专利名称：一种从果实表皮中提取花色素苷的方法
技术领域：
本发明属于植物有效成分提取领域，涉及ー种从果实表皮中提取花色素苷的方法。
背景技术：
果皮的色泽是果实外观品质的核心指标，也是影响其商品价值的重要因素。研究表明，果实色泽主要由叶绿素、类胡萝卜素和酚类色素的含量及其比例決定。果实着色，是由于果实细胞中叶绿素降解，同时形成和显现类胡萝卜素或合成 花色素苷的結果。花色素苷是红色、紫红色果皮色泽的主要组成成分，易溶于水、甲醇、こ醇等强极性溶剂，在酸性条件下能保持原有色泽，PH由低到高时，花色素苷溶液呈现由红色到无色直至蓝色的变化，并且高温、强光条件下，花色素苷易降解。因此，组织中花色素苷多在避光、低温下提取，采用酸化水溶液或酸化有机溶液提取。在低温条件下，酸性水溶液溶解花色素苷能力较低，果实中色素提取效果较差，随着温度提高，其提取效率升高，但是花色素苷在低温条件，稳定性较好，随着温度上升，花色素苷稳定性下降，降解速度加快，研究表明，花色素苷在100°C下，2h即完全降解，而在5°C下，花色素苷的半衰期为79d。因此，采用酸化水溶液水浴提取花色素苷时，存在ー对无法协调的矛盾，任何条件下都会是提取的花色素苷含量不符合果实中的真实值，从而无法精确測量。采用酸化有机溶液提取时，其提取效率较高，但需要长时间的浸堤，长时间处于静置状态，原料沉淀板结，不利于提取液完全溶解原料中色素，并且需要多次的重复，合并提取液，这就会使得最后定容时体积较大，而果实中花色素苷含量本来就较少，最后提取液体积大使得花色素苷浓度变低，仪器(如高效液相色谱)在測定其含量时，有最低检出限，浓度过低会使得无法測定其含量。因此，采用酸化有机溶液多次浸提材料中花色素苷时，合并提取液定容后需要通过旋转蒸发仪浓縮，而旋转蒸发过程中加热会加快花色素苷降解，并且浓缩后花色素苷粘附在旋转蒸发瓶上，少量水无法彻底洗脱，使得实验误差増大。因此，由于目前花色素苷提取方法存在不足之处，迫切需要ー种新的提取方法，以满足对果实中花色素苷含量和成分研究的要求。针对上诉方法，本发明利用超声波助溶作用，低损耗、高效率的提取了梨果实中花色素苷，并且该方法操作简便，耗时较少。

发明内容
本发明的目的是针对现有技术的上述缺陷，提供ー种从果实表皮中提取花色素苷的方法。本发明的目的可通过如下技术方案实现ー种从果实表皮中提取花色素苷的方法，包括如下步骤I)取果实表皮，液氮研磨至粉末状，每克鲜果实表皮加入3 6mL 1%盐酸甲醇(V/V)，匀浆得匀浆液；
2)将勻衆液于O 4°C,避光，浸提4 5h ;3)将浸提液放入超声仪器中超声处理；4)超声波处理后，浸提液在4°C下12000g离心18 25min，取上清液即得花色素苷。所述的果实表皮为红皮梨、苹果、葡萄、桃、李、樱桃的果实表皮；优选红皮梨果实表皮。所述的果实表皮厚度为O. 8 I. 2cm。
配制所述的I %盐酸甲醇时加入的盐酸浓度为36 37%，所述的超声条件为所述的超声条件为O 4°C下，超声功率为100W，超声频率40KHZ，超声 O. 5 I. 5h。步骤4)所述的上清液经定容、过滤后用于花色素苷成分或含量检测。有益效果I、花色素苷是红色、紫红色果面色泽的主要组成成分，对果实中花色素苷组分及其含量的測定是对其果皮着色开展深入研究的基础，而最高效的提取方法是精确測定果实中花色素苷含量的前提条件。本方法综合考虑了果皮中花色素苷的分布特点及性质，在传统浸提的基础上加入超声处理，选择特定范围的浸提温度、浸提时间、超声条件，以解决花色素苷传统提取方法中损耗高，耗时长等问题；在提取过程中一直处于低温条件，并且步骤简单，耗时短，提取效率高，有效降低了花色素苷的降解和损耗，为精确测定果实花色素苷含量及组分奠定了基础。2、本发明缩短了花色素苷提取时间，提高了提取效率，并且一次性提取果实中花色素苷，其提取浓度较高，无需后续操作，因而降低了花色素苷损耗。3、本发明的使用方法简单，便捷，快速。提取时只需要研钵，塑料薄膜盒，超声仪器，离心机，离心管，容量瓶，其均为常规仪器，并且操作简单，个人即可完成所有实验内容。4、本发明的推广性和应用性很强，可以用于提取梨、苹果、葡萄、桃、李、樱桃多种果树的花色素苷，因此，该方法具有非常广阔的应用前景。
