专利名称：左心室肥大的多标记组的制作方法
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左心室肥大的多标记组本发明涉及在具有左心室肥大(left ventricular hypertrophy)的受试者中诊断所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大(肥大型梗阻性心肌病(hypertrophic obstructive cardiomyopathy)、月巴大型非梗阻性心肌病(hypertrophic non-obstructive cardiomyopathy)禾口 / 或压力负荷过度型月巴大(pressure overload hypertrophy))的方法。此外，本发明涉及在患有病理性左心室肥大的受试者中区分或诊断所述受试者患有哪种形式的肥大(肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大)的方法。诊断通过测量选自坏死标记的至少一种标记、选自心脏功能标记的至少一种标记和选自炎性标记的至少一种标记而进行，特别的所述三种标记选自心脏肌钙蛋白、利尿钠肽和⑶F-15。任选地，测量作为另一种标记的P1GF。在一个实施方案中， 形成所确定的标记水平的比值。所述方法还可以用于决定对不同形式的左心室肥大的治疗并用于监测所述治疗。此外，本发明涉及适合实施本发明的方法的装置和试剂盒。本发明还包括上文指定的多个标记用于在患有左心室肥大的受试者中诊断上述健康状态的应用。现代医药的目的是提供个人化或个体化的治疗方案。其是考虑患者的个体需要或危险的治疗方案。个人化或个体化的治疗方案甚至应该考虑决定潜在的治疗方案所需要的测量。左心室肥大(LVH)是心室壁增厚的病症。这种现象可能由多种原因导致。例如， 在运动员心脏(运动员心脏综合征)中发现，其是对增加的血液供应需求的适应，并不需要任何治疗。左心室肥大也在患有动脉高血压的患者中发现，即，高血压是一种需要治疗的疾病。这种形式通常称为“高血压性左心室肥大(hypertensive left ventricular hypertrophy) ”。此外，左心室肥大可能由主动脉狭窄引起，这在本申请中通常称为“与主动脉狭窄相关的肥大”。当用在本申请中时，高血压性左心室肥大和与主动脉狭窄相关的肥大二者都包括在术语“压力负荷过度型肥大”内。动脉高血压对左心室心肌施加增加的压力，使其表现为僵硬和肥大。不依赖于其， 由于高血压在冠状血管中发展动脉粥样硬化(atherosclerosis)。甚至在发展LVH之前，可以观察到心脏收缩和心脏舒张功能的改变。直到特定的点，响应与升高的全身血管阻力相关的增加的后负荷的肥大是必要的且是保护性的。超过该点，多种功能障碍伴随LVH，包括较低的冠状血管舒张能力(coronary vasodilatory capacity)、降低的左心室壁机械性、和异常的左心室舒张填充模式。已知动脉高血压的治疗将引起LVH复原。已经表明，除了单独使用时进一步活化交感神经系统活性的那些(例如，直接的血管舒张剂，如胼苯哒嗪(hydralazine))之外，使用所有抗高血压药物的治疗引起LVH复原。随着复原，左心室功能通常得以改善并且心血管发病率下降。与LVH观察到的心脏收缩和心脏舒张功能的多种改变明显地可以进展成充血性心力衰竭(congestive heart failure, CHF)。左心室肥大的另一个原因可能是主动脉狭窄(aortic stenosis, AS) 0
在AS中，左心室输出通过存在左心室肥大而维持，其可以在主动脉瓣两侧维持较大的压力梯度持续多年，不减少心脏输出、左心室舒张、或没有症状发展。对左心室流出的危险性梗阻通常特征在于在平均体型的成年人(average-sized adult)中小于约0.8cm2 的有效主动脉口面积(通过Gorlin式计算)。1. 0-1. 5cm2的主动脉瓣口认为是中度狭窄， 1. 5-2. Ocm2的主动脉口称为轻度狭窄。随着左心室的收缩逐渐变得更加等容，左心室压力脉冲表现出圆的而不是扁平的最高点。严重AS特有的升高的左心室舒张末期压通常反映肥大的左心室壁减少的顺应性。尽管在大部分患有严重AS的患者中，休息时的心脏输出在正常限度内，但是其在行动过程中通常不能正常升高。在疾病病程的后期，心脏输出、每搏输出量、并且因此左心室-主动脉压力梯度全部下降，而平均左动脉、肺容量、肺动脉、右心室收缩和舒张、和右动脉压力升高，通常是先后升高。左心室舒张末期体积通常保持正常直到严重AS病程的后期，但是左心室质量响应长期的压力过度负荷而增加，导致质量/体积比例增加。当主动脉收缩时，左心室压升高，壁压显著增加，并且变短的程度和速度二者都减小。心室肥大的发展是心脏通过其适应这样增加的血液动力学负担的主要机制之一。由AS 诱发的增加的心脏收缩壁压导致向心性肥大。左心室壁厚度的增加通常足以抗衡增加的压力，以致如果梗阻缓慢发展的话，峰值心脏收缩壁张力恢复至正常或保持正常。另一个原因是肥大型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy)。心肌病 (Cardiomyopathy)是心脏肌肉的主要疾病。基于病理学特征，心肌病分成3种主要的类型 舒张型、肥大型和限制型。术语缺血性心肌病是指有时在患有严重冠状动脉疾病(有或无梗死区)的患者中发生的舒张、较差收缩的心肌。尽管其没有描述主要的心脏病症，该术语保留一般应用。心肌病的表现通常是心力衰竭的那些，并且取决于是否存在心脏收缩功能障碍、 心脏舒张功能障碍、或存在二者而不同。一些心肌病还可能引起胸痛、晕厥(syncope)或猝死。评估典型地包括ECG、超声心动图和CT扫描，以及有时包括MRI，包括压力测试。一些患者需要经静脉心内膜心肌活检。根据需要进行其他检测来确定病因。治疗取决于心肌病的特定类型和病因。肥大型心肌病包括一组心脏病症，其中即使心脏的工作负荷不增加，心室壁也加厚(肥大)并且变得僵硬。大部分肥大型心肌病病例由遗传的基因缺陷引起。人们经历昏晕、胸痛、呼吸短促、和不规律心跳的感知。在一些人当中，变厚的肌肉阻塞在主动脉瓣之下的血液流出心脏。这种变化称为肥大型梗阻性心肌病。可以基于体检发现进行诊断，但是使用超声心动图来验证所述诊断。肥大型心肌病可以在出生时就存在(先天性)或在生命后期获得。先天性的肥大型心肌病和大部分以后发展的病例由遗传基因缺陷引起。获得性肥大型心肌病可能由诸如肢端肥大症(acromegaly)(由于生长激素的过量产生导致的过度生长)和嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma)(过量产生肾上腺素激素的肿瘤)引起。多发性神经纤维瘤病 (neurofibromatosis)(—种遗传病症)也可能引起肥大型心肌病。症状包括昏晕(晕厥)、胸痛、呼吸短促、和由异常心律(心律不齐(arrhythmia))产生的不规律心跳(心悸(palpitations))的感知。昏晕通常在行动过程中发生。呼吸短促由于流体积聚在肺中而发展。流体积聚是由于变厚的、僵硬的心脏排斥充满来自肺的血液因此血液汇聚在肺中。由于心室壁加厚，二尖瓣(在左心房和左心室之间开放的瓣膜)可能不能正常关闭，导致少量血液渗漏回到左心房中。在一些人当中，变厚的肌肉阻塞在主动脉瓣之下的血液流出心脏。这种变化称为肥大型梗阻性心肌病。每年约有4 %患有肥大型心肌病的人死亡。死亡通常是突发性的，可能是由于异常心律导致。由于慢性心力衰竭引起是死亡较不常见。通常可以基于体检结果做出左心室肥大的初步诊断。例如，通过听诊器听起来的心音通常是特征性的。超声心动图是验证诊断的最佳方式。心电图(ECG)和胸部χ射线也是有帮助的。仅在考虑手术时，进行心脏导管插入术(一种侵入性方法)来测量心室中的压力。因此，肥大型心肌病(“HCM")患者和压力负荷过度型肥大患者需要密切的医学管理，以改善他们的病况或防止他们的病况进展并且减小发病率和死亡率。患者的医学管理包括施用药物以及对受试者身体的介入。从前述清楚看出，诊断LVH和区分其各种形式(运动员心脏、梗阻性和非梗阻性肥大型心肌病和压力负荷过度型肥大)需要成本高且费时的检查和有经验的医师、通常是心脏专家的解释。在本领域中，还未公开允许区分健康和病理性形式的LVH和不同形式的LVH并且可以容易地进行而不需要费时检查和专业医师解释的诊断方法。此外，没有公开可以容易地进行且允许决定LVH的医学治疗的方法，也没有公开对所述治疗的监测。也没有公开允许进行所述方法的装置。因此，存在提供上述方法和装置的需求。可以看出本发明潜在的技术问题是提供顺应前述需求的装置和方法。该技术问题通过在权利要求书和下文表征的实施方案来解决。因此，本发明涉及在具有左心室肥大的受试者中诊断或区分所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大的方法，所述方法包括下述步骤a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量，选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，b)将在步骤a)中确定的所述标记的这样确定的量与适当的参照量进行比较，和c)诊断所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大。本发明的方法还可以包括下述步骤a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量，选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，b)通过将在步骤a)中确定的所述标记的这样确定的量与适当的参照量进行比较而诊断所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大。优选地，上述诊断步骤基于所述比较的结果并且依赖于所获得的结果。因此，本发明涉及在具有左心室肥大的受试者中诊断或区分所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大的方法，所述方法基于在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记、选自心脏功能标记的至少一种标记和选自炎性标记的至少一种标记的量和所确定的所述标记的量与参照量的比较。本发明还涉及选自坏死标记的至少一种标记、选自心脏功能标记的至少一种标记和选自炎性标记的至少一种标记用于在具有左心室肥大的受试者中诊断或区分所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大的应用。在本发明的情形中测量的蛋白可以在受试者的一份单一的样品或多份样品中测量，例如，2，3，4或5份样品。样品可以在相同时间点或在不同时间点获得。例如，可以在患者治疗之前和/或过程中和/或之后收集样品。 优选地，所述心脏功能标记是BNP-型标记或其变体，优选NTproBNP或其变体。优选地，所述坏死标记是肌钙蛋白T或其变体。优选地，所述炎性标记是GDF-15或其变体。在上述方法的优选实施方案中，确定NTproBNP或其变体、肌钙蛋白T或其变体和GDF-15或其变体的量。本发明的方法允许以直接和简单的方式在具有左心室肥大的受试者中诊断所述受试者是健康的、具有生理性左心室肥大还是所述受试者患有病理性形式的左心室肥大， 无需涉及允许区分生理性和病理性形式的成本高且费时的方法。术语“诊断”用在本文中意指评估、鉴定、评价或分类受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大。术语“诊断”还指区分生理上健康的受试者和患有病理性左心室肥大的受试者。术语“左心室肥大”用在本文中涉及由受试者的病理生理学状态或不由受试者的病理生理学状态导致的心室壁加厚，即，潜在的原因可能是疾病也可能不是疾病。在运动员心脏(运动员心脏综合征)中发现，其是对增加的血液供应需求的适应，并且这种情形不需要任何治疗。左心室肥大也在患有动脉高血压(即，高血压，一种需要治疗的疾病)的患者中发现。