专利名称：一种藏药组合物六味大托叶云实制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种藏药组合物制剂的质量检测方法，特别涉及一种藏药组合物六味大托叶云实散及其制剂的质量检测方法。
背景技术：
六味大托叶云实散收载于国家药品标准，标准编号WS3-BC-0282-95，具有温肾、滋阴的作用，主要用于妇女白带病。该复方制剂由大托叶云实90g、石榴子90g、肉桂5g、豆蘧40g、荜发5g、红花50g组成。大托叶云实为豆科植物大托叶云实Caesalpiniacrista L.的干燥成熟种子，具有温肾、逐寒的功效；石槽子为安石槽科植物安石槽 Punica granatum L.的干燥种子,主治培根寒症、胃寒症及一切胃病；肉桂为樟科植物肉桂Cinnamomum cassis Presl的干燥树皮,具有补火助阳，引火归元,散寒止痛,温通经脉的功效；豆蘧为姜科植物白豆蘧Amomum kravanh Pierre ex Gagnep.或爪睡白豆蘧Amomumcompactum Soland ex Maton的干燥成熟果实,具有化湿行气、温中止呕、开胃消食的功效；荜茇为胡椒科植物荜茇Piper longum L.的干燥近成熟或成熟果穗，具有温中散寒、下气止痛的功效；红花为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花,具有活血通经、散瘀止痛的功效。部分女性经期前后常伴有月经不调和白带异常等症状，内分泌失常是罪魁祸首，而腹部疼痛的真正原因是肾寒和胃寒。如果长期任由这种状况发展，很有可能损伤子宫，弓丨发不孕不育。生活在藏区的藏民，往往给初期之后的女孩冲服大托叶云实。藏医典籍记载，大托叶云实具有温肾、驱寒的功效，适用于肾寒、胃寒症。六味大托叶云实散以大托叶云实为主药，辅以肉桂等数味滋补药材，是治疗女性月经不调，白带异常的良药。六味大托叶云实散原质量标准中，只有应符合散剂项下有关的各项规定，既没有薄层鉴别项，也没有任何含量测定指标。药品质量问题与人类健康紧密相关，如今对药品质量控制的要求也越来越高，然而该制剂质量标准偏低，不能有效保证该制剂的质量，该制剂质量标准亟待提闻。

发明内容
本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种藏药组合物六味大托叶云实制剂的质量检测方法。术语说明六味大托叶云实散是藏药部颁(标准编号WS3-BC-0282-95)记载的药品名称。六味大托叶云实制剂(或叫“六味大托叶云实散及其制剂”)包括六味大托叶云实散及用六味大托叶云实散中原料配方制备的其他制剂，如微丸、滴丸、片剂、胶囊、颗粒、饮片或分散片等，各制剂的原料药的配比可以与六味大托叶云实散相同，也可以根据治疗需要进行适当的调整。为实现上述目的，本发明采用下述技术方案
一种藏药组合物六味大托叶云实制剂的质量检测方法，该制剂为由大托叶云实、石榴子、肉桂、豆蘧、荜茇、红花按药剂学常规方法制成的各种制剂，质量检测方法包括对制剂中大托叶云实、豆蘧的薄层色谱定性鉴别方法，对大托叶云实和石榴子含有的没食子酸、肉桂含有的桂皮醛、荜茇含有的胡椒碱、红花含有的羟基红花黄色素A的液相色谱含量测定方法中的一种或几种。作为本发明之优选，质量检测方法为以下方法中的一种或多种鉴别A.大托叶云实的鉴别其是以大托叶云实对照药材为对照，以体积份数比10 (0. 1-0. 5) :0. I的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂在硅胶G薄层板上展开，以体积份数比10%的硫酸乙醇溶液为显色剂的薄层色谱法； B.豆蘧的鉴别其是以豆蘧对照药材为对照，以体积份数比(9-8) : (1-2)的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂在硅胶G薄层板上展开，以质量体积份数比1%的香草醛硫酸溶液为显色剂的薄层色谱法；C.肉桂的鉴别其是以肉桂对照药材为对照，以体积份数比(6-10):(1-3)的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂在硅胶G薄层板上展开，以质量体积份数比1-5%的香草醛硫酸溶液为显色剂的薄层色谱法；含量测定A.没食子酸的含量测定其是以没食子酸对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比(1-3) : (97-99)的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相，检测波长为275nm的高效液相色谱法；B.桂皮醛的含量测定其是以桂皮醛对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比30-70:30-70的乙腈-水为流动相，检测波长为290nm为高效液相色谱法；C.胡椒碱的含量测定其是以胡椒碱对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比75-80:20-25的甲醇-水为流动相，检测波长为343nm的高效液相色谱法；D.羟基红花黄色素A的含量测定其是以羟基红花黄色素A对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比25-35:65-75的甲醇-体积份数比为1%冰醋酸水溶液为流动相，检测波长为403nm的高效液相色谱法。作为本发明之进一步优选，所述质量检测方法为以下方法中的一种或多种鉴别A.大托叶云实的鉴别取待检测制剂粉末2_4g，加甲醇10_30ml，超声处理20_40分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取大托叶云实对照药材0. 5-lg，同法制备大托叶云实对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2-5 u 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比10 (0. 1-0. 5) :0. I的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积份数比10%的硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。B.豆蘧的鉴别
