专利名称：一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法。
背景技术：
三職类(triterpenoids)化合物是一类基本母核由30个碳原子组成的,在生源关系上由鲨烯(squalene)衍生而来的萜类化合物，在植物中分布广泛，具有广泛的药理活性，具有溶血、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、降低胆固醇、杀软体动物、抗生育等活性。白桦脂醇、白桦脂酸和齐墩果酸均是重要的三萜化合物。白桦脂醇(Betulin)，又名桦木脑，属于羽扇豆烷型的五环三萜类化合物，分子式为C30H50O2,相对分子质量442.72，白色针晶，熔点256 257 V，溶于乙醇、氯仿和苯，微溶于冷水、石油醚等，存在于多种植物中，尤其在白桦树皮中的含量较高。白桦脂醇具有重要的药理作用，实验表明，白桦脂醇及其衍生物作为生物抑制剂在HIV和癌症治疗方面表现出了巨大的潜能。同时，白桦脂醇具有消炎、抗病毒、抗氧化、抑制头发纤维中蛋白质溶解、改善受损头发光泽、促进头发生长等活性，可应用于食品、化妆品及医药等行业。此外，白桦脂醇作为白桦脂酸的前体，可以用来人工合成其衍生物。
权利要求
1.一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于上述方法包括以下步骤: 一、白桦树皮提取液的制备:将白桦树皮在超低温条件下，以26 30Hz频率研磨I 3min，研磨后得到的粉末在80°C烘箱中烘干，向烘干得到的白桦树皮粉末中加入无水乙醇，超声提取55 65min，取上清液用有机滤膜过滤，即得到白桦树皮提取液，其中所述的烘干后的白桦树皮粉末和无水乙醇的质量与体积比为(0.5 2.0) g =IOOmL ； 二、将白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的标准品分别用无水乙醇配制成7种标准工作液； 三、将标准工作液与步骤一中得到的白桦树皮提取液依次注入高效液相色谱仪，以体积百分含量0.1 %磷酸水溶液为水相，乙腈为有机相进行梯度洗脱； 其中，高效液相色谱条件为: 色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18色谱柱，规格为4.6.ιΧ250πιπιΧ5μπι，柱温为30°C，流动相中有机相为乙腈，水相为体积百分含量为0.1%磷酸水溶液，流速0.5 1.2mL/min,检测波长195nm，进样量IOyL; 四、以标准工作液目标峰峰面积和相应物质浓度建立标准曲线，根据相应峰的保留时间和光谱图确定目标峰，采用外标法定量计算白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸含量，即完成检测。
2.根据权利要求1中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤一中所述的超低温为在液氮条件下研磨白桦树皮。
3.根据权利要求2中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤一中所述的以28Hz频率研磨2min。
4.根据权利要求3中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤一中所述的采用超声波提取，是以无水乙醇为提取液，在超声波频率40kHz，功率100W，水温48 52°C环境中，提取55 65min。
5.根据权利要求4中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤一中所述的采用超声波提取，是以无水乙醇为提取液，在超声波频率40kHz，功率100W，水温50°C环境中，提取60min。
6.根据权利要求5中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤一中所述的用有机滤膜过滤是采用0.45 μ m孔径的有机滤膜。
7.根据权利要求6中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤一中所述的烘干后的白桦树皮粉末和无水乙醇的质量与体积比为Ig:IOOmL0
8.根据权利要求7所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤二中所述的7种标准工作液白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的浓度分另1J 为:a、2.5 μ g/mL、25 μ g/mL 和 10 μ g/mL ;b、5 μ g/mL、50 μ g/mL 和 20 μ g/mL ;c、10 μ g/mL、100ug/mL 和 40 μ g/mL ;d、20 μ g/mL、200 μ g/mL 和 80 μ g/mL ;e、50 μ g/mL、500 μ g/mL 和 200 μ g/mL ;f、100 μ g/mL、1000 μ g/mL 和 400 μ g/mL ;g、150 μ g/mL、1500 μ g/mL 和600 μ g/mLο
9.根据权利要求8中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤三中所述的梯度洗脱过程中有机相的浓度变化为线性结合“J”型和反“J”型曲线。
10.根据权利要求9所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤三中的流动相中乙腈的体积百分含量依次为55% 80%、80% 90%，、90% 100%、100% 55%。 ·
全文摘要
一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，涉及一种白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法。本发明是要解决现有方法不能完全分离三种物质、检测结果不准确的问题。该方法按以下步骤进行一、利用超声波辅助技术提取白桦树皮提取液，二、采用反相高效液相色谱法，对三种物质进行定性定量分析。该方法对三种三萜类物质提取工艺简单，容易实施，提取率较高；检测手段先进，分离效果好，灵敏度高，具有良好的重现性和稳定性。适用于白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的含量分析。
文档编号G01N30/02GK103197005SQ20131007996
公开日2013年7月10日 申请日期2013年3月13日 优先权日2013年3月13日
发明者王遂, 杨传平, 姜静, 刘桂丰, 赵慧 申请人:东北林业大学