发生左心室肥大的另一个原因是主动脉狭窄，其需要通过介入进行治疗。心肌病是心脏肌肉的主要疾病。基于病理学特征，心肌病分成3种主要的类型舒张型、肥大型和限制型。在本发明的情形中，仅涉及肥大型心肌病。心肌病的表现通常是心力衰竭的那些，并且取决于是否存在心脏收缩功能障碍、 心脏舒张功能障碍、或存在二者而不同。一些心肌病还可能引起胸痛、晕厥或猝死。肥大型心肌病包括一组心脏病症，其中即使心脏的工作负荷不增加，心室壁也加厚(肥大)并且变得僵硬。大部分肥大型心肌病病例由遗传的基因缺陷引起。人们经历昏晕、胸痛、呼吸短促、和不规律心跳的感知。可以基于体检发现进行诊断，但是使用超声心动图来验证所述诊断。术语“生理性”、“生理性健康”和“生理性左心室肥大”是指表现出左心室肥大的健康个体的状态。该个体没有患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病、或压力负荷过度型肥大。在运动员心脏(运动员心脏综合征)中发现，其是对增加的血液供应需求的适应，并且这种情形不需要任何治疗。在本申请的情形中，这种状况或现象称为“生理性左心室肥大”或“生理性肥大”。本领域技术人员明白这种现象通常在运动员心脏(运动员心脏综合征)中发现，其是对增加的血液供应需求的适应并不是病理性状态。其不需要任何治疗。术语“病理性”和“病理性左心室肥大”是指表现出左心室肥大的不健康个体的状态。本领域技术人员明白这种现象发现于肥大型心肌病，其可以细分为肥大型非梗阻性心肌病和肥大型梗阻性心肌病。本领域技术人员也明白不健康个体还可能患有“压力负荷过度型肥大”，其可以细分为高血压性左心室肥大(其在本申请中还称为“病理性高血压性左心室肥大”)，或由主动脉狭窄引起的肥大(其在本申请中通常称为“与主动脉狭窄相关的肥大”)。前文提及的所有病理性状态都需要治疗。此外，本领域技术人员明白导致前述病理性状态的左心室肥大的病理机制。这些状态包括动脉高血压、主动脉狭窄和肥大型心肌病HCM。如前文已经提及，不止一种病理机制可能是受试者中发生病理性左心室肥大的原因。通常，在实施本发明的区分病理性和生理性左心室肥大的方法之前，通过本领域技术人员已知的方法诊断左心室肥大，通常通过听诊器检查和/或ECG和/或胸部χ射线和 /或超声心动图诊断。在优选的实施方案中，这些另外的诊断步骤是本发明的一部分。这也可以适用于本发明涉及区分不同形式的左心室肥大的其他方法、治疗决定和监测的方法。本领域技术人员知晓诊断受试者是否患有生理性和/或病理性左心室肥大的方法。在已知具有左心室肥大的受试者中，区分病理性和生理性通常是成本高、费时的，并且需要医学技能和经验。除上文提及的方法之外，诊断通常建立在病史、明显的心脏功能障碍迹象(例如，疲劳、昏晕(晕厥)、胸痛、呼吸短促、由异常心律(心律不齐)产生的不规律心跳(心悸)的感知)和生命体功能(例如，血压)检查的基础上。例如，受试者被诊断患有心脏左心室肥大。在这样的受试者中，通过测量血压和/ 或病史可以诊断高血压性左心室肥大。肥大型心肌病可以通过排除其他类型的肥大(如高血压性左心室肥大)和/或遗传检查而诊断。已知的危险因素是肥大型心肌病的家族性病史或不能解释的猝死的家族性病史。在诊断患有肥大型心肌病的患者中，可以通过测量外流梯度诊断梗阻性肥大型心肌病。上述诊断方法(区分不同形式的左心室肥大)不仅适用于区分生理性和病理性左心室肥大，还适用于区分不同形式的病理性左心室肥大，其是下文具体描述的本发明的另一个目的。本发明人发现，基于在受试者的样品中测量至少一种本发明的标记的量，可以在具有左心室肥大的受试者中诊断或区分所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大，例如，如从实施例中明显可见的。优选地，本发明的方法是体外方法。优选地，在获自所述受试者的样品中确定至少一种标记的量。此外，其可以包括除上文明确提及的那些之外的步骤。例如，其他步骤可以涉及样品预处理或对通过该方法获得的结果的评价。本发明的方法也可以用于受试者的监测、验证、和细分。所述方法可以人工进行或自动化辅助进行。优选地，步骤(a)，(b)和/ 或(C)可以全部或部分通过自动化辅助，例如，通过适当的机器人和传感装置用于步骤(a) 的确定或步骤(b)的计算机执行的计算。本领域技术人员应该理解，这样的评估通常不意欲对所有的(即100% )待鉴定的受试者都是正确的。然而，该术语要求可以鉴定统计学显著部分的受试者(例如，在群组研究中的一个群组)。一部分是否是统计学显著性的可以由本领域技术人员使用各种公知的统计学评估工具没有其他麻烦地确定，所述统计学评估工具例如确定置信区间、P-值确定、斯氏t检验、Mann-Whitney检验等。详情见于Dowdy和Wearden，Statistics forResearch (用于研究的统计学)，John Wiley & Sons，纽约1983。优选的置信区间是至少 90 %，至少95 %，至少97 %，至少98 %或至少99 %。ρ-值优选为0. 1，0. 05，0. 01，0. 005，或 0. 0001。更优选地，群体中至少60%，至少70%，至少80%或至少90%的受试者可以通过本发明的方法正确鉴定。术语“个体”、“受试者”和“患者”在本文中可以互换使用，并且涉及动物，优选哺乳动物，并且更优选是人。然而，按照本发明的前述方法考虑所述受试者应该是具有左心室肥大的受试者， 其中所述肥大可以是生理性的或病理性的。病理性肥大由动脉高血压、主动脉狭窄或肥大型心肌病引起。所述受试者应该表现出已知与动脉高血压、主动脉狭窄或肥大型心肌病相关的症状和/或体征。本发明的方法利用所谓的“标记”或“分子标记”。这些术语是本领域技术人员已知的，并且是指在受试者身体内表达的多肽或蛋白。一方面，表达或升高的表达可能是受试者中已经发生的或正在发生的病理生理学状态的结果，并且相对于在生理学健康受试者中测量的“正常”值(根据具体情况而定，其可以是0)，升高的量是在受试者中发生的病理生理学状态(或“疾病”)的指征。另一方面，在生理学健康受试者中，蛋白可以以特定的量表达，而由于在受试者中已经发生或正在发生的病理生理学状态的原因，该表达升高。在本发明的情形中，测量的标记全部属于第一组，S卩，如果受试者患有病理生理学状况或疾病，它们得到表达或者较正常以较高的量表达。本发明中所用的所有标记类型和标记对本领域技术人员来说是已知的。坏死标记表示在受试者心肌中发生的细胞死亡，其可以在延长的缺血状态后或作为凋亡的结果而发生。心脏功能标记是心肌功能失常的指征，S卩，心肌的肌肉组织比正常的更弱，并且不能像健康组织那样收缩，这意味着心脏必须比正常的更努力地工作才能确保对机体的足够的血液供应。炎性标记是在个体体内发生的炎性过程的指征。血管发生标记是由于血管的梗塞或部分梗塞的原因、通常在动脉粥样硬化(atherosclerosis)后而在个体体内发生的血管发生(即，血管形成)过程的指征。患有心肌梗死MI的患者可以使用心脏肌钙蛋白、优选肌钙蛋白T或I、最优选肌钙蛋白T进行诊断。心肌梗死被认为是由于心肌的坏死状态(即，细胞死亡)引起。心脏肌钙蛋白在细胞死亡之后释放，并且因此可以用来诊断Ml。如果血液中肌钙蛋白T的量升高，即，高于0. lng/ml，认为是急性心血管事件，并且相应地治疗患者。然而，已知心脏肌钙蛋白也在细胞死亡之前的病理性状态(例如，缺血(ischemia))(以少量)释放。心力衰竭是这样的病症，即其可能由减弱心脏充满或泵吸足以贯穿机体的充足量的血液的能力的任何结构性或功能性心脏病症引起。甚至使用最好的治疗，心力衰竭也与每年约10%的死亡率相关。心力衰竭是一种慢性疾病；其特别可以在急性心血管事件(如心肌梗死)之后发生，或者例如，其可以由于心肌组织中的炎性或退化性变化的原因引起。 按照NYHA系统，将心力衰竭患者分类为I，II，III和IV类。患有心力衰竭的患者如果不接受治疗性治疗将不能完全恢复其健康。心肌功能障碍是一种通用术语，描述心脏肌肉(心肌)的各种病理性状态。与心力衰竭相反，心肌功能障碍可能是暂时性的病理性状态(例如，由缺血、毒性物质、酒精…… 引起)。在去除潜在的病因之后，心肌功能障碍可能消失。然而，无症状的心肌功能障碍也可能发展为心力衰竭(其必须以治疗法进行治疗)。然而，心肌功能障碍也可能是心力衰竭、慢性心力衰竭、甚至是严重的慢性心力衰竭。心肌功能障碍和心力衰竭通常保持不被诊断，特别是当认为该病况是“轻度”的时候。心力衰竭的常规诊断技术是基于公知的血管体积压力标记NT-proBNP。特别地，患有心力衰竭的患者迫切需要支持性的心力衰竭治疗。另一方面，由于心力衰竭的不正确诊断，许多患者将接受不充分的或可能具有甚至严重副作用的治疗方案。本发明的优选心脏功能标记是利尿钠肽。术语“利尿钠肽”包括心钠肽(Atrial Natriuretic ￡印tide，ANP)-型和脑钠肽(Brain Natriuretic ￡印tide，BNP)-型肽及其具有相同预测潜力的变体。本发明所述的利尿钠肽包括ANP型和BNP型的肽及其变体(例如，参见 Bonow，1996，Circulation (循环)93 :1946-1950)。ANP-型肽包括 pre-proANP， proANP, NT-proANP,和 ANP。BNP-型肽包括 pre-proBNP，proBNP, NT-proBNP,和 BNP。前原肽(在pre-proBNP的情形中为134个氨基酸)包括短的信号肽，其被酶分解下来以释放原肽(在proBNP的情形中为108个氨基酸)。原肽进一步分解为N端原肽(NT-原肽， 在NT-proBNP的情形中为76个氨基酸)和活性激素(在BNP情形中为32个氨基酸，在 ANP情形中为28个氨基酸)。优选地，本发明所述的利尿钠肽是NT-proANP，ANP,且更优选地，NT-proBNP, BNP,及其变体。ANP和BNP是活性激素，并且与它们各自的无活性对应体NT-proANP和NT-proBNP相比具有较短的半衰期。BNP在血液中代谢，而NT-proBNP在血液中以完整的分子循环，并且因此在肾中清除。NT-proBNP的体内半衰期比BNP的体内半衰期长120分钟，BNP的体内半衰期是20分钟(Smith 2000，J Endocrinol.(内分泌学杂志)167 =239-46.)。使用NT-proBNP的预分析更稳健，允许将样品容易地转运到中心实验室中(Mueller 2004，Clin Chem Lab Med(临床化学实验医学)42 :942-4.)。血液样品可以在室温下保存数天，或可以邮寄或船运而没有回收损失。相反，BNP在室温下或4°C 保存48小时导致至少20%的浓度损失(Mueller loc. cit. ；Wu 2004，Clin Chem(临床化学)50 :867-73.)。因此，取决于目的时间过程或特性，活性或无活性形式的利尿钠肽的测量可能是有利的。本发明最优选的利尿钠肽是NT-proBNP或其变体。如前述简要讨论的，人 NT-proBNP (按照本发明所涉及的)是优选包含长度为76个氨基酸的对应于人NT-proBNP 分子的N端部分的多肽。人BNP和NT-proBNP的结构已经在现有技术中详细描述，例如， WO 02/089657, WO 02/083913 或 Bonow loc. cit。优选地，人 NT-proBNP 用在本文中是在 EP 06482^B1中公开的人NT-proBNP。这些现有技术文件关于其中公开的NT-proBNP及其变体的具体序列通过引用结合于此。按照本发明引用的NT-proBNP还包括上述讨论的人 NT-proBNP的所述具体序列的等位基因变体和其他变体。具体地，考虑这样的变体多肽，其在氨基酸水平上与人NT-proBNP、优选完整长度的人NT-proBNP优选至少50 %，60 %，70 %， 80%，85%，90%，92%，95%，97%，98%，或99%同一性。两个氨基酸序列之间的同一性程度可以通过本领域公知的算法确定。优选地，同一性程度通过在比较窗口比较两个最佳比对的序列而确定，其中为了最佳比对，在比较窗口的氨基酸序列的片段与参照序列(其不包含添加或缺失)相比可以包含添加或缺失(例如，缺口或突出端)。百分数这样计算通过确定在两个序列中存在同一氨基酸残基的位置数量来产生匹配位置的数量，将匹配位置的数量除以比较窗口中的位置总数并将结果乘以100而产生序列同一性的百分数。