专利名称：C18高效液相色谱柱的填充方法
技术领域：
本发明涉及色谱柱的装填方法领域，具体说是一种C18高效液相色谱柱的装填方法。
背景技术：
色谱柱是液相色谱的主要部件，而色谱柱的填充方法，对确定的固定相又是实现色谱柱的高效能，良好的色谱峰对称性及渗透性良好的关键技术。装填液相色谱柱的方法有干法和湿法两种。当固定相的粒径大于20微米时，一般采用干法填充。而对目前常用的粒径为3 10微米的固定相，则采用湿法装填。湿法也称为匀浆法。依据制作匀浆时所用的溶剂不同，湿装法可分为粘度法，非平衡密度法和平衡密度法三种，顶替液多采用低沸点的正己烷或甲醇。用前两种方法装填的色谱柱紧密度或均匀度不够理想。平衡密度法制备匀浆时，多采用卤代烃，如碘甲烷、四溴乙烷、四氯乙烯、四氯化碳等溶剂。这些溶剂有毒性，而且易在固定相上产生不可逆吸附等缺欠。

发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种C18高效色谱柱分离效能(理论塔板数)
和色谱峰对称性的操作简便，花费低廉，适合于实验室使用的填充方法。 本发明通过下述技术方案解决其技术问题 —种C18高效液相色谱柱的填充方法，按下述步骤进行 a.制备匀浆液 取环己醇和三氯甲烷以9 : 11 13 : 7的体积比混合，加入粒径为5um的C18硅胶制备成浓度为14. 5%的匀浆液，将溶液充分搅拌混合，在超声波振荡器中振荡5 10分钟，匀浆呈无色透明液体；
b.制备顶替液 采用甲醇和异丙醇以l : 1的体积比混合作为顶替液；
c.装柱 把制备的匀浆液倒入已连接好色谱柱管的匀浆罐中；将顶替液加入到顶替罐中，
开动装柱机，在6000psi压力下，将顶替液输入匀浆罐中，经匀浆罐进入到色谱柱中，待色
谱柱中流出顶替液70ml 100ml为止，关闭装柱机，停止加压，至系统压力降至常压时，静
置20 40分钟，卸下色谱柱； d.对装填的色谱柱进行评价。 本发明方法简便、成本低、易操作、装填紧密、均匀、柱效高、色谱峰对称性好，适用于分析型和制备型液相色谱柱的填充。 表一 含碳量为20. 9%的C18柱填料装填的色谱柱性能评价结果
3
升/分，
分，检邻
峰号保留时间名称理论塔板数峰拖尾因子
14.888苯647721. 09
26. 162甲苯688061. 06
37. 282萘703241. 02
49. 384联苯716301.00
514. 428蒽758680. 99
色谱条件色谱柱，250咖*4. 6mm ;流动相，甲醇水= 金测器，254 。 表二 含碳量为13. 5%的C18柱填料装填的色谱柱性85 : 15(V/V);流速，l.O 能评价结果。
峰号保留时间名称理论塔板数峰拖尾因子
14. 741苯705911. 04
25. 745甲苯736121.02
36. 547萘742550. 99
48.205联苯765200.%
510. 944蒽756060.93
色谱条件色谱柱，250咖*4. 6mm ;流动相，甲醇水=85 : 15 ;流速，1. 0毫升
J器uv254 。
表三含碳量为17. 3%的C18柱填料装填的色谱柱性能评价结果。
峰号保留时间 名称
理论塔板数
峰拖尾因子 色谱条件色谱柱，250咖*4. 6mm ;流动相，甲醇水=85 : 15 ;流速，1. 0晕升/
分，检测器，254 。


图1是含碳量为20. 9%的C18柱填料装填的色谱柱性能评价结果色谱图。
图2是含碳量为13. 5%的C18柱填料装填的色谱柱性能评价结果色谱图。
图3是含碳量为17. 3%的C18柱填料装填的色谱柱性能评价结果色谱图。
4
1 4.874 2 6.062
3 7.057
4 9.001
5 12.738
72044 73168 74344 75949 76868
1. 04 1. 03 1. 01 0. 97 0. 95
苯苯
苯甲萘联惠
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。
实施例1 含碳量20. 9%的C18柱填料的装填 1.制备匀浆液取9ml环己醇和11ml三氯甲烷各充分搅拌混合，加入2. 9g粒径
为5ym的C18硅胶键合固定相，配置20ml的匀浆液，在超声波振荡器中震荡5分钟，匀浆
呈无色透明液体。 2.制备顶替液 取甲醇和异丙醇各100ml混合，配置200ml顶替液。 3.装柱把制备好的匀桨迅速倒入已连接好色谱柱管250mm*4. 6mm的匀桨罐中， 再与装柱机连接。 4.开动装柱机在6000psi压力下，将顶替液通过匀浆罐输入到色谱柱中，待色谱 柱中流出的顶替液体积约80毫升为止，关闭装柱机，停止加压，系统压力降至常压时，静置 30分钟后，卸下色谱柱进行评价。
