专利名称：一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法
技术领域：
本发明涉及磷脂双分子层制备领域，且特别涉及一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法。
背景技术：
细胞是生命体的基本生命单元，它是由细胞膜包裹住的，从而能维持其内部结构的稳定性，保证正常的生命活动。细胞膜不单是细胞的物理屏障，也是在细胞生命活动中重要的功能结构组成。细胞膜的主要组成部分是磷脂双分子层、镶嵌蛋白质以及糖被，而磷脂双分子层是细胞膜的基本支架，它对整个细胞的功能实现具有重要的作用。磷脂双分子层是由上下两层磷脂分子组成的，每个磷脂分子由头部和尾巴组成，头部是亲水的，由磷脂和胆碱组成，尾巴是疏水的，由两条碳链组成由于磷脂双分子层在生物细胞结构和功能上的重要作用，并且它具有丰富的相变——液态、胶态，对于某些磷脂还有褶皱态，许多科研工作者对它进行了研究，使用的仪器主要有原子力显微镜、X射线等等。在利用这些仪器对磷脂双分子层进行研究的时候，必须在基底上制备样品，因此如何制备更接近于自然状态下的样品就成为首要解决的问题。磷脂双分子层的褶皱态是介于液态和胶态之间的一种中间态，它可以利用温度的控制来形成。但是，许多仪器并不具有温度控制的功能，因此，我们只有使用其它方法来引导褶皱态。褶皱态的实现方法主要有利用三羟甲基氨基甲烷(Tris)方法，而本发明的方法制备的样品进一步消除了基底对生物样品的影响，因此更接近于自然状态。

发明内容
本发明提出一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，可使制备的生物样品更接近于自然状态，适合生物学的研究，且操作手段简单、成本低廉。为了达到上述目的，本发明提出一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，包括下列步骤提供一基底，所述基底为z 母或其它基底；在所述基底表面制备一层胶态下的第一磷脂双分子层；在所述第一磷脂双分子层上再制备一层第二磷脂双分子层，从而稳定实现其褶皱态。进一步的，所形成的磷脂双分子层褶皱态具有一定周期上下起伏的结构。进一步的，所述胶态下的第一磷脂双分子层利用囊泡融合或其它平面磷脂双分子层制备的方法来实现。进一步的，所述囊泡融合的构建方法包括将溶解于氯仿中的磷脂样品利用氮气吹干,放置在通风橱中20小时。
进一步的,所述囊泡融合的构建方法包括加入500ul的20mM氯化钠溶液,使得磷脂分子溶液浓度达到2mg/ml，并超声振动，直至溶液变清澈。进一步的，所述囊泡融合的构建方法包括在新揭开的云母表面上滴上25ul的2mg/ml磷脂溶液，放置在4°C的环境中16小时。进一步的，所述囊泡融合的构建方法包括将该样品放置于60°C环境中，烘烤40分钟，再缓慢降温至室温。进一步的，所述第二磷脂双分子层的制备方法包括加入25iU的2mg/ml磷脂溶液，放置在4°C的环境中48小时。进一步的，所述第二磷脂双分子层的制备方法包括将该样品升温至60°C，烘烤40分钟，再缓慢降温至室温。
本发明公开了一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其包括利用囊泡融合的方法在云母上制备一层胶态下的磷脂双分子层，在该层新基底上再制备一层磷脂双分子层从而稳定实现其褶皱态。并且该层新基底还可用于其它生物样品的制备，如磷脂双分子层、蛋白质等等。本发明可使制备的生物样品更接近于自然状态，适合生物学的研究，且操作手段简单、成本低廉。


图I所示为本发明较佳实施例的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法流程图。
具体实施例方式为了更了解本发明的技术内容，特举具体实施例并配合所附图式说明如下。本发明介绍了一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其包括利用囊泡融合或其它平面磷脂双分子层制备的方法在云母或其它基底表面制备一层胶态下的磷脂双分子层，在该层新基底上再制备一层磷脂双分子层从而稳定实现其褶皱态。请参考图1，图I所示为本发明较佳实施例的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法流程图。本发明提出一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，包括下列步骤步骤SlOO :提供一基底，所述基底为z 母或其它基底；步骤S200 :在所述基底表面制备一层胶态下的第一磷脂双分子层；步骤S300 :在所述第一磷脂双分子层上再制备一层第二磷脂双分子层，从而稳定实现其褶皱态。根据本发明较佳实施例，所形成的磷脂双分子层褶皱态具有一定周期上下起伏的结构，在本实施例中，利用原子力显微镜在溶液环境中观察到的在该新型基底上制备的磷脂双分子层所实现的褶皱态，样品表面呈以一定周期高低起伏的形貌，周期约为28纳米，起伏为0. 5-0. 7纳米。所述胶态下的第一磷脂双分子层利用囊泡融合或其它平面磷脂双分子层制备的方法来实现。