比较序列的最佳比对可以通过Smith和Waterman Add. APL. Math. 2 :482(1981)的局部同源性算法、通过Needleman和mmsch J. Mol. Biol.(分子生物学杂志)48 :443 (1970)的同源性比对算法、通过Pearson和Lipman Proc. Natl. Acad Sci. (USA)(美国国家科学院学报)85 2444(1988)的相似性搜索方法、通过这些算法的计算机化执行(在Wisconsin Genetics Software Package (威斯康辛遗传软件包)中的 GAP，BESTFIT, BLAST, PASTA，和 TFASTA， Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr. ,Madison，WI)、或通过视觉检查来进行。 假定两个序列已经鉴定用于比较，优选使用GAP和BESTFIT来确定它们的最佳比对，并且因此，确定同一性程度。优选地，使用关于缺口权重的5. 00的默认值和关于缺口权重长度的 0. 30的默认值。上文涉及的变体可以是等位基因变体或任何其他物种特异性的同系物、种内同源物(paralog)或直向同源物。基本上相似的并且也被考虑的是仍然被诊断方式识别或被针对各自的全长肽的配体识别的蛋白水解降解产物。还包括与人NT-proBNP的氨基酸序列相比，具有氨基酸缺失、置换和/或添加的变体多肽，只要所述多肽具有NT-proBNP特性。本文涉及的NT-proBNP特性是免疫学和/或生物学特性。优选地，NT-proBNP变体具有与人NT-proBNP的免疫学特性相当的免疫学特性(即，表位组成)。因此，该变体将被用于确定利尿钠肽的量的前述方式或配体所识别。生物学和/或免疫学NT-proBNP特性可以通过Karl 等.(Karl 1999, Scand J Clin Lab hvest (临床实验室研究杂志)230 177-181)， Yeo 等.(Yeo 2003，Clinica Chimica Acta 338 :107-115)所述的测定法来检测。变体还包括翻译后修饰的肽，如糖基化的肽。此外，本发明的变体也是在收集样品后进行修饰的肽或多肽，例如，通过将标记物、特别是放射性或荧光标记物共价或非共价附连接到肽上进行修饰。本发明所用的优选的坏死标记是心脏肌钙蛋白。术语“心脏肌钙蛋白”是指在心脏细胞、优选在心内膜下细胞中表达的所有肌钙蛋白同种型。这些同种型在本领域中充分表征，例如，如在Anderson 1995,Circulation Research(循环研究)，卷76，no. 4 :681-686禾口 Ferrieres 1998，Clinical Chemistry (临床化学)，44 :487-493 中所述。优选地，心脏肌钙蛋白是指肌钙蛋白T和/或肌钙蛋白I，并且最优选地，是指肌钙蛋白T。应该理解，肌钙蛋白的同种型可以在本发明的方法中一起确定，即，同时或先后确定，或者分别确定，即，完全无需确定其他同种型。关于人肌钙蛋白T和人肌钙蛋白I的氨基酸序列公开在Anderson， Ioc cit 和 Ferrieres 1998，Clinical Chemistry (临床化学)，44 :487-493 中。术语“心脏肌钙蛋白”还包括前述特定肌钙蛋白(即，优选地，肌钙蛋白I，且更优选地，肌钙蛋白T)的变体。所述变体具有至少与所述特定心脏肌钙蛋白同一的基本生物学和免疫学特性。特别地，如果它们可以通过本说明书中涉及的相同具体测定法检测，例如， 通过用特异性识别所述心脏肌钙蛋白的多克隆或单克隆抗体的ELISA测定法检测，则它们享有相同的基本生物学和免疫学特性。此外，应该理解，本发明涉及的变体应该具有由至少一个氨基酸置换、缺失和/或添加而导致不同的氨基酸序列，其中变体的氨基酸序列仍然优选地与特定肌钙蛋白的氨基酸序列有至少约50%，至少约60%，至少约70%，至少约 80 %，至少约85 %，至少约90 %，至少约92 %，至少约95 %，至少约97 %，至少约98 %，或至少约99%的同一性。变体可以是等位基因变体或任何其他物种特异性同系物、种内同源物或直向同源物。此外，本文涉及的变体包括特定心脏肌钙蛋白的片段或前述类型的变体的片段，只要这些片段具有上文所涉及的基本免疫学和生物学特性。优选地，所述心脏肌钙蛋白变体具有与人肌钙蛋白T或肌钙蛋白I的免疫学特性相当的免疫学特性(即，表位组成)。因此，该变体将被用于确定心脏肌钙蛋白的量的前述方式或配体所识别。因此，该变体将被用于确定心脏肌钙蛋白的量的前述方式或配体所识别。例如，所述片段可以是肌钙蛋白的降解产物。还包括由于翻译后修饰(如磷酸化或十四烷基化)而导致不同的变体。 优选地，肌钙蛋白I及其变体的生物学特性是在体内和体外抑制肌动球蛋白ATP酶或抑制血管发生的能力，其可以例如基于Moses等.1999PNAS USA 96(6) J645-2650)所述的测定法检测。优选地，肌钙蛋白T及其变体的生物学特性是与肌钙蛋白C和I形成复合物、结合钙离子或结合原肌球蛋白的能力，优选地，如果作为肌钙蛋白C，I和T的复合物存在或由肌钙蛋白C，肌钙蛋白I和肌钙蛋白T变体形成的复合物存在。优选地，心脏肌钙蛋白、特别是肌钙蛋白T的量使用非常敏感的肌钙蛋白T检测系统来确定，从而允许对非常低的心脏肌钙蛋白的量的可靠确定，优选地，所述检测系统能够确定样品中(优选在血液、血清或血浆样品中)0.002ng/ml肌钙蛋白的量。在本
发明的情形中特别优选的肌钙蛋白τ测定法是Elecsys 2010分析仪(罗氏诊断(Roche Diagnostics))，其检测界限为约 0. 001ng/ml 至约 0. 0015ng/ml，通常约 0. 0015ng/ml。本发明优选的炎性标记为⑶F-15或其变体。术语“生长分化因子-15”或“⑶F-15” 涉及作为转化生长因子(TGF)_i3细胞因子超家族的成员的多肽。术语多肽、肽和蛋白在整个说明书中可互换使用。⑶F-15最初克隆为巨噬细胞-抑制性细胞因子1，后来还鉴定为胎盘转化生长因子-β、胎盘骨形成蛋白、非留体抗炎药-激活的基因-1、和前列腺来源的
(Bootcov Ioc cit ；Hromas, 1997 Biochim Biophys Acta 1354 :40-44 ；Lawton 1997, Gene (基因)203 :17-26 ；Yokoyama-Kobayashi 1997，J Biochem(Tokyo)(生物化学杂志 (东京))，122 :622-6 ;Paralkar 1998, J Biol Chem(生物化学杂志)273 :13760-13767)。 与其他TGF-β -相关的细胞因子相似，GDF-15作为无活性的前体蛋白合成，其进行二硫化物连接的同型二聚体化。当蛋白水解分解N-端原肽时，⑶F-15分泌为 ^kDa的二聚体蛋白(Bauskin 2000，Embo J 19:2212-2220)。GDF-15 的氨基酸序列公开在 W099/06445， W000/70051,W02005/113585,Bottner 1999，Gene(基因)237 :105-111,Bootcov loc. cit, Tan loc. cit. , Baek 2001, Mol Pharmacol ( ^^ΜΜψ ) 59 :901-908, Hromas loc cit, Paralkar loc cit, Morrish 1996, Placenta 17 :431-441 或 Yokoyama-Kobayashi loc cit.中。⑶F-15用在本文中还包括前述特定⑶F-15多肽的变体。所述变体具有至少与所述特定⑶F-15多肽相同的基本生物学和免疫学特性。特别地，如果它们可以通过本说明书中涉及的相同具体测定法检测，例如，通过用特异性识别所述GDF-15多肽的多克隆或单克隆抗体的ELISA测定法检测，则它们享有相同的基本生物学和免疫学特性。在后附的实施例中描述优选的测定法。此外，应该理解，按照本发明所涉及的变体应该具有由至少一个氨基酸置换、缺失和/或添加而导致不同的氨基酸序列，其中变体的氨基酸序列仍然优选地与特定GDF-15多肽的氨基酸序列、优选与人GDF-15的氨基酸序列、更优选完整长度的所述特定⑶F-15、例如完整长度的人⑶F-15有至少约50%，至少约60%，至少约70%，至少约80 %，至少约85 %，至少约90 %，至少约92 %，至少约95 %，至少约97 %，至少约98 %， 或至少约99%的同一性。两个氨基酸序列之间的同一性程度可以通过本领域公知的算法确定。优选地，同一性程度通过在比较窗口比较两个最佳比对的序列而确定，其中为了最佳比对，在比较窗口的氨基酸序列的片段与参照序列(其不包含添加或缺失)相比可以包含添加或缺失(例如，缺口或突出端)。百分数这样计算通过确定在两个序列中存在同一氨基酸残基的位置数量来产生匹配位置的数量，将匹配位置的数量除以比较窗口中的位置总数并将结果乘以100而产生序列同一性的百分数。比较序列的最佳比对可以通过Smith 和 Waterman Add. APL. Math. 2 :482(1981)的局部同源性算法、通过 Needleman 和 Wunsch J. Mol. Biol.(分子生物学杂志)48 =443(1970)的同源性比对算法、通过Pearson和Lipman Proc. Natl. Acad Sci. (USA)(美国国家科学院学报)85 :2444 (1988)的相似性搜索方法、通过这些算法的计算机化执行(在Wisconsin Genetics Software lockage (威斯康辛遗传软件包)中的 GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA,禾口 TFASTA，Genetics Computer Group (GCG), 575Science Dr.，Madison，WI)、或通过视觉检查来进行。假定两个序列已经鉴定用于比较， 优选使用GAP和BESTFIT来确定它们的最佳比对，并且因此，确定同一性程度。优选地，使用关于缺口权重的5. 00的默认值和关于缺口权重长度的0. 30的默认值。上文涉及的变体可以是等位基因变体或任何其他物种特异性的同系物、种内同源物或直向同源物。此外，本文涉及的变体包括特定⑶F-15多肽的片段或前述类型的变体的片段，只要这些片段具有上述基本免疫学和生物学特性。例如，所述片段可以是GDF-15多肽的降解产物。还包括由于翻译后修饰(如磷酸化或十四烷基化)而不同的变体。
本发明优选的诊断标记是PlGF或其变体。
术语“参照量”用在本发明的这一实施方案中是指允许将左心室肥大指定为表现出生理性肥大的健康个体的左心室肥大或是表现出病理性肥大的不健康个体的左心室肥大的多肽的量。
因此，参照量通常来源于已知具有生理性左心室肥大的受试者、通常是具有运动员心脏的受试者。
下述值是具有生理性左心室肥大的健康个体的指征
本文涉及的坏死标记，优选心脏肌钙蛋白，更优选肌钙蛋白I或肌钙蛋白T，特别是肌钙蛋白T 优选彡约5pg/ml，更优选彡约4pg/ml，最优选彡约3pg/ml。还优选的是，所述坏死标记低于患有生理性左心室肥大的患者集体的第75百分位数，优选低于第95百分位数。
本文涉及的心脏功能标记，优选利尿钠肽，更优选BNP或NT-proBNP，特别是 NT-proBNP 优选彡约75pg/ml，特别彡约50pg/ml，最优选彡约20pg/ml。还优选的是，所述心脏功能标记低于具有生理性左心室肥大的个体集体的第75百分位数。
本文涉及的炎性标记，特别是⑶F-15 优选彡约600pg/ml，更优选彡约500pg/ml， 最优选<约400pg/ml。还优选的是，所述炎性标记低于具有生理性左心室肥大的个体集体的第75百分位数。
下述值是具有病理性左心室肥大的不健康个体的指征
本文涉及的坏死标记，优选心脏肌钙蛋白，更优选肌钙蛋白I或肌钙蛋白T，特别是肌钙蛋白T 优选>约5pg/ml，更优选>约8pg/ml，最优选>约25pg/ml。还优选的是，所述坏死标记高于患有病理性左心室肥大的患者集体的中值。
