专利名称：饲料中吡啶甲酸铬的高效液相色谱分析方法
技术领域：
本发明涉及吡啶甲酸铬的分析检测方法，具体地指一种饲料中吡啶甲酸铬的高效液相色谱分析方法。
背景技术：
吡啶甲酸铬，紫红色结晶性细小粉末，流动性良好，常温下稳定，微溶于水，不溶于乙醇，其中的铬为三价铬。吡啶甲酸是人和哺乳动物肝脏、肾脏内产生的氨基酸代谢产物，并大量存在于牛奶等食物中，其与Cr3+紧密结合成稳定化合物吡啶甲酸铬，可以被人体和动物很好地吸收。吡啶甲酸铬作为饲料添加剂具有以下作用I、增加畜禽肉、蛋、奶、仔的产出率和幼仔成活率；·2、促进畜禽降糖抑脂快速生长，提高饲料回报率；3、调节内分泌，增强畜禽繁殖性能；4、改善畜禽胴体品质，提高瘦肉率；5、降低畜禽应激，增强畜禽抗应激能力；6、增进畜禽免疫机能，降低畜禽养殖风险。自然界中的铬以Cr到Cr6+的各种价态存在，其中主要存在两种铬的形态，维持生命的必需元素三价铬和具有高毒性、强致癌性的六价铬。因此，仅测定产品中铬的总量已不能满足需要，还需对吡啶甲酸铬分子进行合理准确的分析。目前，饲料添加剂吡啶甲酸铬的测定采用的是行业标准NY/T916-2004。在采用该方法测定中观察到，吡啶甲酸铬在中性条件下有离解的现象发生，据有关文献报导吡啶甲酸铬在中性或酸性水环境中可分解为吡啶甲酸和吡啶酸铬二聚体。在用高效液相色谱分析，所得的谱图中有重叠峰出现，不易分离，不便于定量分析。

发明内容
本发明的目的就是针对现有技术的缺陷，提供一种饲料中吡啶甲酸铬的高效液相色谱分析方法，它能准确地分析测定吡啶甲酸铬的含量。考虑到吡啶甲酸铬在中性条件下有离解的现象发生，而很多金属离子的络合物需在碱性条件下才能稳定。经过试验发现，在高PH值条件下样品不再发生变化。本发明的技术方案是这样实现的采用配有紫外检测器的高效液相色谱仪进行测定，以十八烷基键合硅胶为填充柱，该方法采用的流动相为乙腈和磷酸盐缓冲溶液，所述乙腈与磷酸盐缓冲溶液的体积比为10:90 20:80，所述磷酸盐缓冲溶液的ΡΗ=8. (T9. 5，所述磷酸盐缓冲溶液浓度为O. 05、. lmol/L，检测波长为254 428臟。优选的，所述乙腈与水的体积比为10:90。优选的,所述磷酸盐缓冲溶液的PH=8. 5。经试验选定流动相在PH=8. 5时得到最满意的色谱分析方法。
优选的，所述磷酸盐缓冲溶液浓度为O. lmol/L。所述磷酸盐缓冲溶液为磷酸二氢钠的水溶液，PH值用NaOH调节。本发明的有益效果在于采用本发明的分析方法，吡啶甲酸铬没有发生离解的现象，峰形良好，没有重叠峰出现，定量分析准确。加标回收率试验得到平均回收率为98. 28%，精密度试验得到RSD%=0. 69，可以满足饲料级吡啶甲酸铬的含量分析。
具体实施例方式以下结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述。实施例I采用配有紫外检测器的高效液相色谱仪进行测定，以十八烷基键合硅胶为填充柱,如，Waters XbridgeTMC 18 5 Mm 4. 6 X 250mm Column。流动相为乙腈和磷酸盐缓冲溶 液，乙腈与磷酸盐缓冲溶液的体积比为10:90，磷酸盐缓冲溶液的PH=8. 5，磷酸盐缓冲溶液浓度为O. lmol/L，检测波长为254 428臟。精密称取标准样品吡啶甲酸铬O. 035g (称准至O. 0002g)，置于25mL容量瓶中，力口流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取该溶液3mL移入25mL容量瓶中，加流动相定容，摇匀，作为标准溶液。精密称取试样I. 25g (称准至O. 0002g)，加流动相充分溶解并定容到25mL容量瓶中，超声波提取5min，用孔径为O. 45Mm膜过滤，吸取该溶液ImL至25mL容量瓶中，加流动相稀释到刻度，摇匀，作为供试溶液。精密量取标准溶液和供试溶液，分别进样ΙΟμ ，记录色谱图，按外标法计算试样中吡啶甲酸铬的含量。实施例2采用配有紫外检测器的高效液相色谱仪进行测定，以十八烷基键合硅胶为填充柱,如，Waters XbridgeTMC 18 5 Mm 4. 6 X 250mm Column。流动相为乙腈和磷酸盐缓冲溶液，乙腈与磷酸盐缓冲溶液的体积比为15:85，磷酸盐缓冲溶液的PH=9. 