脱水，过滤，滤液加于已处理好的中性氧化铝柱上用甲醇IOml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，使成0. 5ml，作为供试品溶液；中性氧化铝柱的参数为内径I. 5cm, 100 120目，4g ; 对照品溶液的制备取人参二醇与人参三醇对照品，加无水乙醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液； 薄层板自制的以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，规格为10 X 20cm，涂布厚度为0. 3mm ； 点样专用定量毛细管接触式圆点状点样，点样量为供试品溶液5 10 yl、对照品溶液5 10 u I ; 展开剂环己烷-丙酮，两者体积比为3 2 ； 展开方式双槽展开缸，上行展开，展距为12 14cm ； 显色与检视10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在105°C加热至斑点显色清晰，紫外灯365nm下检视； 结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； ②黄芪的鉴别 供试品溶液的制备取口服液样品20ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，弃去乙酸乙酯液，下层液用水饱和的正丁醇振摇提取5次，第一次30ml，其余每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，分别为100ml、80ml，分取正丁醇溶液蒸干，残渣加10%乙醇5ml溶解，通过已处理好的DlOl型大孔吸附树脂柱，分别用水50ml、40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干,残渣用甲醇Iml溶解，作为供试品溶液，大孔吸附树脂柱内径I. 5cm,高12 18cm ； 对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品，用甲醇制成每Iml含Img的溶液； 薄层板自制的以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，规格为10 X 20cm，涂布厚度为0. 3mm ； 点样专用定量毛细管接触式圆点状点样，点样量为供试品溶液10 15 y I、对照品溶液 4 ii I ; 展开剂氨蒸汽饱和的正丁醇-乙酸乙酯-水上层液与甲醇的混合溶液，两者体积比10 1，正丁醇乙酸乙酯水三者的体积比4 :1:5; 展开方式双槽展开缸，上行展开，展距为10 12cm,取出，晾干；再放入展开剂中展开，展距10 12cm ； 显色与检视10%硫酸乙醇溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰； 结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰； ③五味子的鉴别 供试品溶液的制备取口服液样品20ml，加三氯甲烷20ml，回流提取30分钟，分取三氯甲烷层，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液； 对照品溶液的制备取五味子对照药材0. 5g,同法制成对照品溶液； 阴性溶液的制备将处方中的五味子除去，其他四味按与口服液相同的制备方法进行制备得到阴性对照样品；然后照供试品溶液的制备方法同法制备； 薄层板自制的以0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板，规格为、10 X 20cm，涂布厚度为0. 3mm ； 点样专用定量毛细管接触式圆点状点样，点样量为供试品溶液10 yl、对照品溶液5u I ； 展开剂以石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，三者的体积比为5 : 5 : 1，制备混合液时，石油醚温度为30 60°C ； 展开方式双槽展开缸，上行展开，展距为10 12cm,取出，晾干； 显色与检视置紫外光灯254nm下检视； 结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰； (3)人参皂苷含量测定 ①仪器Scienhome KromasilC18, 5 U 色谱柱(250 X 4. 6mm), UVD170 紫外检测器; ②色谱条件的选择 检测波长203nm ； 流动相流速I. 5ml/min ;乙腈-0. 05%磷酸两者体积比20 80 ； ③供试品制备 精密吸取样品15ml，水饱和正丁醇振摇提取4次，每次加入20ml，合并正丁醇液，用1%氢氧化钠溶液洗涤3次，每次20ml，再用水洗涤3次，每次20ml，分取正丁醇液，回收至干，残渣用流动相溶解并定容至5ml量瓶中，摇匀，滤过，即得； ④对照品制备精密称取人参皂苷Rgl对照品适量，加流动相制成每Iml含200ii g的对照品溶液； ⑤测试分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20yl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.根据权利要求I所述的补气养阴中药复方制剂的质量检测方法，其特征在于其制备方法包括如下步骤 (1)人参用80 90%乙醇回流提取3 5次，每次3 4小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成稠膏； (2)麦冬、党参、黄芪加水煎煮3次，第一次2.5 3小时，第二次2 2. 5小时，第三次1 1. 5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇使含醇量达70%，搅匀，放置12小时以上,取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏； (3)将步骤(I)和步骤(2)上述稠膏合并，加水与活性炭，煮沸，冷藏12小时以上，滤过，滤液备用；活性炭占稠膏总质量的0. 3% ; (4)五味子加水煎煮2 3次，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量,加乙醇使含醇量达70 %，搅匀，放置12小时以上，取上清液回收乙醇后加水及活性炭，煮沸15 25分钟，滤过，滤液调PH值至4. 5 5. 0，冷藏12小时以上，滤过，滤液备用；活性炭占上清液回收乙醇后的溶液总质量的0. 3% ； (5)将步骤(3)和步骤⑷滤液合并，加水及蔗糖150 190g，煮沸25 35分钟，滤过，放冷后加防腐剂和矫味剂，搅勻，调pH值至4. 0 6. 5,加水至1000ml,搅勻，灌装,灭菌，即得；防腐剂占滤液总质量的2. 5% _3.5%，矫味剂占滤液总质量的0.8% 1.2%。
全文摘要
本发明涉及中药复方制剂的质量检测方法，具体涉及一种补气养阴中药复方制剂的质量检测方法及其制备方法。本发明提供了补气养阴中药复方制剂中人参、黄芪、五味子的鉴别检测方法及人参皂苷Rg1含量的色谱检测方法。本发明的质量检测方法能有效控制心脑舒制剂的质量，其专属性好、重现性好，稳定性强，从而使产品的生产质量控制和用药安全得到了保证。
文档编号G01N30/90GK102621270SQ20121010978
公开日2012年8月1日 申请日期2012年4月16日 优先权日2012年4月16日
发明者李雪梅, 王丽庆, 翟勇, 郗光健, 郭桂秋 申请人:荣昌制药(淄博)有限公司