本文涉及的心脏功能标记，优选利尿钠肽，更优选BNP或NT-proBNP，特别是 NT-proBNP 优选 > 约75pg/ml，更优选 > 约200pg/ml，特别 > 约400pg/ml，最优选 > 约800pg/ml。还优选的是，所述心脏功能标记高于患有病理性左心室肥大的患者集体的中值。本文涉及的炎性标记，特别是⑶F-15 优选>约600pg/ml，更优选>约IOOOpg/ ml，特别>约1500pg/ml，最优选>约2000pg/ml。还优选的是，所述炎性标记高于患有病理性左心室肥大的患者集体的中值。前述值优选是关于血清样品的值。术语“约”用在本文中是指给定量度或值的+/-20 %，优选+/-10 %，优选+/-5 %。在本发明的所有实施方案中，其中用来指示个体是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大还是健康个体的各种标记(心脏功能标记，优选利尿钠肽，特别是 NT-proBNP ；坏死标记，优选心脏肌钙蛋白，特别是肌钙蛋白T ；和炎性标记，特别是⑶F-15 ； 并且，在一些实施方案中为P1GF)的量/水平通过本领域技术人员已知的方法确定。通常，为了确定允许建立本发明的各个实施方案所述的理想诊断的各种量/水平或量比值(“阈值”、“参照量”)，在适当的患者组中确定各种肽或多种肽的量/水平或量比值。按照待建立的诊断，例如，患者组可以仅包括健康个体，或可以包括健康个体和患有待确定的病理生理学状态的个体，或可以仅包括患有待确定的病理生理学状态的个体，或可以包括患有待区分的各种病理生理学状态的个体，所述确定或区分通过各种标记利用验证的分析法进行。汇集获得的结果，并且通过本领域技术人员已知的统计学方法分析。然后， 依据患有疾病的理想概率确定所获得的阈值，并且将其与特定的阈值相联系。例如，其可以用来选择中值，健康和/或不健康患者集体的第60，第70，第80，第90，第95或甚至第99 百分位数，从而建立阈值、参照值或量比值。可以建立诊断标记的参照值，并且可以简单地将患者样品中的标记水平与所述参照值进行比较。诊断和/或预测检测的灵敏性和特异性不止仅取决于所述检测的分析“质量”，其还取决于对什么组成异常结果的定义。在实践中，接受者操作特征曲线(Receiver Operating Characteristic curves)，或“ROC”曲线，典型地通过将变量值相对于其在“正常”和“疾病”群体中的相对频率绘图而计算。对于本发明的任何具体标记，关于有病或无病受试者的标记水平的分布可能是重叠的。在这样的条件下，检测不能以100%的准确性绝对区分正常和疾病，并且重叠的区域表示检测不能区分正常与疾病的情形。选定阈值，高于其(或低于其，这取决于标记随疾病怎样变化)，认为检测是异常的，并且低于其，认为检测是正常的。ROC曲线下面积是认识到的测量将允许正确鉴定病症的概率的量度。甚至在检测结果不必要给出准确数值时，仍可以使用ROC曲线。只要人们可以排列结果，人们就可以产生ROC曲线。例如，关于“疾病”样品的检测结果可能按照程度(即，1 =低，2 =正常，且 3=高)排列。这种排列可能与“正常”群体中的结果相关，并且产生ROC曲线。这些方法在本领域中是公知的。例如，参见Hanley等，Radiology (放射线学)143 :29-36 (1982)。在某些实施方案中，选择标记和/或标记组来展现至少约70%的灵敏性，更优选至少约80%的灵敏性，甚至更优选至少约85%的灵敏性，还更优选至少约90%的灵敏性， 并且最优选至少约95%的灵敏性，结合至少约70%的特异性，更优选至少约80%的特异性，甚至更优选至少约85%的特异性，还更优选至少约90%的特异性，并且最优选至少约 95%的特异性。在特别优选的实施方案中，灵敏性和特异性二者为至少约75%，更优选至少约80 %，甚至更优选至少约85 %，还更优选至少约90 %，且最优选至少约95 %。在该情形中，术语“约”是指给定量度的+/_5%。
在其他实施方案中，阳性似然比、阴性似然比、优势比(odds ratio)或风险比用作检测预测危险或诊断疾病的能力的量度。在阳性似然比的情形中，数值1表示在“患病” 和“对照”组的受试者中正结果是同样可能的；大于1的数值表示在患病组中更可能是正结果；并且小于1的数值表示在对照组中更可能是正结果。在阴性似然比的情形中，数值1表示在“患病”和“对照”组的受试者中负结果是同样可能的；大于1的数值表示在检测组中更可能是负结果；并且小于1的数值表示在对照组中更可能是负结果。在某些优选的实施方案中，优选选择这样的标记和/或标记组，即表现出至少约1.5以上或约0. 67以下，更优选至少约2以上或约0. 5以下，还更优选至少约5以上或约0. 2以下，甚至更优选至少约10 以上或约0. 1以下，并且最优选至少约20以上或约0. 05以下的正或阴性似然比。在这一情形中，术语“约”是指给定量度的+/-5 %。
在优势比的情形中，数值1表示在“患病”和“对照”组的受试者中正结果是同样可能的；大于1的数值表示在患病组中更可能是正结果；并且小于1的数值表示在对照组中更可能是正结果。在某些优选的实施方案中，优选选择这样的标记和/或标记组，即表现出至少约2以上或约0. 5以下，更优选至少约3以上或约0. 33以下，还更优选至少约4以上或约0. 25以下，甚至更优选至少约5以上或约0. 2以下，并且最优选至少约10以上或约0.1以下的让步比。在这一情形中，术语“约”是指给定量度的+/_5%。
在风险比的情形中，数值1表示在“患病”和“对照”两组中终点(例如，死亡)的相对危险是相等的；大于1的数值表示在患病组中危险更高；并且小于1的数值表示在对照组中危险更高。在某些优选的实施方案中，优选选择这样的标记和/或标记组，即表现出至少约1. 1以上或约0.91以下，更优选至少约1.25以上或约0.8以下，还更优选至少约1.5以上或约0. 67以下，甚至更优选至少约2以上或约0. 5以下，并且最优选至少约2. 5以上或约0.4以下的风险比。在这一情形中，术语“约”是指给定量度的+/_5%。
尽管本文中描述了示例性的组，但是可以从这些示例性的组中替换、添加或减去一种或多种标记，同时仍然提供临床有用的结果。组可以包括疾病特异性标记(例如，在细菌感染时增加或减少而在其他疾病状态不增加或减少的标记)和/或非特异性标记(例如，由于炎症引起而与原因无关的增加或减少的标记；由于止血变化引起而与原因无关的增加或减少的标记，等等)。尽管某些标记单独在本发明所述的方法中可能不是确定性的， 但是特定的“指纹”变化模式可以有效地作为疾病状态的特异性指征。如上文讨论，该变化模式可以从单份样品获得，或可以任选地考虑一个或多个组成员的临时变化(或组响应值的临时变化)。
为了检测所选的参照值是否产生对患有目的疾病的患者的充分安全的诊断，例如，人们可以利用下式确定本发明的方法关于给定的参照值的效率(E)
E = (TP/TO) xlOO ；
其中TP =真阳性，而TO =检测总数=TP+FP+FN+TN，其中FP =假阳性；FN =假阴性，而TN=真阴性。E具有下述范围的值0<E< 100。优选地，检测的参照值产生充分安全的诊断，条件是E值为至少约50，更优选至少约60，更优选至少约70，更优选至少约80， 更优选至少约90，更优选至少约95，更优选至少约98。
对于个体是健康的还是患有某种病理生理学状态的诊断通过本领域技术人员已知的确定方法进行。关于个体病理生理学状态，所述方法不同。
建立理想的诊断的算法在本申请中公开，在进行参考的涉及各个实施方案的段落中公开。因此，本发明还包括确定指示生理性和/或病理性状态和/或特定病理性状态的阈值水平的方法，所述方法包括下述步骤在适当的患者组中确定适当的标记的水平，收集数据并且通过统计学方法分析该数据，并且确定阈值的值。在本发明中，所述适当的标记是心脏功能标记，优选利尿钠肽，特别是NT-proBNP ； 坏死标记，优选心脏肌钙蛋白，特别是肌钙蛋白T ；和炎性标记，特别是GDF-15 ；并且，在一些实施方案中，是P1GF。个体/受试者可以包括具有生理性左心室肥大的健康个体；和/或具有病理性左心室肥大的个体；和/或具有梗阻性左心室心肌病、非梗阻性左心室心肌病、 高血压左心室肥大、和/或与主动脉狭窄相关的肥大(后两种形式在本发明中称为“压力负荷过度型肥大”)的个体。对于所有上文引用的标记(肌钙蛋白I或肌钙蛋白T，BNP或NT-proBNP，⑶F-15)， 最低值对应于在绝对健康个体中的生理学状态，而较高的值可能对应于在可能具有轻微的健康损害但是仍然视为是健康个体的个体中的生理学状态；更高的值是患有病理性肥大的不健康个体所特有的。此外，参照量优选地限定阈值。合适的参照量或阈值量可以通过本发明的方法从待分析的参照样品与检测样品一起(即，同时或先后)确定。本领域有技术人员明白，前述引用的关于心脏肌钙蛋白(肌钙蛋白T和肌钙蛋白 I)、关于利尿钠肽、特别是NT-proBNP、以及-在较低程度上-关于⑶F-15的值可能不适用于患有受损肾功能的患者，优选不适用于患有肾衰竭的患者，特别是患有慢性和晚期肾衰竭的患者。在本发明的优选实施方案中，患有受损肾功能的患者，优选患有肾衰竭的患者， 特别是患有慢性和晚期肾衰竭的患者不包括(排除)在本发明的方法中。在另一个优选实施方案中，具有肾性高血压(renal hypertension)的患者不包括(排除)在本发明的方法中。优选地，“具有左心室肥大的受试者”用在本文中排除患有受损肾功能的患者，优选排除患有肾衰竭的患者，特别是患有慢性和晚期肾衰竭的患者，更优选排除具有肾性高血压的患者，最优选排除所有患有该文句中提及的疾病和病症中的一种的患者。在这一情形中，“肾衰竭”被认为是低于通常范围60-120ml/min、优选低于60ml/min的受损的肾小球滤过率(GFR)。慢性肾衰竭是长期存在的、进展性的肾功能恶化，其通常导致晚期肾衰竭。当 GFR达到高至约30ml/min的速率时，诊断为晚期肾衰竭。通过肌酸酐清除来确定GFR，这是本领域有技术人员已知的。由于消弱的肽清除，具有受损的肾功能的受试者表现出比上文提及的那些更高水平的肌钙蛋白I和肌钙蛋白T。该水平随肾损伤的严重性而变化。肾损伤的严重性分成不同的等级，如下所示0:彡 90ml/min1 彡 90ml/min，具有微量白蛋白尿(microalbuminuria)2 彡 60-< 90ml/min3 彡 30-< 60ml/min4 彡 15-< 30ml/min5 < 15ml/min(来源National Kidney Foundation (国家肾脏基金会)，公布在Am J. KidneyDis(肾脏疾病杂志)39 supp 1 1,2002 ；Clinical Practice Guidelines for chronic kidney disease (关于慢性肾脏疾病的指南))
本发明还包括允许在患有病理性左心室肥大的受试者中区分(诊断)所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大的方法，所述方法包括下述步骤
a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自心脏功能的至少一种标记的量，选自坏死标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，
b)将所述量与参照量进行比较，和
c)依据步骤b)的结果，区分肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大。
本发明还涉及选自坏死标记的至少一种标记、选自心脏功能标记的至少一种标记和选自炎性标记的至少一种标记用于在患有病理性左心室肥大的受试者中诊断或区分所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是病理性高血压性左心室肥大的应用。
优选地，所述心脏功能标记是BNP-型标记或其变体，优选NTproBNP或其变体。优选地，所述坏死标记是肌钙蛋白T或其变体。优选地，所述炎性标记是GDF-15或其变体。在上述方法的优选实施方案中，确定NTproBNP或其变体、肌钙蛋白T或其变体和GDF-15或其变体的量。在本发明的这种方法的优选实施方案中，形成2种标记的比值。
