专利名称：一种胰岛素检测试剂盒及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人胰岛素的检测试剂盒。
背景技术：
胰岛素是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄 糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的ー种蛋白质激素。胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。外源性胰岛素主要用来治疗糖尿病，胰岛素注射不会有成瘾和依赖性。胰岛素检查，可以判定糖尿病患者是I型患者还是2型患者。主要适合于没有使用胰岛素治疗的患者，可在空腹及餐后2小时抽血进行測定，而餐后水平应比空腹高出4 5倍。如果胰岛素水平明显降低，就称之为绝对缺乏，可见于I型糖尿病；如果并没有明显減少，而表现为血糖升高，就称为相对缺乏，是因为胰岛素发挥作用的环节出现故障，常见于存在胰岛素抵抗的2型糖尿病。血清胰岛素检测，包括空腹和餐后胰岛素分泌水平检测。一般常与糖耐量试验(OGTT)同步进行检测。通过检测血清胰岛素水平，可以更清楚地了解糖尿病病情的严重程度，并有助于判别预后，制定相应的治疗方案。几种病情类型
首先是胰岛素抵抗型(分泌增高型)，表现为空腹胰岛素水平正常和高于正常，进食后胰岛素峰值明显高于正常。表明胰岛素分泌功能正常和偏高，提示体内存在胰岛素抵抗。此型多见于肥胖的糖尿病人。治疗主要以平衡饮食或增加运动量为主，不用药或仅用胰岛素增敏剂即可，以最大限度减轻胰岛负担，有利血糖长期稳定的控制。其次是胰岛素释放障碍型，表现为胰岛素反应曲线呈迟缓上升，高峰后移，病人多为消瘦或40岁以上的中年人，胰岛病变大多轻微，为β细胞功能障碍型，此型病人除平衡饮食和増加运动量外，应用胰岛素增敏剂为主，适当加用刺激胰岛分泌胰岛素的药物，可以改善胰岛素高峰时间，使胰岛素释放趋于正常。再次是胰岛素分泌缺乏型，多见于青少年或2型糖尿病后期，胰岛素分泌曲线低下，应接受胰岛素治疗，在治疗中还应适时进行血胰岛素分泌水平測定，以监护病情发展。另外，还可表现为胰岛素缺乏和胰岛素抵抗同时存在，多见于2型糖尿病中后期，此类病人早期虽是胰岛素抵抗，但却长期应用刺激胰岛素的药物，致使胰岛素功能逐步衰竭，最終可导致体内胰岛素的缺乏。此类病人应加用胰岛素增敏剂或α-葡萄糖苷酶抑制齐U，以减轻胰岛负担，待血糖控制后，再逐步減少刺激胰岛产生胰岛素的药物。胰岛素测定方法很多，包括免疫电泳法、补体结合法、凝结试验法、免疫沉淀法、凝胶过滤法和放射免疫法。这些方法具有操作繁琐、耗时长、过度浪费资源的缺点，不适于常规检验
发明内容
本发明的目的是提供一种胰岛素的检测试剂盒。该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上，结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大規模推广。本发明的另一目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。为实现上述目的，本发明提供的试剂盒组成为
试剂Rl :缓冲液、聚こニ醇、叠氮钠、こニ胺四こ酸钠、牛血清白蛋白；
试剂R2:缓冲液、结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、こニ胺四こ酸钠、牛血清白蛋白。本发明提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下
(a)按下列比例配制好试剂 试剂Rl
Tris 缓冲液 200-220mmol/L聚こニ醇5-10 mmol /I,
叠氮钠1-5 mmol/L
こニ胺四こ酸钠l_5mmol/L牛血清白蛋白 l-5mmol/L ;
试剂R2
Tris 缓冲液 200-220mmol/L
结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子 3.5-5% (v/v)
吐温-20l-5mmol/L
叠氮钠O. 5-3 mmol/L
こニ胺四こ酸钠l_5mmol/L牛血清白蛋白 l-5mmol/L ;
(b)将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；
(c)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；
Cd)根据吸光度变化值计算出样本中胰岛素的浓度。
具体实施例方式下述实施例是为了更详细的解释本发明，但不应理解为本发明局限于此。实施例I :
本发明的试剂盒举例是双试剂，其中
试剂Rl
Tris 缓冲液 200mmol/L聚こニ醇8 mmol /I,
叠氮钠5 mmol/L
こニ胺四こ酸钠5mmol/L牛血清白蛋白 5mmol/L ;
试剂R2
Tris 缓冲液 200mmol/L
结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子 5% (v/v)吐温 _20Smmol /I,