取待检测制剂粉末l_3g，置IOOml圆底烧瓶中，加水40_80ml，照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取，在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中，再加乙酸乙酯1ml，回流提取1-3小时，冷却至室温，分取乙酸乙酯液作为供试品溶液；另取豆蘧对照药材0. 5-lg,同法制备豆蘧对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5-10 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比(9 8):(1 2)的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量体积份数比1%的香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。C.肉桂鉴别取待检测制剂粉末l_5g，置IOOml圆底烧瓶中，加40_70ml水，照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取，在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中，再加乙酸乙酯l_2ml，回流提取1-3小时，冷却至室温，分取乙酸乙酯液，作为供试品溶液。 取肉桂对照药材0. 5-2g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各5-10 u 1，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以体积份数比(6 10):(1 3)的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量体积份数比1-5%香草醛硫酸溶液,105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定A.没食子酸的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比(1-3): (97-99)的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为275nm ;理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备取没食子酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. Img的溶液，即得；供试品溶液的制备取待检测制剂粉末l_3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5-10 yl，注入液相色谱仪，测定，即得。B.桂皮醛的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比30-70:30-70的乙腈-水为流动相；检测波长为290nm ;理论板数按桂皮醛峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取桂皮醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含35y g的溶液，即得；供试品溶液的制备取待检测制剂粉末l_3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5-lOiU，注入液相色谱仪，测定，SP得。C.胡椒碱的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比75-80:20-25的甲醇-水为流动相；检测波长为343nm ;理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500 ；
对照品溶液的制备取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每Iml含20 Ug的溶液，即得；供试品溶液的制备取待检测制剂粉末2_4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20-30ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5-10 yl，注入液相色谱仪，测定，即得。D.羟基红花黄色素A的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比25-35:65-75的甲醇-体积份数比为1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为403nm ;理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25%甲醇水溶液制成每Iml含0. 13mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取待检测制剂粉末l_3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25%甲醇水溶液20-30ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5-10 yl，注入液相色谱仪，测定，即得。所述制剂原料药组成优选为大托叶云实90重量份、石槽子90重量份、肉桂5重
量份、豆蘧40重量份、荜茇5重量份、红花50重量份。所述制剂为六味大托叶云实散、六味大托叶云实颗粒、六味大托叶云实丸、六味大托叶云实片或六味大托叶云实胶囊。由此可见六味大托叶云实颗粒、六味大托叶云实丸、六味大托叶云实片和六味大托叶云实胶囊与六味大托叶云实散的原料药组成相同，因此可采用相同或相似的质量检测方法。针对上述优选原料药组成或其制剂，所述质量检测方法具体是鉴别A.大托叶云实的鉴别取待检测制剂粉末3g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取大托叶云实对照药材lg，同法制备大托叶云实对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各3 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比10:0. 3:0. I的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积份数比10%的硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。B.豆蘧的鉴别取待检测制剂粉末2g，置IOOml圆底烧瓶中，加水50ml，照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取，在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中，再加乙酸乙酯1ml，回流提取2小时，分取乙酸乙酯液作为供试品溶液；另取豆蘧对照药材lg，同法制备豆蘧对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比8:2的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量体积份数比1%的香草醒硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。C.