在本发明的另一个实施方案中，允许区分前文所公开的不同形式的病理性左心室肥大，在受试者样品中确定PlGF的量。如果受试者表现出至少约12.4pg/ml、优选至少约 15，0pg/ml、特别是至少约16. 7pg/ml的PlGF量，该量指示该受试者患有梗阻性左心室肥大。还优选地，参照量是患有梗阻性左心室肥大的患者集体的第50百分位数或第75百分位数。
在本发明的一个实施方案中，形成利尿钠肽(优选NT-proBNP)与炎性标记(优选 GDF-15)之间的比值。由该比值，可以区分受试者患有的病理性状态是肥大型非梗阻性心肌病(一方面)，还是选自肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大(另一方面)。虽然 NT-proBNP/⑶F-15比在肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大中太接近以至于不能区分受试者中的两种状态，但是，当与在肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大患者中各自的NT-proBNP/⑶F-15比相比较时，该比值在患有肥大型非梗阻性心肌病的患者中较高。
因此，本发明提供在患有病理性左心室肥大的受试者中诊断(区分)所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病(一方面)还是患有选自肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的心肌病(另一方面)的方法，所述方法包括下述步骤
a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，
b)形成心脏功能标记和炎性标记之间的比值，
C)将该量与参照量进行比较，和
d)依据步骤C)的结果，区分肥大型非梗阻性心肌病(一方面)或选自肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的心肌病(另一方面)。
上述用于在患有病理性左心室肥大的受试者中诊断(区分)所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病(一方面)还是患有选自肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的心肌病(另一方面)的方法还可以包括下述步骤
a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，
b)形成心脏功能标记和炎性标记之间的比值，
c)通过将该量与参照量比较，区分肥大型非梗阻性心肌病(一方面)或选自肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的心肌病(另一方面)。
上述区分步骤优选地是基于所述比较的结果并且取决于所获得的结果。
因此，本发明涉及用于在患有病理性左心室肥大的受试者中诊断(区分)所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病(一方面)还是患有选自肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的心肌病(另一方面)的方法，所述方法基于在所述受试者的至少一份样品中确定选自心脏功能标记的至少一种标记和选自炎性标记的至少一种标记的量，计算心脏功能标记和炎性标记之间的比值，以及所确定的量与参照量的比较。
在本发明的优选实施方案中，所述参照量是已经在患有梗阻性心肌病的患者或患者组中确定的心脏功能标记与炎性标记的比值。或者，所述参照量可以是已经在患有肥大型梗阻性心肌病或压力负荷过度型肥大的患者或患者组中确定的心脏功能标记与炎性标记的比值。
本发明还涉及选自心脏功能标记的至少一种标记和选自炎性标记的至少一种标记在制备用于在患有病理性左心室肥大的受试者中区分所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病(一方面)还是患有选自肥大型梗阻性心肌病和病理性高血压性左心室肥大的心肌病(另一方面)的诊断剂的应用。
在优选的实施方案中，所述心脏功能标记是利尿钠肽，更优选BNP或NT-proBNP， 特别是NT-proBNP ；优选地，所述炎性标记是⑶F-15。
指示存在肥大型非梗阻性心肌病的NT-proBNP/⑶F-15值是彡(大于或等于)约 0. 43、优选彡约0. 6、特别是彡约0. 8的值。
指示存在肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的NT-proBNP/⑶F-15值是 < (小于)约0. 43、优选<约0. 3、特别是<约0. 2的值。
在本发明的另一个实施方案中，允许区分前文所公开的不同形式的病理性左心室肥大，在受试者样品中确定PlGF的量。如果受试者表现出至少约12.4pg/ml、优选至少约 15，0pg/ml、特别是至少约16. 7pg/ml的PlGF量，该量指示该受试者具体患有梗阻性左心室肥大，因为患有梗阻性左心室肥大的患者显示最高量的这种肽，通常大约15pg/ml。因此，参照量还优选地是患有梗阻性左心室肥大的患者集体的第50百分位数或第75百分位数。
在本发明的一个实施方案中，形成坏死标记(优选肌钙蛋白I或肌钙蛋白T，特别是肌钙蛋白T)与炎性标记(优选GDF-15)之间的比值。由该比值，可以区分受试者患有的病理性状态是肥大型梗阻性心肌病、肥大型非梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大。
因此，本发明提供用于在患有病理性左心室肥大的受试者中诊断(区分)所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大的方法，所述方法包括下述步骤
a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，b)形成坏死标记和炎性标记之间的比值，c)将该量与参照量进行比较，和d)依据步骤C)的结果，区分肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大。上述用于在患有病理性左心室肥大的受试者中诊断(区分)所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大的方法还可以包括下述步骤a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，b)形成坏死标记和炎性标记之间的比值，c)通过将该量与参照量比较，区分肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大。上述区分步骤优选地是基于所述比较的结果并且取决于所获得的结果。因此，本发明涉及用于在患有病理性左心室肥大的受试者中诊断(区分)所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大的方法，所述方法基于在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，计算坏死标记和炎性标记之间的比值，以及所确定的量与参照量的比较。在本发明的优选实施方案中，所述参照量是已经在患有肥大型非梗阻性心肌病的患者或患者组中确定的坏死标记与炎性标记的比值。或者，所述参照量可以是已经在患有肥大型梗阻性心肌病的患者或患者组中确定的心脏功能标记与炎性标记的比值。或者，所述参照量可以是已经在患有压力负荷过度型肥大的患者或患者组中确定的心脏功能标记与炎性标记的比值。本发明还涉及选自坏死标记的至少一种标记和选自炎性标记的至少一种标记在制备用于在患有病理性左心室肥大的受试者中区分所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是病理性高血压性左心室肥大的诊断剂的应用。在优选的实施方案中，所述坏死标记选自肌钙蛋白T和肌钙蛋白I，特别地，所述坏死标记是肌钙蛋白T ；优选地，所述炎性标记是⑶F-15。指示存在肥大型非梗阻性心肌病的肌钙蛋白T/GDF-15值是> (大于或等于)约 0. 01、优选彡约0. 03、特别是彡约0. 06的值。指示存在肥大型梗阻性心肌病的肌钙蛋白T/GDF-15值是< (小于或等于)约 0. 004、优选<约0. 002、特别是彡约0. 001的值。指示存在压力负荷过度型肥大的肌钙蛋白T/⑶F-15值是>约0. 004至<约0. 01 范围的值，优选约0. 006，特别是约0. 008。在本发明的另一个实施方案中，允许区分前文所公开的不同形式的病理性左心室肥大，在受试者样品中确定PlGF的量。由此，可以具体识别梗阻性左心室肥大，因为患有梗阻性左心室肥大的受试者显示大量的该肽。
因此，本发明还包括诊断个体中的肥大型梗阻性心肌病的方法，所述方法包括确定在所述受试者的样品中的PlGF量，其中升高量的PlGF是肥大型梗阻性心肌病的指征。
指示存在梗阻性左心室肥大的PlGF值是彡(大于或等于)约12. 4pg/ml、优选彡约15，0pg/ml、特别是彡约16. 7pg/ml的值。还优选地，参照量是患有梗阻性左心室肥大的患者集体的第50百分位数或第75百分位数。
按照本发明的各个实施方案，术语“诊断”用在本文中意指评估、鉴定、评价或分类受试者是否具有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病和/或压力负荷过度型肥大 (即，病理性高血压性左心室肥大或与主动脉狭窄相关的肥大)。按照本发明的各个实施方案，术语“诊断”还指区分上述形式的病理性左心室肥大。
本领域技术人员知晓诊断受试者是否患有生理性或病理性左心室肥大的方法。在已知具有左心室肥大的受试者中，区分病理性和生理性的，以及在已知患有病理性左心室肥大的受试者中，区分不同形式的左心室肥大，通常是成本高、费时的，并且需要医学技能和经验。评估方法是本领域技术人员已知的，并且典型地基于病史、明显的心脏功能障碍迹象(例如，疲劳、昏晕(晕厥)、胸痛、呼吸短促、由异常心律(心律不齐)产生的不规律心跳(心悸)的感知)、和生命体功能(例如，血压)检查。进一步的评估包括使用诊断仪器 /装置(心脏听诊(听诊器检查)、ECG、超声心动图、胸部χ-射线、放射性核素显像、心室造影术、CT扫描、MRI和/或压力测试、冠状血管造影术、超声检查)的检查。一些患者需要经静脉心内膜心肌活检。当需要时，可以进行其他检测以确定病因。治疗取决于特定类型的心肌病和病因。
通常，如果受试者的病史表现出特定的可能性，或在常规检查的过程中，或两者结合，则受试者被诊断为(例如，通过超声心动图)左心室肥大。在诊断之前，通常由于ECG 中的迹象而怀疑存在LVH。例如，受试者可能是具有存在左心室肥大的可能性的竞技耐力运动员；或所述个体可能具有肥大型心肌病家族史或突发心脏死亡的情形。
然后，评估所述左心室肥大是生理性的还是病理性的，并且根据具体情况而定，评估存在哪种形式的病理性左心室肥大。这种评估/诊断可以包括多种检查、诊断推断和排除，如下文所公开的那样。
在竞技运动员中的LVH的情形中，应该优选通过遗传检查诊断所述LVH是生理性的还是病理性的(特别是如果受试者具有肥大型心肌病家族史或突发心脏死亡家族史)； 遗传检查显示是否存在生理性或病理性形式家族史和可以排除哪种形式。如果在除竞技运动员之外的受试者中诊断左心室肥大，则左心室肥大是病理性的，并且可以排除生理性形式。如果受试者具有高血压史，并且高血压仍然持续，则该受试者患有高血压性LVH ；相应地，通常可以排除其他形式。主动脉狭窄可以通过心脏听诊、和确定左心室流出梯度而诊断；主动脉狭窄通常通过超声心动图验证；以这种方式，可以排除包括高血压性LVH的其他形式的病理性LVH。通常在排除其他形式的病理性LVH之后，可以通过遗传检查诊断肥大型心肌病。在患有肥大型心肌病的个体中，可以通过确定左心室流出梯度而诊断梗阻。