5.对装填的色谱柱进行评价 评价的色谱条件及评价结果见表一说明，色谱图见图一。表明用本发明技术装柱 的色谱柱有高的柱效，理论塔板数为6. 4772万 7. 5868万/米，色谱峰的对称性好，拖尾 因子为0. 99 1. 09，显示出自装柱有很好的色谱性能。
实施例2 含碳量13. 5%的C18柱填料的装填 1.制备匀浆液取13ml环己醇和7ml三氯甲烷充分搅拌混合，加入2. 9g粒径为
5 m的C18硅胶键合固定相，配置20毫升的匀浆液，在超声波振荡器中震荡5分钟，匀浆呈
无色透明液体。 2.制备顶替液 取甲醇和异丙醇各100ml混合，配置200毫升顶替液； 3.装柱把制备好的匀桨迅速倒入已连接好色谱柱管250mm*4. 6mm的匀桨罐中， 再与装柱机连接。 4.开动装柱机在6000psi压力下，将顶替液通过匀浆罐输入到色谱柱中，待色谱 柱中流出的顶替液体积约80毫升为止，关闭装柱机，停止加压，系统压力降至常压时，静置 30分钟后，卸下色谱柱进行评价。
5.对装填的色谱柱进行评价 评价条件及评价结果见表二说明，色谱图见图二。表明装填的色谱柱有很好的色 谱性能。理论塔板数为7. 0591万 7. 6520万/米，色谱峰的拖尾因子在0. 93 1. 04之 间。 实施例3 含碳量17. 3%的C18柱填料的装填 1.制备匀浆液将环己醇和三氯甲烷各取10ml充分搅拌混合，加入2. 9g粒径为 5 m的C18硅胶键合固定相，配置20毫升的匀浆液，在超声波振荡器中震荡5分钟，匀浆呈无色透明液体。 2.制备顶替液 取甲醇和异丙醇各100ml混合，配置200毫升顶替液； 3.装柱把制备好的匀桨迅速倒入已连接好色谱柱管250mm*4. 6mm的匀桨罐中， 再与装柱机连接。 4.开动装柱机在6000psi压力下，将顶替液通过匀浆罐输入到色谱柱中，待色谱 柱中流出的顶替液体积约80毫升为止，关闭装柱机，停止加压，系统压力降至常压时，静置 30分钟后，卸下色谱柱进行评价。
5.对装填的色谱柱进行评价 评价条件及评价结果见表三说明，色谱图见图三。表明装填的色谱柱有很好的色 谱性能。理论塔板数为7. 2044万 7. 6868万/米，色谱峰的拖尾因子在0. 95 1. 04之 间。
权利要求
一种C18高效液相色谱柱的填充方法，其特征在于按下述方法制备a.制备匀浆液取环己醇和三氯甲烷以9∶11～13∶7的体积比混合，加入粒径为5μm的C18硅胶制备成浓度为14.5％的匀浆液，将溶液充分搅拌混合，在超声波振荡器中振荡5～10分钟，匀浆呈无色透明液体；b.制备顶替液采用甲醇和异丙醇以1∶1的体积比混合作为顶替液；c.装柱把制备的匀浆液倒入已连接好色谱柱管的匀浆罐中；将顶替液加入到顶替罐中，开动装柱机，在6000psi压力下，将顶替液输入匀浆罐中，经匀浆罐进入到色谱柱中，待色谱柱中流出顶替液70ml～100ml为止，关闭装柱机，停止加压，至系统压力降至常压时，静置20～40分钟，卸下色谱柱；d.对装填的色谱柱进行评价。
2. 根据权利要求1所述的C18高效液相色谱柱的填充方法，其特征在于C18柱填料的碳含量为20.9%时，所述环己醇与三氯甲烷的配比为9 : 11V/V。
3. 根据权利要求1所述的C18高效液相色谱柱的填充方法，其特征在于C18柱填料的碳含量为17.3%时，所述环己醇与三氯甲烷的配比为10 : 10V/V。
4. 根据权利要求1所述C18高效液相色谱柱的填充方法，其特征在于C18柱填料的碳含量为13.5%时，所述环己醇与三氯甲烷的配比为13 : 7V/V。
5. 根据权利要求1所述C18高效液相色谱柱的填充方法，其特征在于所述c步骤中色谱柱流出顶替液80ml毫升为止，关闭装柱机，停止加压，至系统压力降至常压时，静置30分钟，卸下色谱柱进行评价。
全文摘要
C18高效液相色谱柱的填充方法，取环己醇和三氯甲烷以9∶11～13∶7的体积比混合，加入粒径为5μm的C18硅胶制备成浓度为14.5％的匀浆液，将溶液充分搅拌混合，在超声波振荡器中振荡5～10分钟，匀浆液呈无色透明液体；甲醇和异丙醇以1∶1混合作为顶替液；把制备的匀浆液倒入已连接好色谱柱管的匀浆罐中；将顶替液加入到顶替罐中，开动装柱机，在6000psi压力下，将顶替液输入匀浆罐中，经匀浆罐进入到色谱柱中，待色谱柱中流出顶替液70ml～100ml为止，关闭装柱机，停止加压，至系统压力降至常压时，静置20～40分钟，卸下色谱柱。本发明方法简便、成本低、易操作、装填紧密、均匀、柱效高、色谱峰对称性好，适用于分析型和制备型液相色谱柱的填充。
文档编号G01N30/56GK101776668SQ20101012504
公开日2010年7月14日 申请日期2010年3月13日 优先权日2010年3月13日
发明者保英明, 刘建滨, 常舜平, 陈健 申请人:兰州中科安泰分析科技有限责任公司