肉桂的鉴别 取待检测制剂粉末2g，置IOOml圆底烧瓶中，加60ml水，照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取，在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中，再加乙酸乙酯1ml，回流提取I小时，冷却至室温，分取乙酸乙酯液，作为供试品溶液；取肉桂对照药材lg，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以体积份数比(10:2)的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量体积份数比1%香草醛硫酸溶液，105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定A.没食子酸的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比2:98的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为275nm ;理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备取没食子酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. Img的溶液，即得；供试品溶液的制备取待检测制剂粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，测定，即得;本品没食子酸(C7H6O5)含量不得少于2. 32mg/g。B.桂皮醛的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比36:64的乙腈-水为流动相；检测波长为290nm ;理论板数按桂皮醛峰计算应不低于3000 ；
对照品溶液的制备取桂皮醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含35 ii g的溶液，即得；供试品溶液的制备取待检测制剂粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，测定，即得;本品桂皮醛(C9H8O)含量不得少于0. 21mg/g。
C.胡椒碱的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比78:22的甲醇-水为流动相；检测波长为343nm ;理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500 ；对照品溶液的制备取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每Iml含20 Ug的溶液，即得；供试品溶液的制备取待检测制剂粉末3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10 yl，注入液相色谱仪，测定，即得;本品胡椒碱(C17H19NO3)含量不得少于0. 13mg/g。D.羟基红花黄色素A的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比30:70的甲醇-体积份数比为1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为403nm ;理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25%甲醇水溶液制成每Iml含0. 13mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取待检测制剂粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，测定，即得;本品轻基红花黄色素A (C27H3tlO15)含量不得少于I. 15mg/g。经青海省藏医院名誉院长、青海省藏医首席专家尼玛鉴定，本申请中大托叶云实对照药材为豆科植物大托叶云实Caesalpinia crista L.的干燥成熟种子；豆蘧对照药材是姜科植物白豆蘧Amomum kravanh Pierre ex Gagnep.的干燥成熟果实。本说明书中所述的重量份/质量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/L。本发明提供了一种藏药组合物六味大托叶云实散及其制剂中大托叶云实、豆蘧的薄层色谱定性鉴别方法，大托叶云实和石榴子含有的没食子酸、肉桂含有的桂皮醛、荜茇含有的胡椒碱、红花含有的羟基红花黄色素A的液相色谱含量测定方法，全面控制该制剂的质量，使该制剂在治疗疾病的同时，保证了用药的安全有效、质量可控。本发明公开了一种藏药组合物六味大托叶云实散及其制剂的质量检测方法。使用薄层色谱法(TLC法)对六味大托叶云实散中大托叶云实、豆蘧、肉桂进行了定性鉴别，采用高效液相色谱法(HPLC法)对六味大托叶云实散中大托叶云实和石榴子含有的没食子酸、肉桂含有的桂皮醛、荜茇含有的胡椒碱、红花含有的羟基红花黄色素A进行了定量检测。本发明方法建立了该制剂中大托叶云实、豆蘧、肉桂的鉴别方法，没食子酸、桂皮醛、胡椒碱、羟基红花黄色素A等有效成分的含量测定方法，提高了产品质量标准，保证了用药的安全有效、质量可控，使得该制剂能够更加有效地治疗疾病。同时本法还可用于藏药组合物六味大托叶云实散的其他制剂，如六味大托叶云实颗粒、六味大托叶云实丸、六味大托叶云实片、六味大托叶云实胶囊等。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例I :薄层鉴别实验 藏药组合物六味大托叶云实散由青海金诃藏药药业股份有限公司提供。A.大托叶云实的鉴别取藏药组合物六味大托叶云实散粉末3g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；取按处方比例配制缺大托叶云实的阴性对照样品粉末3g，同法制备缺大托叶云实的阴性对照溶液；另取大托叶云实对照药材lg，同法制备大托叶云实对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比10:0. 3:0. I的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积份数比10%的硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。试验结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照没有干扰。结果见图I。分别考察了氯仿-甲醇-冰醋酸、沸程为60-90°C石油醚-丙酮-冰醋酸、沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸等不同展开剂不同体积比例下的色谱分离效果，结果以体积份数比10:0. 1-0. 5:0. I的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂条件下，均有较好的展开效果。其中，以体积份数比10:0. 3:0. I的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂展开效果最好。结果表明，该鉴别方法专属性强，可作为藏药组合物六味大托叶云实散中大托叶云实的薄层鉴别方法。B.豆蘧的鉴别取藏药组合物六味大托叶云实散粉末2g，置IOOml圆底烧瓶中，加水50ml，照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取，在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中，再加乙酸乙酯1ml，回流提取2小时，分取乙酸乙酯液作为供试品溶液；取按处方比例配制缺豆蘧的阴性对照样品粉末2g，同法制备缺豆蘧的阴性对照溶液；另取豆蘧对照药材lg，同法制备豆蘧对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比8:2的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量体积份数比1%的香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。