进一步的，所述囊泡融合的构建方法包括先将磷脂粉末利用天平称量后放入小玻璃瓶中，再加入氯仿溶解，使其浓度达到20mg/ml。每次取出50ul溶解于氯仿中的磷脂样品，滴入另外一个玻璃管中，使用氮气吹干，然后放置在通风橱中约20小时，以便残留的氯仿挥发出去。然后加入500ul的20mM氯化钠溶液使其浓度变为2mg/ml，随后将该玻璃管放入超声仪中超声振动，直到溶液变清澈为止，时间大约需要4小时。取25ul的2mg/ml磷脂溶液,将其滴在新揭开的云母表面上,将该样品放置在饱和湿度环境下以避免云母表面的液滴干掉，环境温度为4°C，放置大约16小时后，取出样品，放入烘箱中，缓慢升温到60°C，烘烤大约40分钟，关闭烘箱，缓慢降温，大约2小时后样品可用，值得一提的是，在烘烤的过程中，样品必须一直处于饱和湿度的环境中且样品表面不可暴露于空气中。进一步的，所述第二磷脂双分子层的制备方法包括在第一磷脂双分子层上加入25ul的2mg/ml磷脂溶液，再将该样品放入饱和湿度的环境中，温度控制在4°C左右，让磷脂囊泡在磷脂双分子层上吸附48小时后，取出样品，利用烘箱加热到60°C，烘烤40分钟左右，关闭烘箱，缓慢降温，取出样品，即可得到磷脂双分子层的褶皱态样品。 利用该方法制备的磷脂双分子层新型基底还可用于其它生物样品，如蛋白质、DNA等等，其优点是可让这些生物分子更接近于自然状态。虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明。本发明所属技术领域中具有通常知识者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作各种的更动与润饰。因此，本发明的保护范围当视权利要求书所界定者为准。
权利要求
1.一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，包括下列步骤 提供一基底，所述基底为云母或其它基底； 在所述基底表面制备一层胶态下的第一磷脂双分子层； 在所述第一磷脂双分子层上再制备一层第二磷脂双分子层，从而稳定实现其褶皱态。
2.根据权利要求I所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所形成的磷脂双分子层褶皱态具有一定周期上下起伏的结构。
3.根据权利要求I所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述胶态下的第一磷脂双分子层利用囊泡融合或其它平面磷脂双分子层制备的方法来实现。
4.根据权利要求3所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述囊泡融合的构建方法包括将溶解于氯仿中的磷脂样品利用氮气吹干，放置在通风橱中20小时。
5.根据权利要求3所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述囊泡融合的构建方法包括加入500ul的20mM氯化钠溶液，使得磷脂分子溶液浓度达到2mg/ml，并超声振动，直至溶液变清澈。
6.根据权利要求3所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述囊泡融合的构建方法包括在新揭开的云母表面上滴上25ul的2mg/ml磷脂溶液,放置在4°C的环境中16小时。
7.根据权利要求3所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述囊泡融合的构建方法包括将该样品放置于60°C环境中，烘烤40分钟，再缓慢降温至室温。
8.根据权利要求I所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述第二磷脂双分子层的制备方法包括加入25 ill的2mg/ml磷脂溶液，放置在4°C的环境中48小时。
9.根据权利要求8所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述第二磷脂双分子层的制备方法包括将该样品升温至60°C，烘烤40分钟，再缓慢降温至室温。
全文摘要
本发明公开了一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，包括下列步骤提供一基底，所述基底为云母或其它基底；在所述基底表面制备一层胶态下的第一磷脂双分子层；在所述第一磷脂双分子层上再制备一层第二磷脂双分子层，从而稳定实现其褶皱态。本发明提出的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，该层新基底还可用于其它生物样品的制备，如磷脂双分子层、蛋白质等等。本发明可使制备的生物样品更接近于自然状态，适合生物学的研究，且操作手段简单、成本低廉。
文档编号G01N1/28GK102749239SQ20121023865
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月10日 优先权日2012年7月10日
发明者丹尼尔·恰科夫, 孙洁林, 李林, 沈轶, 胡钧, 邵志峰 申请人:上海交通大学