叠氮钠3 mmol/L
こニ胺四こ酸钠5mmol/L牛血清白蛋白 5mmol/L。实施例2 :试剂盒使用方法
I.试剂准备，试剂为液体双试剂，开瓶即用，其中 试剂Rl
Tris 缓冲液 200mmol/L聚こニ醇8 mmol /I,
叠氮钠5 mmol/L
こニ胺四こ酸钠5mmol/L牛血清白蛋白 5mmol/L ;
试剂R2
Tris 缓冲液 200mmol/L
结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子 5% (v/v)
吐温 _20Smmol /I,
叠氮钠3 mmol/L
こニ胺四こ酸钠5mmol/L牛血清白蛋白 5mmol/L。2.全自动生化仪參数设置
(a)检测温度37°C
(b)检测波长主波长为600nm；
(c)反应时间10分钟。3.检测步骤(全部在全自动生化分析仪中完成)
(a)取120μ L试剂I和15 μ L血清样本混匀；
(b)将混匀后的溶液在37°C温育5分钟；
(c)再添加60μ L试剂2，反应30秒后，读取吸光度Al，再孵育270秒后，读取吸光度
Α2 ；
(d)计算ΛA= Α2 - Al。4.通过吸光度变化值计算出胰岛素的浓度。本发明具有的优点
该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。所需检测仪器(生化分析仪)在各大医院和检测中心普遍使用。
权利要求
1.一种胰岛素检测试剂盒，其组成为试剂R1、试剂R2，其中 a、试剂Rl 包括200-220mmol/L Tris 缓冲液、5-10 mmol/L 聚乙二醇、1_5 mmol/L 叠氮钠、l-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、l_5mmol/L牛血清白蛋白； b、试剂R2200-220mmol/L Tris缓冲液、结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子、l_5mmol/L 吐温 _20、0. 5-3 mmol/L 叠氣纳、l_5mmol/L 乙二胺四乙酸纳、l-5mmol/L 牛血清白蛋白。
2.权利要求I的试剂盒，其特征在于试剂R2中的胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子的制备方法为10. 5mg/ml的胰岛素单克隆抗体与10%的乳胶颗粒(直径50_100nm),加入到200-220mmol/L Tris缓冲液中，震荡反应4小时，离心去上清，再用200-220mmol/L Tris缓冲液稀释至O. 5%，并加入O. 1-0. 3 mmol/L叠氮钠。
3.上述试剂盒的制备和操作方法，主要步骤为 (a)按下列比例配制好试剂 试剂Rl Tris 缓冲液 200-220mmol/L 聚乙二醇5-10 mmol /I, 叠氮钠1-5 mmol/L 乙二胺四乙酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l-5mmol/L ; 试剂R2 Tris 缓冲液 200-220mmol/L 结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子 3.5-5% (v/v) 吐温-20l-5mmol/L 叠氮钠0. 5-3 mmol/L 乙二胺四乙酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l-5mmol/L ; (b)将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应； (c)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值； Cd)根据吸光度变化值计算出样本中胰岛素的浓度。
4.权利要求3的方法，其特征在于，被测样品与试剂比例应控制在I: 10到I :15之间。
5.权利要求3的方法，其特征在于，反应温度为37(±1) °C。
6.权利要求3的方法，其特征在于，反应时间为10分钟。
7.权利要求3的方法，其特征在于，用半/全自动生化分析仪检测的波长为600nm。
全文摘要
一种胰岛素的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括试剂R1缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；试剂R2缓冲液、结合有胰岛素单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长600nm处吸光度变化的速度，从而测算出胰岛素的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。
文档编号G01N33/577GK102818902SQ20121029164
公开日2012年12月12日 申请日期2012年8月16日 优先权日2012年8月16日
发明者谢兵 申请人:北京恩济和生物科技有限公司