5，磷酸盐缓冲溶液浓度为0. 05mol/L，检测波长为254 428mm。精密称取标准样品吡啶甲酸铬0. 035g (称准至0. 0002g)，置于25mL容量瓶中，力口流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取该溶液3mL移入25mL容量瓶中，加流动相定容，摇匀，作为标准溶液。精密称取试样I. 25g (称准至0. 0002g)，加流动相充分溶解并定容到25mL容量瓶中，超声波提取5min，用孔径为0. 45Mm膜过滤，吸取该溶液ImL至25mL容量瓶中，加流动相稀释到刻度，摇匀，作为供试溶液。精密量取标准溶液和供试溶液，分别进样10μ ，记录色谱图，按外标法计算试样中吡啶甲酸铬的含量。实施例3采用配有紫外检测器的高效液相色谱仪进行测定，以十八烷基键合硅胶为填充柱,如，Waters XbridgeTMC 18 5 Mm 4. 6 X 250mm Column。流动相为乙腈和磷酸盐缓冲溶液，乙腈与磷酸盐缓冲溶液的体积比为20:80，磷酸盐缓冲溶液的PH=9. 0，磷酸盐缓冲溶液浓度为0. 05mol/L，检测波长为254 428臟。精密称取标准样品吡啶甲酸铬0. 035g (称准至0. 0002g)，置于25mL容量瓶中，力口流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取该溶液3mL移入25mL容量瓶中，加流动相定容，摇匀，作为标准溶液。精密称取试样I. 25g (称准至O. 0002g)，加流动相充分溶解并定容到25mL容量瓶中，超声波提取5min，用孔径为O. 45Mm膜过滤，吸取该溶液ImL至25mL容量瓶中，加流动相稀释到刻度，摇匀，作为供试溶液。精密量取标准溶液和供试溶液，分别进样ΙΟμ ，记录色谱图，按外标法计算试样中吡啶甲酸铬的含量。方法可行性试验采用实施例I的测定方法，准确称取试样5份进样，进行精密度试验，计算得到RSD%=0. 69。根据试样的测定步骤，作5个浓度加样回收率实验，每个浓度做3个平行样，计算平均回收率，以验证方法的准确性。结果如表I所示。表I 加标回收率试验结果
权利要求
1.一种饲料中吡啶甲酸铬的高效液相色谱分析方法，采用配有紫外检测器的高效液相色谱仪进行测定，以十八烷基键合硅胶为填充柱，其特征在于该方法采用的流动相为乙腈和磷酸盐缓冲溶液，所述乙腈与磷酸盐缓冲溶液的体积比为10:90 20:80，所述磷酸盐缓冲溶液的ΡΗ=8. (T9. 5，所述磷酸盐缓冲溶液浓度为O. 05、. lmol/L,检测波长为254 428mm。
2 .根据权利要求I所述的饲料中吡啶甲酸铬的高效液相色谱分析方法，其特征在于所述乙腈与磷酸盐缓冲溶液的体积比为10 :90。
3.根据权利要求I所述的饲料中吡啶甲酸铬的高效液相色谱分析方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲溶液的PH=8. 5，所述磷酸盐缓冲溶液浓度为O. lmol/L。
4 根据权利要求I或3所述的饲料中吡啶甲酸铬的高效液相色谱分析方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲溶液为磷酸二氢钠的水溶液，PH值用NaOH调节。
全文摘要
本发明公开了一种饲料中吡啶甲酸铬的高效液相色谱分析方法，采用配有紫外检测器的高效液相色谱仪进行测定，以十八烷基键合硅胶为填充柱，流动相为乙腈和磷酸盐缓冲溶液，所述乙腈与磷酸盐缓冲溶液的体积比为10:90 ~ 20:80，磷酸盐缓冲溶液的PH=8.0~9.5，磷酸盐缓冲溶液浓度为0.05~0.1mo1/L，检测波长为254~428mm。采用本发明的分析方法，吡啶甲酸铬没有发生离解的现象，峰形良好，没有重叠峰出现，定量分析准确。加标回收率试验得到平均回收率为98.28%，精密度试验得到RSD%=0.69，可以满足饲料级吡啶甲酸铬的含量分析。
文档编号G01N30/02GK102928534SQ20121041781
公开日2013年2月13日 申请日期2012年10月26日 优先权日2012年10月26日
发明者黄剑雄, 闵江华 申请人:湖北神舟化工有限公司