具体实施例方式实施例II.花色素苷提取I)将采集的梨果实清洗、擦干，取2g梨果实表皮，厚度在O. Icm左右，放入研钵中加液氮研磨至粉末状，加8mL 1%盐酸甲醇(V/V)匀浆得匀浆液；所述的1%盐酸甲醇配制方法为取lmL36%盐酸加超纯水定容到100mL。2)将匀浆液从研钵中转入IOmL离心管，放入装有生物冰袋冰盒中避光，O 4°C下浸提4h;3)将离心管放入超声仪器中超声lh，超声功率为100W，超声频率40KHZ，在超声波仪器中放入生物冰袋，使温度保持在O 4°C下，防止在超声过程中温度升高，使得花色素苷降解；4)超声波处理后，4°C下12000g离心20min，取上清液定容至IOmL得花色素苷提取液，用于花色素苷含量測定；
2.花色素苷含量測定I)取ImL花色素苷提取液，分别用O. 4mol ·じ1KQ-HCl缓冲液(pH I. O)和O.4mol ·じ1柠檬酸/磷酸氢ニ钠缓冲液(pH 5. 0)，稀释至5mL，混匀后用蒸馏水作对照，在510nm下測定光密度值(D)。2)每克鲜果皮花色素苷含量(mg· g-1)= Λ DX5X 10X445. 2/29600X2，其中AD=D 510 (pH I. 0)_D510(pH 5. O) ;5为稀释倍数；10为浸提体积；445. 2为矢车菊半乳糖苷相对分子量；29600为矢车菊半乳糖苷摩尔吸光系数(πιοΓ1 · cm—1) ；2为果皮质量(g)。3.试验结果超声波处理辅助提取花色素苷及O 4°C浸提4h不进行超声处理和O 4°C浸提24h不进行超声处理(CK)的吸光度值及花色素苷含量对比如表I所示表I不同提取方法的花色素苷含量測定比较
权利要求
1.ー种从果实表皮中提取花色素苷的方法，其特征在于包括如下步骤 1)取果实表皮，液氮研磨至粉末状，每克鲜果实表皮加入3 6mL1%盐酸甲醇(V/V)，匀浆得匀浆液； 2)将勻衆液于O 4°C,避光,浸提4 5h; 3)将浸提液放入超声仪器中超声处理； 4)超声波处理后，浸提液在4°C下12000g离心18 25min，取上清液即得花色素苷。
2.根据权利要求I所述的从果实表皮中提取花色素苷的方法，其特征在于所述的果实表皮为红皮梨、苹果、葡萄、桃、李、樱桃的果实表皮；优选红皮梨果实表皮。
3.根据权利要求2所述的从果实表皮中提取花色素苷的方法，其特征在于所述的果实表皮厚度为O. 8 I. 2cm。
4.根据权利要求I所述的从果实表皮中提取花色素苷的方法，其特征在于配制所述的I %盐酸甲醇时加入的盐酸浓度为36 37%。
5.根据权利要求I所述的从果实表皮中提取花色素苷的方法，其特征在于所述的超声条件为所述的超声条件为O 4°C下，超声功率为100W，超声频率40KHZ，超声O. 5 I.5h。
6.根据权利要求I所述的从果实表皮中提取花色素苷的方法，其特征在于步骤4)所述的上清液经定容、过滤后用于花色素苷成分或含量检测。
全文摘要
本发明属于植物有效成分提取领域，公开了一种从果实表皮中提取花色素苷的方法。本发明利用超声波具有助溶的作用，取果实表皮，液氮研磨至粉末，加入1%盐酸甲醇提取液匀浆，低温避光浸提，再放入超声仪器中超声辅助提取。本发明简单、方便、快速，能够有效提取果实中花色素苷，并且该过程一直在低温下进行，有利于保持花色素苷的稳定性。因此，利用超声波助溶，可以快速、高效提取果实中花色素苷。
文档编号G01N1/34GK102660141SQ201210161699
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月22日 优先权日2012年5月22日
发明者吴俊 , 吴巨友, 张绍铃, 肖长城, 陶书田, 齐开杰 申请人:南京农业大学