为了进一步举例说明本发明，例如，受试者被诊断具有心脏肥大。在这样的受试者中，通过测量血压和/或参考病史而诊断高血压性左心室肥大。肥大型心肌病可以通过排除其他形式的肥大(如高血压性左心室肥大)和/或通过遗传检查而诊断。已知的危险因素是肥大型心肌病家族史或不能解释的猝死家族史。在诊断患有肥大型心肌病的患者中，梗阻性肥大型心肌病可以通过测量流出梯度而诊断。上文列出的诊断方法可以与本发明基于确定所引用的标记(至少一种坏死标记、 至少一种心脏功能标记和至少一种炎性标记；优选地，所述心脏功能标记是利尿钠肽，更优选是BNP-型利尿钠肽或其变体，特别是NTproBNP或其变体；优选地，所述坏死标记是心脏肌钙蛋白，特别是肌钙蛋白T或其变体；优选地，所述炎性标记是GDF-15或其变体；在上述方法的优选实施方案中，确定NTproBNP或其变体、肌钙蛋白T或其变体、和GDF-15或其变体的量；另外，在本发明的一个实施方案中，确定P1GF)的方法补充/互补应用。例如，通过确定本发明的标记的量，可以立即区分生理性的和病理性的个体。另一个实例包括形成心脏功能标记和炎性标记之间的比值，并且诊断受试者一方面是患有肥大型非梗阻性心肌病，还是另一方面患有肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的心肌病。如果受试者不患有非梗阻性肥大型心肌病，其可以排除并且可以通过上述公开的一种或多种方法(或者，备选地，通过本发明的其他实施方案)进行其余LVH状态的区分。因此，这些补充/互补性方法是本发明的实施方案。在本发明的另一个实施方案中，基于前述步骤，前述公开的补充/互补性方法可以用于决定对上述受试者的治疗的方法。这些方法再下文中公开，并且允许决定受试者应该服用哪种药物或哪几种药物或者受试者应该进行何种其他的治疗。在本发明的其他实施方案中，也可以使用本发明所用的标记(肽)，用于验证通过本领域已知的常规诊断方法确定的诊断。因此，本发明还涉及验证不基于或仅部分基于本发明所用的标记的确定的诊断的方法，所述方法通过确定本发明所用的标记的量，将这些量与参照量比较，并且验证或不验证通过本领域方法获得的诊断。已知血管发生是通过毛细管出芽过程由已经存在的血管形成新血管。该过程处于基本上由血管发生生长因子如血管内皮生长因子(VEGF)推动的生理学条件下。所述血管发生生长因子的表达由缺氧(hypoxia)关键性调节。因此，如果组织局部缺血，则细胞将开始产生血管发生生长因子，其通过血管发生作用吸引新血管到该组织。然而，受试者血管发生的能力，即，其血管发生状态，取决于复杂的生物学参数。已经报道了多种血管发生促进因子以及血管发生抑制剂(Nyberg 2005，Cancer Res(癌症研究)65 :3967-3979)。在肿瘤生长过程中观察到血管发生，其中生长的肿瘤越来越受缺氧的影响。伴随缺氧和缺血的其他疾病病况包括冠状动脉疾病。所述疾病特征在于冠状动脉系统的血管的狭窄或阻塞，例如，特征在于动脉粥样硬化或血栓栓塞阻塞。冠状动脉疾病导致心肌缺血。所述缺血(ischemia)，如果不进行治疗，可能严重地妨碍心脏的生理功能并且导致心脏病症，包括心力衰竭或甚至是心肌梗死。对于患有冠状动脉疾病的患者，血管生成治疗可以辅助避免前述威胁生命的病况。此外，血管生成治疗甚至可以帮助避免复杂的心脏介入，如支架植入或心脏搭桥手术。如前文已经描述，除VEGF外，还已经报道了多种因子在血管发生中起作用。胎盘生长因子(PlGF)是提议在相关的动脉生成过程中与其推定的受体Flt-I —起起作用的一种密切相关的生长因子(Khurana 2005，Circulation (循环)111 :观观_2836)。可能参与动脉生成和血管发生的其他因子是转化生长因子-β超家族的成员以及它们的受体或结合配偶体，如ALK受体或内皮因子(van Laake 2006，Circulation (循环)，114 :2沘8_2四7 ；Bobik 2006, Arterioscler Thromb Vasc Biol (动脉硬化栓塞血管生物学)26 :1712-1720 ； Bertolino 2005，Chest Supplement 128:585-590)。成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)以及细胞因子和基质-金属蛋白酶也已经被描述为有效的血管生成因子(Nyberg，loc. cit.)。
术语“P1GF(胎盘生长因子)”用作本文中是指胎盘衍生的生长因子，其是一种149 个氨基酸长的多肽，并且与人血管内皮生长因子(VEGF)的血小板衍生生长因子样区域高度同源(53%的同一性)。如VEGF —样，PlGF在体外和体内都具有血管生成活性。例如， 来源于转染的C0S-1细胞的PlGF的生化和功能表征揭示，其是能够在体外刺激内皮细胞生长的糖基化二聚体分泌蛋白(Maqli0nel993，Oncogene (癌基因)8 ) :925-31)。优选地， PlGF是指人P1GF，更优选是指具有Genebank登记号P49763，GI 17380553所示的氨基酸序列的人 PlGF (Genebank 由美国 NCBI 可用，例如，在 www, ncbi. nlm. nih. gov/entrez)。此外，应该理解，按照本发明所涉及的变体应该具有由至少一个氨基酸置换、缺失和/或添加而导致不同的氨基酸序列，其中变体的氨基酸序列仍然优选地与特定PlGF的氨基酸序列、 优选与人PlGF的氨基酸序列有至少约50%，至少约60%，至少约70%，至少约80%，至少约85%，至少约90%，至少约92%，至少约95%，至少约97%，至少约98%，或至少约99% 的同一性，更优选在全长人PlGF上与人PlGF的氨基酸序列同一。变体可以是等位基因变体、剪接变体、或任何其他物种特异性同系物、种内同源物或直向同源物。此外，此外，本文涉及的变体包括特定PlGF的片段或前述类型的变体的片段，只要这些片段具有上文所涉及的基本免疫学和生物学特性。例如，所述片段可以是PlGF的降解产物。还包括由于翻译后修饰(如磷酸化或十四烷基化)而导致不同的变体。
此外，按照本发明，并且关于前述参照值，增加量的心脏肌钙蛋白、特别是肌钙蛋白T指示心肌缺血和缺氧和/或坏死，特别是坏死，而关于所述参照值，减少量的心脏肌钙蛋白、特别是肌钙蛋白T指示不存在心肌缺血和缺氧和/或坏死，特别是坏死。因此，在本发明方法的优选实施方案中，增加量的心脏肌钙蛋白、特别是肌钙蛋白T指示心肌缺血和缺氧和/或坏死，特别是坏死。在本发明方法的另一个优选实施方案中，减少量的心脏肌钙蛋白、特别是肌钙蛋白T指示心肌缺血和缺氧和/或坏死，特别是坏死。
此外，按照本发明的优选实施方案，并且关于上述参照值，增加量的利尿钠肽、特别是NT-proBNP指示心肌功能障碍，特别是心力衰竭，而关于所述参照值，减少量的利尿钠肽、特别是NT-proBNP指示不存在心肌功能障碍，特别是不存在心力衰竭。因此，在本发明方法的优选实施方案中，增加量的利尿钠肽、特别是NT-proBNP指示心肌功能障碍，特别是心力衰竭。在本发明方法的另一个优选实施方案中，减少量的利尿钠肽、特别是NT-proBNP 指示不存在心肌功能障碍，特别是不存在心力衰竭。
通常，在实施本发明的区分病理性和生理性左心室肥大的方法之前，通过本领域技术人员已知的方法诊断左心室肥大，通常通过听诊器检查和/或ECG和/或胸部χ射线和 /或超声心动图诊断。在优选的实施方案中，这些另外的诊断步骤是本发明的一部分。这也可以适用于本发明涉及区分不同形式的左心室肥大的其他方法、治疗决定和监测的方法。
本领域技术人员知晓前述区分不同形式的病理性肥大的方法。在已知具有病理性左心室肥大的受试者中，区分不同形式通常是成本高、费时的，并且需要医学技能和经验。 除上文提及的方法之外，诊断建立在病史、明显的心脏功能障碍迹象(例如，疲劳、昏晕(晕厥)、胸痛、呼吸短促、由异常心律(心律不齐)产生的不规律心跳(心悸)的感知)和生命体功能(例如，血压)检查的基础上。本发明人发现，基于在受试者的样品中测量至少一种标记的量，可以在患有病理性左心室肥大的受试者中区分病理性左心室肥大的不同形式(即，肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病或压力负荷过度型肥大)，例如，如从实施例中明显可见的。左心室肥大和肥大型心肌病可能或多或少地伴有严重形式的心肌功能障碍、左心室功能障碍或心力衰竭。两种术语都是本领域技术人员已知的。因此，本发明还涉及心脏病症，优选来自心肌功能障碍、左心室功能障碍或心力衰竭的组。术语“心肌功能障碍”用在本文中是一种通用术语，并且涉及心肌的严重病理性状态。心肌功能障碍可能是暂时性的病理性状态(例如，由缺血、毒性物质、酒精……引起)。 在去除潜在的病因之后，心肌功能障碍可能消失。在本发明的情形中，心肌功能障碍可以是无症状的心肌功能障碍。心肌功能障碍，特别是无症状的心肌功能障碍，也可能发展为心力衰竭。心肌功能障碍也可能是严重的慢性心力衰竭。通常，心肌功能障碍是心脏的受损的心脏收缩和/或心脏舒张功能，并且心肌功能障碍可以与或不与心力衰竭一起发生。任何前述心力衰竭都可能是无症状的。术语“心力衰竭”用在本文中是指心脏的受损的心脏收缩和/或心脏舒张功能。 优选地，本文所述的心力衰竭也是慢性心力衰竭。心力衰竭可以分类为纽约心脏学会(New York Heart Association, NYHA)的功能分类系统。NYHA I类患者没有明显的心血管病症状但是已经具有功能受损的客观证据。体力活动没有限制，并且普通的体力活动不会引起不适当的疲劳、心悸或呼吸困难(dyspnea)(呼吸短促)。NYHA II类患者具有轻微的体力活动限制。他们在休息时是舒服的，但是普通的体力活动导致疲劳、心悸、或呼吸困难。NYHA III类患者表现出明显的体力活动限制。他们在休息时是舒服的，但是比普通活动轻的活动引起疲劳、心悸、或呼吸困难。NYHA IV类患者不能不感觉到不适地进行任何体力活动。他们在休息时表现出心功能不全的症状。心力衰竭，即，心脏的受损的心脏收缩和/或心脏舒张功能，还可以例如通过超声心动图、血管造影术、闪烁照相术(szintigraphy)或磁共振成像来确定。这种功能受损可能伴有上述心力衰竭(NYHA II-IV类)的症状，尽管一些患者可能不表现出明显的症状(NYHA I)。此外，心力衰竭还明显表现为减小的左心室射血分数(LVEF)。更优选地，心力衰竭用在本文中还伴有小于60%、40% -60或小于40%的左心室射血分数(LVEF)。此外，按照本发明，并且关于前述参照值，增加量的⑶F-15指示在患者体内、优选在心肌中存在的炎性过程，而关于所述参照值，减少量的GDF-15指示不存在炎性过程。因此，在本发明方法的优选实施方案中，增加量的GDF-15指示炎性过程，而减少量的GDF-15 指示不存在炎性过程。此外，已经发现每种所述生物标记在统计学上彼此独立。优选地，本发明还涉及基于前述步骤决定对上述受试者的治疗的方法。因此，本发明的方法允许决定所述受试者应该服用哪种药物或哪几种药物或者所述受试者应该进行何种其他治疗，例如更加集中在治疗病理性左心室肥大(由动脉高血压、主动脉狭窄或肥大型心肌病中的一种或多种引起)，或更加集中在防止病理性左心室肥大的进一步恶化。
因此，本发明还提供决定用于治疗患有病理性左心室肥大的个体中的病理性左心室肥大的治疗法的方法，所述方法包括下述步骤
a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量，选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，
b)将在步骤a)中确定的所述标记的这样确定的量与适当的参照量进行比较，和
c)基于在步骤b)进行的比较，决定所述治疗法。
决定用于治疗患有病理性左心室肥大的个体中的病理性左心室肥大的治疗法的方法还可以包括下述步骤
a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量，选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，
b)通过将在步骤a)中确定的所述标记的这样确定的量与适当的参照量进行比较，而决定所述治疗法。
