专利名称：单克隆抗体免疫层析一步法半定量检测吗啡的方法及试纸的制作方法
技术领域：
本发明公开了一种单克隆抗体免疫层析一步法半定量检测吗啡的方法及试纸。
对吸毒者体液中吗啡的检测方法可分三大类，即化学显色分析(如AC法等)、色谱分析(如薄层色谱、气-质联用等)和免疫分析(如放射免疫法、免疫层析法等)。免疫层析一步法是九十年代初由美国学者建立的，该法以其样品不需预处理，简便快速，适宜现场检测等特点，在毒品检测工作中发挥着很重要的作用。但是该法只能定性，不能定量；且其质量控制系统为另一套抗原抗体，不能真实地反映检测系统的反应情况；另外，其反应模式表现为阳性在检测区不显色，阴性为显色，此种反应模式不符合通常判定结果的思维定势。
本发明的目的在于克服上述技术之不足而提供一种特异性强，灵敏度高，结构简单，操作使用方便，能初步定量检测的单克隆抗体免疫层析一步法半定量检测吗啡的方法及试纸。
本发明的主要目的是这样实现的通过待检液中吗啡和标记在胶体金表面的吗啡与精确定量呈横条状点定于层析膜上的吗啡单克隆抗体发生竞争性结合，而显示于层析膜上的条纹数量，以确定待检液中吗啡的含量，条纹数越多，待检液中吗啡含量越高。
本发明的另一目的是这样实现的试纸由免疫层析复合膜、抗原标记胶体金、底板、吸水纸组成，底板、免疫层析复合膜依次叠置，胶体金处于底板的一端并与复合膜接触，复合膜中的背衬膜为高分子材料制成的透明膜，层析膜为对蛋白质具有良好吸附力、具良好浸润性、具一定微孔径的高分子材料制成。
本发明的实施例简述如下一、标记胶体金的制备取1％氯金酸1ml用双蒸馏水稀释至100ml，在煮沸状态下加一定量的还原剂，制成胶体金。在PH值为7-8.2的条件下用吗啡-6-O-半琥珀酰-牛血清白蛋白(Mor-BSA)对胶体金进行标记，再用高速离心法进行纯化，精确定量滴注于玻璃纤维上冷冻干燥备用。
二、免疫层析专用高分子复合膜制备首先用一种高分子材料制成透明背衬膜，在背衬膜上覆盖一层对蛋白质结合力强，浸润性能好的具有一定孔径的层析膜。背衬膜的作用是阻止胶粘合剂中的有机溶剂对层析膜上蛋白质的破坏。
三、层析膜的点样方法将一定浓度的吗啡单克隆抗体精确定量，以一定间距呈横条状点定于层析膜上，供检测用。
四、主要技术指标1特异性仅对吗啡类物质起反应；2、灵敏度0.3微克吗啡/毫升标本；3、半定量范围≥0.3微克～＞1.2微克；4、快速10分钟内观察结果；5、简便任何人按说明书即可操作；6、不受环境因素影响。
五、试纸的应用1、对阴性标本的检测将三滴待测尿滴入加样孔，平放5分钟后观察结果，只有一条色带为阴性。
2、阳性标本的检测将三滴待测尿滴入加样孔，平放5分钟后观察结果，有两条以上色带为阳性(≥0.3微克/ml)，三条色带为0.8微克/ml左右，四条色带为≥1.2微克/ml。
3、交叉反应试纸与海洛因和可待因有交叉反应，强度与吗啡相似；与美沙酮、纳洛酮、丁丙诺啡、度冷丁、二氢埃托啡、芬太尼、地芬诺酯、可卡因、安非他明、东茛若碱、麻黄碱、氟哌啶醇、氯丙嗪、强痛定、异丙嗪、苯巴比妥钠、安定、洛非西定、安眠酮、去痛片、可乐定、安坦、咖啡因、咳必清、阿普唑仑、氯氮平均无交叉反应。
六、试纸反应原理冻于胶体金上标记有吗啡抗原，高分子复合膜上固定有吗啡单克隆抗体。当被检尿液中无吗啡时，尿液稀释抗原标记胶体金并推动其在复合膜上泳动，当遇到第一条吗啡单抗时，胶体金上的吗啡抗原就会完全与之发生反应，形成一条肉眼可见的紫色带。当被测尿液中有吗啡存在时，尿液中的吗啡就会和胶体金上的吗啡竞争性地与第一条吗啡单抗结合，使得吗啡抗记的胶体金不能完全被第一条单抗拦截，只能继续往前泳动，与第二条单抗带反应而显示两条色带。同理，尿中吗啡含量多，显色带条数也就越多，因而能对吗啡进行半定量检测。
综上所述，本发明特异性强，灵敏度高，结构简单，操作使用方便，能有效检测出待检测液中毒品的大致含量，适应于政法机关、戒毒治疗机构、医院、用人单位、吸毒者家属等作为毒品检测的工具。
权利要求
1.一种免疫层析一步法半定量检测吗啡的方法，其特征在于待检液中吗啡和标记在胶体金表面的吗啡与精确定量呈横条状点定于层析膜上的吗啡单克隆抗体发生竞争性结合，而显示于层析膜上的条纹数量，以确定待检液中吗啡的含量，条纹数越多，待检液中吗啡含量越高。
2.一种免疫层析一步法半定量检测吗啡的试纸，包括免疫层析复合膜、抗原标记胶体金、底板、吸水纸，其特征在于底板、免疫层析复合膜依次叠置，胶体金处于底板的一端并与复合膜接触，层析膜为对蛋白质具有良好的的吸附力，具良好的浸润性，具一定微孔径的高分子材料制成。
全文摘要
一种免疫层析一步法半定量检测吗啡的方法及试纸,其方法为于待检液中吗啡和标记在胶体金表面的吗啡与精确定量呈横条状点定于层析膜上的吗啡单克隆抗体发生竞争性结合,而显示于层析膜上的条纹数量,以确定待检液中吗啡的含量,条纹数越多,待检液中吗啡含量越高。试纸的底板、免疫层析复合膜依次叠置,胶体金处于底板的一端并与复合膜接触,层析膜为对蛋白质具有良好的吸附力,具良好的浸润性,具一定微孔径的高分子材料制成。
文档编号G01N33/50GK1259668SQ9811272
公开日2000年7月12日 申请日期1998年11月10日 优先权日1998年11月10日
发明者张慧, 唐江萍, 刘跃曾, 樊旭辉 申请人:长沙市精神病医院