专利名称：用对流免疫电泳法、琼脂双扩散法和环状沉淀法鉴别牛肉和马肉的制作方法
用对流免疫电泳法、琼脂双扩散法和环状沉淀法鉴别牛肉和马肉，是把免疫学技术应用于食品检验，对生牛肉和马肉进行鉴别检验。食品检验不但包括生肉理化检验、卫生检验等，各种生肉的鉴别也是其重要检验内容之一。
以上三种方法都具有免疫反应特异性强的特点，所以它们都能特异准确鉴别出牛肉和马肉，鉴别率为100%。另外以上三种方法都较快速，环状沉淀法只需5分钟即可判定结果，对流免疫电泳法45分钟可判定结果。这三种方法用时短，操作简便，不需特殊的仪器设备。是市场上进行牛马肉大批鉴别检验的行之有效的方法。经国内外专利文献检索这三种方法用于牛肉和马肉鉴别目前尚无报导。
用对流免疫电泳法，琼脂双扩散法和环状沉淀法鉴别牛肉和马肉，是为了解决市场上牛肉和马肉鉴别检验问题。目前市场上用马肉代替牛肉或者在牛肉中混入马肉出售给消费者的现象时有发生，检疫部门用这三种方法在市场上大批量鉴别牛肉和马肉，可做到准确、快速、方便，维护消费者利益。
目前市场上牛肉和马肉的鉴别检验只是通过眼观鉴别，这种鉴别方法客观性和准确性都很差，并且对搅碎的牛肉和马肉混合物根本无法鉴别。实验室鉴别牛肉和马肉的方法是通过对糖原含量测定的方法来鉴别的这种方法操作烦琐，费时长，并且准确性和客观性也很差，因为随着生肉放置时间不同，肉中糖原的含量也发生相应的变化。而用对流免疫电泳法，琼脂双扩散法和环状沉淀法鉴别牛肉和马肉可以克服以上两种方法的不足。这三种鉴别检验方法可以特异、准确、快速和简便地进行大批量的牛肉和马肉的鉴别检验。
用对流免疫电泳法、琼脂双扩散法和环状沉淀法鉴别牛肉和马肉主要过程如下分别取牛肉和马肉样品，对其具有抗原性的成分进行分析，确定其各自具有特异性的抗原成分，并且分别提取出牛肉和马肉各自的特异性抗原。用提取出的牛肉和马肉特异性抗原分别多次强化免疫家兔，制备出抗牛肉和马肉的特异性抗血清，并对制备出的抗血清进行效价测定和特异性鉴定。各格者保存于-20℃冰箱中备用。
收集牛肉和马肉样品，每份样品取5克，剪碎，加5ml生理盐水匀后取上清，或取出生肉的浸出液做为待检样品。
用所制备的抗牛肉和抗马肉的特异性抗血清，应用对流免疫电泳法，琼脂双扩散法和环状沉淀法分别对待检肉样进行鉴别检验。其操作过程分别为对流免疫电泳法制备1%琼脂凝胶板，板厚3mm，以孔距3mm，孔径3mm在琼脂凝胶板上打孔，将打孔的凝胶板放在电泳槽上，架上电桥，然后在正极端加上抗血清，在负极端加上待检肉样，并用标准的牛肉马肉样品作对照。在5v/cm条件下电泳45分钟，电泳结束后观察结果。
其结果判定为在加抗牛肉抗血清孔和肉样之间出现沉淀线，则待检肉样为牛肉;加抗马肉抗血清孔和肉样孔之间出现沉淀线，则待检肉样为马肉;如果在抗牛肉抗血清、抗马肉抗血清和待检肉样孔之间均出现沉淀线，则待检肉为牛肉和马肉的混合物。
琼脂双扩散法制备1%琼脂凝胶板，板厚3mm，以3mm为孔距、孔径3mm打成梅花孔。然后在中心孔加入抗血清，在周边孔加入待检肉样。将加完样品的琼脂凝胶板放入湿盒中，在室温条件下放置24小时，然后观察结果。
结果判定同对流免疫电泳法。
环状沉淀法
用直径1-2mm，长4cm的玻璃管作为环状沉淀反应管，先加入抗血清，大约加到管长的一半，上一半加入待检肉样，垂直室温放置5分钟。然后观察在抗血清和待检肉样的交界是否出现沉淀环。
结果判定与对流免疫电泳法相同。
权利要求
对流免疫电泳法、琼脂双扩散法和环状沉淀法应用于食品检验，以准确、快速、方便地鉴别出牛肉和马肉，其特征是从牛肉和马肉样品中提取出各自的特征性抗原，用此抗原免疫家兔，分别制备抗牛肉和马肉的特异性抗血清，用此抗血清做为鉴别试剂。
全文摘要
对流免疫电泳法、琼脂双扩散法和环状沉淀法鉴别牛肉和马肉是食品检验领域的技术，它可解决目前市场上急需解决的牛肉和马肉鉴别检验的问题。从牛肉和马肉中分别提取出各自特异性抗原，免疫家兔制备出抗血清。用此抗血清应用上述三种方法分别对牛肉和马肉样品进行鉴别检验。结果表明，以上三种方法均具有特异、准确、快速和简便的特点，可用于市场上牛肉和马肉的大批量的鉴别检验。
文档编号G01N33/561GK1052949SQ89109668
公开日1991年7月10日 申请日期1989年12月27日 优先权日1989年12月27日
发明者李景鹏, 王君伟, 宣世纬 申请人:东北农学院