因此，本发明涉及决定用于治疗患有病理性左心室肥大的个体中的病理性左心室肥大的治疗法的方法，所述方法基于在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量、选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量和所确定的所述标记的量与参照量的比较。
本发明还包括选自坏死标记的至少一种标记、选自心脏功能标记的至少一种标记和选自炎性标记的至少一种标记在制备用于决定用于治疗患有病理性左心室肥大的个体中的病理性左心室肥大的治疗法的诊断剂中的应用。
在优选的实施方案中，所述心脏功能标记是利尿钠肽，更优选BNP或NT-proBNP， 特别是NT-proBNP ；优选地，所述炎性标记是⑶F-15 ；优选地，所述坏死标记选自肌钙蛋白T 和肌钙蛋白I，特别地，所述坏死标记是肌钙蛋白T。更优选地，以组合方式确定下述标记 NT-proBNP,⑶F-15和肌钙蛋白T，以及任选地还有P1GF。
在本发明这一方面的一个实施方案中，除了前述至少三种标记之外，还测量血管生成标记P1GF。通过这种方式，可以获得关于适当的治疗法的另外的信息。
按照本发明，并且关于上述参照值，减少量的PlGF指示抗血管生成状态，而关于所述参照值，增加量的PlGF表示促血管生成状态。血管生成(“促血管生成”)状态指示存在缺血状态或过程，而抗血管生成状态指示不存在缺血状态或过程。
在本发明的另一个实施方案中，前述公开的补充/互补性方法可以用于基于前述步骤的上述决定对受试者的治疗的方法。
术语“治疗”用在本发明的上下文中包括对机体的介入以及施用适当的药物来治疗左心室肥大，特别是由动脉高血压、主动脉狭窄或肥大型心肌病中的一种或多种引起的左心室肥大。适用于治疗左心室肥大的药物在本领域中是已知的，例如，参见Heart Disease (病)，2005，第 7 片反，Eds. Braunwald, Elsevier Sounders, JAL^: 23-1, 23-6, 23-7，23-8，23-9，23-10，其通过引用结合于此并且是本发明的一部分。优选地，施用所述药物目的在于治疗由动脉高血压、主动脉狭窄或肥大型心肌病中的一种或多种引起的左心室肥大的症状和迹象，并且目的是防止左心室肥大的进一步进展。因此，还考虑目的在于治疗左心室功能障碍和/或心力衰竭的药物、抗炎药。
治疗还可以包括介入。在本发明的情形中，一种优选的介入是在梗阻性肥大型心肌病情形中，通过醇(消融)、特别是TASH(间隔肥大的经冠状动脉消融(transcoronary ablation of septum hypertrophy))或(经皮经腔间隔心肌消融)对心肌区域的控制性破坏。
另一种优选的介入是在主动脉狭窄的情形中进行主动脉瓣置换(AVR)。
因此，本发明还包括决定对患有肥大型心肌病的患者的治疗的方法。术语“决定” 用在本文中意指评估某种药物或治疗是否应该施用给已经进行本发明所述的检测的受试者。所述治疗选自下述
治疗A)
a)改变生活方式，特别是低钠摄入
b)施用一种或多种影响心脏功能的药剂，优选为β阻断剂，如proprenolol， 美托洛尔(metoprolol)，比索洛尔(bisoprolol)，卡维地洛(carvedilol)，布新洛尔(bucindolol)，奈必洛尔(nebivolol)；硝酸盐；肾上腺素能激动剂(adrenergic agonists)，如多巴酚丁胺(dobutamine)，多巴胺(dopamine)，肾上腺素(印in印hrine)， isoprotenerol,去甲肾上腺素(norepinephrine)，苯肾上腺素(phenylephrine)；增强肌收缩力药剂(positive inotropic agents)，如地高辛(digoxin)，洋地黄毒苷 (digitoxin)；利尿剂(diuretics)，特别是髓袢利尿剂(loop diuretics)，噻嗪类和噻嗪样利尿剂，K-sparing利尿剂，I型盐皮质激素受体拮抗剂(mineralocorticoid receptor antagonists)，碳酸酐酶抑制剂(carbonic anhydrase inhibitors)，血压拮抗齐[J (vasopressure antagonists)。
通过测量到升高水平的心脏功能标记，优选利尿钠肽，提供是否应该施用这些药剂的信息。适当的利尿钠肽是BNP，NT-proBNP, ANP, NT-proANP ；优选BNP或NT-proBNP，特别是 NT-proBNP。
在NT-proBNP的情形中，当达到彡约300pg/ml，优选彡约500pg/ml，更优选彡约 800pg/ml，还更优选>约2000 8/!111的利尿钠肽水平时应该施用一种或多种上述药物。还优选地，参照量是对应于确定的患有肥大型心肌病的患者集体的第50百分位数或第75百分位数的利尿钠肽的量。
利尿钠肽的水平，特别是前述NT-proBNP的水平(彡约300pg/ml，优选彡约 500pg/ml，更优选彡约800pg/ml，还更优选彡约2000pg/ml)还可以指示，在梗阻性肥大型心肌病的情形中，应该进行消融，特别是TASH。诊断梗阻性肥大型心肌病因此必须通过本领域技术人员已知的方法建立，如心音、超声心动图、心电图学(ECG)、胸部χ-射线和/或心导管插入术；或通过本申请公开的方法建立，例如形成心脏功能标记(NT-proBNP)和炎性标记(GDF-15)之间的比值。
治疗B)
施用一种或多种抗炎药物，优选为ACE抑制剂，特别是依那普利(Enalapril)， 卡托普禾IJ (Captopril)，雷米普利(Ramipril)，群多普利(Trandolapril)；血管紧张素受体拮抗齐Ll (angiotensin receptor antagonists)禾口酸固酮拮抗齐[J (aldosterone antagonists)，特别是氯沙坦(Losartan)，缬沙坦(Valsartan)，厄贝沙坦(Irbesartan)， 坎地沙坦(Candesartan)，替米沙坦(Telmisartan)，依普罗沙坦(Eprosartan)，螺内酯(Spironolactone)；他汀类(statines)，特别是阿托伐他汀(Atorvastatin)，氟伐他汀(Fluvastatin)，洛伐他汀(Lovastatin)，普伐他丁(I^ravastatin)，瑞舒伐他汀 (Rosuvastatin),辛伐他汀(Simvastatin)；
如果测量到升高水平的炎性标记，优选指示炎性过程的⑶F-15，则提供这些药剂是否应该施用的信息。
当达到彡约800pg/ml，优选彡约1200pg/ml，更优选彡约1500pg/ml，特别是彡约 2000pg/ml的⑶F-15水平时，应该施用一种或多种上述药物。还优选地，参照量是对应于确定的患有肥大型心肌病的患者集体的第50百分位数或第75百分位数的⑶F-15的量。
治疗C)
经皮冠状动脉介入的治疗通常，坏死标记、优选肌钙蛋白I和/或T、特别是肌钙蛋白T的水平指示存在心肌坏死和坏死的程度；如果没有观察到肌钙蛋白T或肌钙蛋白I 的水平下降，那么该肽表示心力衰竭和/或血管狭窄；血管狭窄可以通过经皮冠状动脉介入治疗。
如果测量到指示心力衰竭或血管狭窄的 >约3pg/ml，优选>约4pg/ml，特别是> 约5pg/ml的升高水平的肌钙蛋白I和/或肌钙蛋白T，特别是肌钙蛋白T，则提供是否应该施用这些药剂的信息。还优选地，参照量是对应于确定的患有肥大型心肌病的患者集体的第50百分位数或第75百分位数的肌钙蛋白I或肌钙蛋白T的量。
治疗D)
施用至少一种用于促血管生成治疗的药物
上文引用的术语“促血管生成治疗”是指在受试者中系统或局部诱发或增强血管生成过程的治疗，并且包括微血管病和大血管病的治疗。优选地，所述促血管生成治疗包括施用促血管生成药，优选，选自由下列各项组成的组VEGF，P1GF，内皮因子，抗-Flt-I抗体和ALK5修饰剂。这些药物可以用于微血管病和大血管病的治疗。
术语“易受影响的”用在本文中意指通过本方法鉴定为易受影响的受试者中统计学显著部分的受试者响应所考虑的治疗，其在受影响的心脏区域表现出血管生成。
如果测量到表示抗血管生成过程的升高(降低)水平的P1GF，则提供是否应该施用这些药剂的信息。
在前述方法的优选实施方案中，增加量的PLGF将受试者鉴定为是易受促血管生成治疗影响的。
当达到彡约8pg/ml，优选彡约10pg/ml，更优选彡约12pg/ml，特别是彡约15pg/ml 的PlGF水平时，应该施用一种或多种上述药物。还优选地，参照量是对应于确定的患有肥大型心肌病的患者集体的第50百分位数或第75百分位数的PlGF的量。
本发明还涉及监测治疗患有病理性左心室肥大的个体中的病理性左心室肥大的治疗法的方法，所述方法包括下述步骤
a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量，选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，
b)将在步骤a)中确定的所述标记的这样确定的量与适当的参照量进行比较，和
c)基于在步骤b)中进行的比较，根据具体情况而定，改变或中断所述治疗法。
本发明还涵盖使用上文定义的选自坏死标记的至少一种标记、选自心脏功能标记的至少一种标记和选自炎性标记的至少一种标记来监测治疗患有病理性左心室肥大的个体中的病理性左心室肥大的治疗法。
步骤b)中所述的参照量可以是在本申请中关于前述A)，B)，C)和D)的治疗决定所述的参照量，或者可以是在开始治疗法之前确定的量，或者可以是这二者。
关于所述坏死标记，优选肌钙蛋白I或肌钙蛋白T，特别是肌钙蛋白T，偏离相对应的参照量约10 %，约20 %，约30 %，约40 %或约50 %，特别是约20 %，指示个体的病理性状态的改善(在标记量减少的情形中)或恶化(在标记量增加的情形中)。
关于所述心脏功能标记，优选利尿钠肽，优选BNP或NT-proBNP，特别是 NT-proBNP,偏离相对应的参照量约10 %，约20 %，约30 %，约40 %或约50 %，特别是约 20%，指示个体的病理性状态的改善(在标记量减少的情形中)或恶化(在标记量增加的情形中)。
在本申请的一个实施方案中，利尿钠肽，优选BNP或NT-proBNP，特别是 NT-proBNP，作为监测个体中的TASH治疗的标记。本申请的发明人可以确定，在成功TASH 介入后，利尿钠肽，优选BNP或NT-proBNP，特别是NT-proBNP的水平显著减少。偏离相对应的参照量约10 %，约20 %，约30 %，约40 %或约50 %，特别是约20 %，指示成功的TASH介入。
关于所述炎性标记，特别是⑶F-15，偏离相对应的参照量约10%，约20%，约 30 %，约40 %或约50 %，特别是约20 %，指示个体的病理性状态的改善(在标记量减少的情形中)或恶化(在标记量增加的情形中)。
本发明人发现基于样品中至少一种标记的量的测量，可以决定对各种形式的病理性左心室肥大(即，肥大型非梗阻性心肌病，肥大型梗阻性心肌病或压力负荷过度型肥大) 的治疗，并且监测所述治疗，而不必涉及本领域技术人员已知的且在本说明书其他地方公开的成本高且费时的诊断方法。
在本发明的一个实施方案中，除了前述至少三种标记之外，还测量血管生成标记 P1GF。通过这种方式，可以获得关于个体的病理性状态和治疗法成功的另外的信息。
关于P1GF，偏离相对应的参照量约10 %，约20 %，约30 %，约40 %或约50 %，特别是约20%，指示个体的病理性状态的改善(在标记量减少的情形中)或恶化(在标记量增加的情形中)。
在本发明的优选实施方案中，通常，在实施本发明的监测方法之前，实施决定治疗左心室肥大的治疗法的方法。
确定心脏功能标记，优选利尿钠肽，坏死标记，优选心脏肌钙蛋白，炎性标记，优选 GDF-15，或血管生成标记，优选P1GF，或本说明书中涉及的任何其他肽或多肽的量涉及测量量或浓度，优选半定量地或定量地测量。测量可以直接或间接进行。直接测量涉及基于获自肽或多肽本身的信号(并且信号的强度与样品中存在的肽的分子数直接相关)而测量该肽或多肽的量或浓度。这样的信号，一一有时在本文中称为强度信号一一可以例如通过测量该肽的特异性物理或化学特性的强度值而获得。间接测量包括测量获自第二成分(即， 不是肽或多肽本身的成分)或生物学读出系统的信号，例如，可测量的细胞响应、配体、标记物、或酶反应产物。