试验结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照没有干扰。结果见图2。在体积份数比9-8:1-2的沸程为60_90°C石油醚-乙酸乙酯展开剂条件下，均有较好的展开效果。其中，以体积份数比8:2的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂展开效果最好。结果表明，该鉴别方法专属性强，可作为藏药组合物六味大托叶云实散中豆蘧的薄层鉴别方法。C.肉桂的鉴别取藏药组合物六味大托叶云实散粉末2g，研细，置IOOml圆底烧瓶中，加水60ml，照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取，在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中，再加Iml乙酸乙酯，回流提取I小时，冷却至室温，分取乙酸乙酯液，作为供试品溶液。取肉桂对照药材lg，同法制备对照药材溶液。取按处方比例配制的缺肉桂阴性对照品，照供试品制备方法，同法制备阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版 一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5iU，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以体积份数比10:2的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%的香草醛硫酸溶液，105°C加热至斑点显色清晰。试验结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。结果见图3。在体积份数比6-10:1-3的沸程为60-90°C的石油醚-乙酸乙酯展开剂条件下，均有较好的展开效果。其中，以体积比10:2的沸程为60-90°C的石油醚-乙酸乙酯展开剂条件下展开效果最好。结果表明，该鉴别方法专属性强，可作为藏药组合物六味大托叶云实散中肉桂的薄层鉴别方法实验例2 :没食子酸的含量测定实验I.仪器、试药和供试样品仪器1220型安捷伦高效液相色谱仪；岛津AuW220D电子天平。对照品没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所)批号110831-200803。样品六味大托叶云实散(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)，批号分别为20110516、20110517、20110518。2.检测波长的选择取没食子酸对照品溶液，于19(T400nm波长范围内进行扫描，测得其在215nm和275nm波长处有最大吸收，比较相同色谱条件下样品在215nm和275nm波长下的色谱图，结果发现检测波长为275nm的色谱图没食子酸峰与相邻色谱峰达到良好的基线分离，且杂质干扰较少，因此选定275nm为检测波长。3.流动相选择研究发现，以体积份数比1-3:99-97的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相时，没食子酸均能达到很好的色谱分离效果。其中以甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液的体积份数比2:98为流动相最优。4.系统适用性试验在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 yl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，对照品、供试品色谱中没食子酸与其相邻色谱峰的分离度均大于I. 5。结果见图3、图4。5.对照品制备取没食子酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. Img的溶液，即得。6.供试品制备6. I提取方法的考察按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分别超声、回流、振摇处理30分钟。以每克药品中没食子酸的含量为指标确定提取方法。结果见表I。表I提取方法考察试验结果
权利要求
1.一种六味大托叶云实制剂的质量检测方法，该制剂为由大托叶云实、石榴子、肉桂、豆蘧、荜茇、红花按药剂学常规方法制成的各种制剂，其特征是，质量检测方法包括对制剂中大托叶云实、豆蘧、肉桂的薄层色谱定性鉴别方法，对大托叶云实和石榴子含有的没食子酸、肉桂含有的桂皮醛、荜茇含有的胡椒碱、红花含有的羟基红花黄色素A的液相色谱含量测定方法中的一种或几种。
2.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，质量检测方法为以下方法中的一种或多种 鉴别 A.大托叶云实的鉴别其是以大托叶云实对照药材为对照，以体积份数比10(0. 1-0. 5) :0. I的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂在硅胶G薄层板上展开，以体积份数比10%的硫酸乙醇溶液为显色剂的薄层色谱法； B.豆蘧的鉴别其是以豆蘧对照药材为对照，以体积份数比(8-9): (1-2)的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂在硅胶G薄层板上展开，以质量体积份数比1%的香草醛硫酸溶液为显色剂的薄层色谱法； C.肉桂的鉴别其是以肉桂对照药材为对照，以体积份数比(6-10):(1-3)的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂在硅胶G薄层板上展开，以质量体积份数比1-5%的香草醛硫酸溶液为显色剂的薄层色谱法； 含量测定 A.没食子酸的含量测定其是以没食子酸对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比(1-3): (97-99)的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相，检测波长为275nm的高效液相色谱法； B.桂皮醛的含量测定其是以桂皮醛对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充齐U，以体积份数比30-70:30-70的乙腈-水为流动相，检测波长为290nm为高效液相色谱法; C.胡椒碱的含量测定其是以胡椒碱对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充齐U，以体积份数比75-80:20-25的甲醇-水为流动相，检测波长为343nm的高效液相色谱法; D.羟基红花黄色素A的含量测定其是以羟基红花黄色素A对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比25-35:65-75的甲醇-体积份数比为1%冰醋酸水溶液为流动相，检测波长为403nm的高效液相色谱法。
3.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，质量检测方法为以下方法中的一种或多种 鉴别 A.大托叶云实的鉴别 取待检测制剂粉末2-4g，加甲醇10-30ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取大托叶云实对照药材0. 5-lg，同法制备大托叶云实对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-5 u 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比10 (0. 1-0. 5) :0. I的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积份数比10%的硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； B.豆蘧的鉴别 取待检测制剂粉末l_3g，置IOOml圆底烧瓶中，加水40-80ml，照中国药典2010年版一部附录X D上的挥发油测定法甲法提取，在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中，再加乙酸乙酯1ml，回流提取1-3小时，分取乙酸乙酯液作为供试品溶液；另取豆蘧对照药材0.5-lg,同法制备豆蘧对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-10 u 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比(8-9):(1-2)的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量体积份数比1%的香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； C.肉桂鉴别 取待检测制剂粉末l_5g，置IOOml圆底烧瓶中，加40-70ml水，照中国药典2010年版一部附录X D上的挥发油测定法甲法提取，在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中，再加乙酸乙酯l_2ml，回流提取1-3小时，冷却至室温，分取乙酸乙酯液，作为供试品溶液。取肉桂对照药材0. 5-2g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各5-10 yl，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以体积份数比(6 10) : (I 3)的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量体积份数比1-5%香草醛硫酸溶液，105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 含量测定 A.没食子酸的含量测定 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比(1-3): (97-99)的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为275nm ;理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备取没食子酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. Img的溶液，即得； 供试品溶液的制备取待检测制剂粉末l_3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5-10 u 1，注入液相色谱仪，测定，即得； B.桂皮醛的含量测定 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比30-70:30-70的乙腈-水为流动相；检测波长为290nm ;理论板数按桂皮醛峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备取桂皮醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含35y g的溶液，即得； 供试品溶液的制备取待检测制剂粉末l_3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5-10 u 1，注入液相色谱仪，测定，即得； C.胡椒碱的含量测定 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比.75-80:20-25的甲醇-水为流动相；检测波长为343nm ;理论板数按胡椒碱峰计算应不低于.1500 ； 对照品溶液的制备取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每Iml含20 Ug的溶液，即得; 供试品溶液的制备取待检测制剂粉末2-4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20-30ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5-lOyl，注入液相色谱仪，测定，即得； D.羟基红花黄色素A的含量测定 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比.25-35:65-75的甲醇-体积份数比为1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为403nm ;理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25%甲醇水溶液制成每Iml含0. 13mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备取待检测制剂粉末l_3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25%甲醇水溶液20-30ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5-10 u 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
4.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述制剂原料药组成为大托叶云实.90重量份、石榴子90重量份、肉桂5重量份、豆蘧40重量份、荜茇5重量份、红花50重量份。
5.如权利要求4所述的质量检测方法，其特征是，所述制剂为六味大托叶云实散、六味大托叶云实颗粒、六味大托叶云实丸、六味大托叶云实片或六味大托叶云实胶囊。
6.如权利要求4或5所述的质量检测方法，其特征是，所述质量检测方法具体是 鉴别 A.大托叶云实的鉴别 取待检测制剂粉末3g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液 ’另取大托叶云实对照药材lg，同法制备大托叶云实对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比10:0. 3:0. I的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积份数比10%的硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； B.豆蘧的鉴别取待检测制剂粉末2g，置IOOml圆底烧瓶中，加水50ml，照照中国药典2010年版一部附录X D上的挥发油测定法甲法提取，在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中，再加乙酸乙酯1ml，回流提取2小时，分取乙酸乙酯液作为供试品溶液；另取豆蘧对照药材lg，同法制备豆蘧对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比8:2的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量体积份数比1%的香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； C.肉桂的鉴别 取待检测制剂粉末2g，置IOOml圆底烧瓶中，加60ml水，照照中国药典2010年版一部附录X D上的挥发油测定法甲法提取，在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中，再加乙酸乙酯1ml，回流提取I小时，冷却至室温，分取乙酸乙酯液，作为供试品溶液；取肉桂对照药材lg，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以体积份数比(10:2)的沸程为60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量体积份数比1%香草醛硫酸溶液，105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 含量测定 A.没食子酸的含量测定 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比2:98 的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为275nm ;理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备取没食子酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. Img的溶液，即得； 供试品溶液的制备取待检测制剂粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即得； B.桂皮醛的含量测定 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比36:64的乙腈-水为流动相；检测波长为290nm ;理论板数按桂皮醛峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备取桂皮醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含35y g的溶液，即得； 供试品溶液的制备取待检测制剂粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即得； C.胡椒碱的含量测定照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比78:22的甲醇-水为流动相；检测波长为343nm ;理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500 ； 对照品溶液的制备取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每Iml含20 Ug的溶液，即得； 供试品溶液的制备取待检测制剂粉末3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即得； D.羟基红花黄色素A的含量测定 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比30:70的甲醇-体积份数比为1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为403nm ;理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25%甲醇水溶液制成每Iml含0. 13mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备取待检测制剂粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即得。
7.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述没食子酸的含量测定项目中没食子 酸含量不得少于2. 32mg/g，所述桂皮醛的含量测定项目中桂皮醛含量不得少于.0.21mg/g, 所述胡椒碱的含量测定项目中胡椒碱含量不得少于0. 13mg/g，所述羟基红花黄色素A的 含量测定项目中羟基红花黄色素A含量不得少于I. 15mg/g。
全文摘要
本发明公开了一种藏药组合物六味大托叶云实散及其制剂的质量检测方法。使用薄层色谱法(TLC法)对六味大托叶云实散中大托叶云实、豆蔻进行了定性鉴别，采用高效液相色谱法(HPLC法)对六味大托叶云实散中大托叶云实和石榴子含有的没食子酸、肉桂含有的桂皮醛、荜茇含有的胡椒碱、红花含有的羟基红花黄色素A进行了定量检测。本发明方法建立了该制剂中大托叶云实、豆蔻的鉴别方法，没食子酸、桂皮醛、胡椒碱、羟基红花黄色素A等有效成分的含量测定方法，提高了产品质量标准，保证了用药的安全有效、质量可控，使得该制剂能够更加有效地治疗疾病。
文档编号G01N30/90GK102778529SQ20121027981
公开日2012年11月14日 申请日期2012年8月8日 优先权日2012年8月8日
发明者任松鹏, 刘玉芹, 张义智, 李怀平, 高英涵 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司