术语“样品”是指体液样品、分离的细胞的样品或来自组织或器官的样品。体液样品可以通过公知的技术获得，并且优选包括血液、血浆、血清、尿样品，血液、血浆或血清样品。应该理解，所述样品依赖于待确定的标记。因此，包括在不同样品中确定本文所述的多肽。优选的，在血清或血浆样品中确定心脏肌钙蛋白和利尿钠肽。
按照本发明，确定肽或多肽的量可以通过所有已知用于确定样品中的肽量的方式实现。所述方式包括可以使用采用各种夹心、竞争、或其他测定形式的标记分子的免疫测定装置和方法。所述测定法将显现指示肽或多肽的存在或不存在的信号。此外，优选地，信号强度可能与样品中存在的多肽量直接或间接(例如，反比例)相关。其他适合的方法包括测量肽或多肽特异性的物理或化学特性，诸如其精确分子量或NMR谱。优选地，所述方法包括生物传感器，与免疫测定偶联的光学装置，生物芯片，分析装置，如质谱仪，NMR分析仪， 或色谱装置。此外，方法包括基于微量平板ELISA的方法，完全自动化或机器人免疫测定法 (例如，可在Elecsys 分析仪上实现)，CBA (酶钴结合测定法(enzymatic Cobalt Binding Assay)，例如，可在Roche-Hitachi 分析仪上实现)，和胶乳凝集反应测定法(例如，可在 Roche-Hitachi 分析仪上实现)。
优选地，确定肽或多肽的量包括下述步骤(a)将能够引发细胞反应的细胞与所述肽或多肽接触足够的时间期间，所述细胞反应的强度指示所述肽或多肽的量，(b)测量所述细胞反应。为了测量细胞反应，优选地，将样品或处理的样品添加到细胞培养物中，并且测量内部或外部细胞反应。细胞反应可以包括报告基因的可测量的表达或物质的分泌，所述物质例如肽、多肽、或小分子。所述表达或物质应该产生与肽或多肽的量相关的强度信号。
还优选地，确定肽或多肽的量包括测量样品中可获自所述肽或多肽的特异性强度信号的步骤。如上述，这样的信号可以是在对肽或多肽特异性的质谱或NMR谱中观察到的以肽或多肽特异性的m/z变量观察到的信号强度。
优选地，确定肽或多肽的量可以包括下述步骤(a)使所述肽与特异性配体接触， (b)(任选地)去除未结合的配体，(c)测量结合的配体的量。结合的配体将产生强度信号。 本发明所述的结合包括共价和非共价结合。本发明所述的配体可以是与本文所述的肽或多肽结合的任何化合物，例如，肽，多肽，核酸，或小分子。优选的配体包括抗体、核酸、肽或多肽，诸如关于所述肽或多肽的受体或结合配偶体及其包含关于所述肽的结合结构域的片段，和适体，例如核酸或肽适体。制备所述配体的方法在本领域中是公知的。例如，商业供应商还提供适当的抗体或适体的鉴定和生产。本领域技术人员熟悉用来开发具有更高亲和性或特异性的所述配体的衍生物。例如，可以向核酸、肽或多肽中引入随机突变。然后，可以按照本领域已知的筛选方法，例如，噬菌体展示，检测这些衍生物。本文所涉及的抗体包括多克隆和单克隆抗体，及其能够结合抗原或半抗原的片段，诸如Fv，Fab和F(ab)2片段。 本发明还包括单链抗体和人源化杂合抗体，其中表现出需要的抗原特异性的非人供体抗体的氨基酸序列与人接纳体抗体的序列组合。供体序列通常至少包括供体的抗原结合氨基酸残基，还可以包含供体抗体的其他结构和/或功能相关的氨基酸残基。所述杂合物可以通过数种本领域公知的方法制备。优选地，所述配体或试剂特异性结合肽或多肽。本发明所述的特异性结合意指所述配体或试剂应该不实质性结合(“交叉反应”)待分析样品中存在的另一种肽、多肽或物质。优选地，与任意其他相关的肽或多肽相比，特异性结合的肽或多肽应该以高至少3倍、更优选至少10倍且甚至更优选至少50倍的亲和力结合。非特异性结合可以容忍，条件是其可以明确地区分和测量，例如，依据其在蛋白质印记上的尺寸，或通过其在样品中相对高的丰度区分和测量。配体的结合可以通过本领域已知的任何方法测量。优选地，所述方法是半定量的或定量的。适当的方法记述在下文中。
第一，配体的结合可以直接测量，例如，通过NMR或表面等离子共振。
第二，如果配体还作为目的肽或多肽的酶活性的底物，可以测量酶反应产物(例如，蛋白酶的量可以通过测量分解的底物的量来测量，例如，在蛋白质印记上测量)。备选地，所述配体本身可以表现出酶特性，并且“配体/肽或多肽”复合物或分别结合肽或多肽的配体可以与适当的底物接触，所述底物允许通过产生强度信号进行检测。为了测量酶反应产物，优选底物的量是饱和的。底物还可以在反应之前用可检测的标记物标记。优选地， 将样品与底物接触足够的时间期间。足够的时间期间是指产生可检测的量、优选可测量的量的产物所需要的时间。替代测量产物的量，可以测量出现给定(例如，可检测的)量的产物所需要的时间。
第三，配体可以与允许检测和测量所述配体的标记物共价或非共价偶联。标记可以通过直接方法或间接方法进行。直接标记包括将标记物直接(共价或非共价)偶联到配体上。间接标记包括将第二配体与第一配体结合(共价或非共价结合)。所述第二配体应该特异性结合第一配体。所述第二配体可以与适当的标记物偶联和/或是结合该第二配体的第三配体的靶标(受体)。第二、第三或甚至更高次序的配体的使用通常增加信号。适当的第二配体和更高次序的配体可以包括抗体、二级抗体、和公知的链霉抗生物素蛋白-生物素系统(载体实验室公司(Vector Laboratories，he.))。配体或底物还可以用一种或多种本领域已知的标签进行标记。所述标签可以是更高次序的配体的靶标。适当的标签包括生物素、洋地黄毒苷、His-标签、谷胱甘肽-S-转移酶、FLAG、GFP、myc-标签、流感A病毒凝血素(HA)、麦芽糖结合蛋白等。在肽或多肽的情形中，标签优选在N端和/或C 端。适当的标记物是任意可通过适当的检测方法检测的标记物。典型地标记物包括金颗粒、 胶乳珠、9，10- 二氢化吖啶酯、鲁米诺、钌、酶活性标记物、放射性标记物、磁性标记物("例如磁珠“，包括顺磁和超顺磁标记物)、和荧光标记物。酶活性标记物包括，例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β半乳糖苷酶、萤光素酶、以及它们的衍生物。适用于检测的底物包括二氨基联苯胺(DAB)，3，3' -5,5'-四甲基联苯胺，NBT-BCIP (4-氮蓝四唑氯化物和 5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸，可从Roche Diagnostics (罗氏诊断)作为已经制备的储液获得)，CDP1tar (安玛西亚生物科学(Amersham Biosciences))，ECF (安玛西亚生物科学(Amersham Biosciences))。适当的酶-底物组合可以导致有色反应产物、荧光或化学发光，其可以按照本领域已知的方法测量(例如，使用光敏膜或适当的照相系统测量)。关于测量酶反应，类似使用上文给出的标准。典型的荧光标记包括荧光蛋白(如GFP及其衍生物)，Cy3，Cy5，Texas Red，荧光素，和Alexa染料(例如，Alexa 568)。其他荧光标记物可从例如Molecular Probes (分子探针，Oregon)获得。还考虑使用量子点作为荧光标记物。典型的放射性标记物包括35S，125I，32P，33P等。放射性标记物可以通过任何已知的和适当的方法检测，例如，光敏膜或磷光体成像仪检测。本发明所述的适当的测量方法还包括沉淀(特别是免疫沉淀)、电化学发光(电产生的化学发光)、RIA (放射免疫测定)、ELISA (酶联免疫吸附测定)、夹心酶免疫检测、电化学发光夹心免疫测定(ECLIA)、解离增加的镧系元素氟免疫测定(DELFIA)、闪烁迫近测定(SPA)、比浊法、浊度法、胶乳增强的比浊法或浊度法、 或固相免疫检测。本领域已知的其他方法(诸如凝胶电泳、2D凝胶电泳、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹法、和质谱)可以单独或与上述标记或其他检测方法组合使用。
还优选地，肽或多肽的量可以如下确定(a)将包括关于上述肽或多肽的配体的固体支持物与包含所述肽或多肽的样品接触，和(b)测量与所述固体支持物结合的肽或多肽的量。优选选自由核酸、肽、多肽、抗体和适体组成的组的所述配体优选以固定形式存在于固体支持物上。用于制备固体支持物的材料在本领域中是公知的，并且特别包括商购的柱材料、聚苯乙烯珠、胶乳珠、磁珠、胶质金属颗粒、玻璃和/或硅片和表面、硝基纤维素条带、膜、薄板、duracytes、反应托盘的孔和壁、塑料管等。配体或试剂可以与多种不同的载体结合。公知的载体的实例包括玻璃、聚苯乙烯、聚乙烯氯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、葡聚糖、尼龙、直链淀粉、天然和改性的纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖、和磁石。为了本发明的目的，载体的性质可以是可溶的或不可溶的。适用于固定(fixing/immobilizing)所述配体的方法是公知的，并且包括但不限于，离子、疏水、共价相互作用等。还考虑使用“混悬阵列” 作为本发明所述的阵列(Nolan 2002, Trends Biotechnol.(生物技术趋势)20(1) :9_12)。 在所述混悬阵列中，载体，例如，微珠或微球体存在于混悬液中。所述阵列由不同的微珠或微球体组成，所述微珠或微球体可能被标记，携带不同的配体。制备所述阵列的方法，例如， 基于固相化学和光分解保护基团，通常是已知的(US 5，744，305)。
术语“量”用在本文中包括多肽或肽的绝对量，所述多肽或肽的相对量或浓度以及与其相关或可以来源于其的任意值或参数。所述值或参数包括通过直接测量，例如，质谱或 NMR谱中的强度值，由所述肽获得的来自于所有特异性物理或化学特性的强度信号值。此外，包括通过本说明书中其他地方详细说明的间接测量获得的所有值或参数，例如由生物读出系统确定的响应肽的响应水平或获自特异性结合的配体的强度信号。应该理解，与前述量或参数相关的值还可以通过标准数学运算获得。
术语“比较”用在本文中包括将待分析样品所包括的肽或多肽的量与本说明书中其他地方详细说明的适当的参照源的量进行比较。应该理解，比较用在本文中是指比较相对应的参数或值，例如，绝对量与绝对参照量比较，而浓度与参照浓度比较或获自检测样品的强度信号与参照样品相同类型的强度信号比较。在本发明的方法的步骤(b)中涉及的比较可以人工进行或计算机辅助进行。对于计算机辅助的比较，可以通过计算机程序将确定量的值与存储在数据库中的对应于适当的参照的值比较。计算机程序可以进一步评估比较结果，即，自动以适当的输出格式提供所需要的评估。基于在步骤a)中确定的量与参照量的比较，可以评估受试者是否是易受心脏治疗法影响的，并且因此，属于可以通过所述心脏治疗法成功治疗的一组受试者。因此，这样选择参照量，以使在所比较的量中的不同或相似性允许鉴定属于易受心脏治疗法影响的受试者组的那些测试受试者或鉴定不易受心脏疗法影响的那些测试受试者。
本发明还包括用于在具有左心室肥大的受试者中诊断或区分所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大的设备(device)；或用于在患有病理性左心室肥大的受试者中区分所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大的设备，所述设备包括
a)用于确定下述肽的量的装置(means)
坏死标记，优选肌钙蛋白或其变体；
心脏功能标记，优选利尿钠肽或其变体；
炎性标记，优选⑶F-15或其变体；和任选地用于确定PlGF或其变体的量的装置；
b)用于比较在步骤a)中确定的量与参照量的装置，由此诊断左心室肥大的病理机制。
依据通过本发明的设备可获得的结果，可以进行调整治疗的决定。例如，可以通过增加或减少所施用的药物的量而调整治疗。
本发明还包括用于决定对患有病理性左心室肥大的受试者的治疗法的设备，所述设备包括
a)用于确定下述肽的量的装置
坏死标记，优选肌钙蛋白或其变体；
心脏功能标记，优选利尿钠肽或其变体；
炎性标记，优选⑶F-15或其变体；和任选地用于确定PlGF或其变体的量的装置； 和
b)用于比较在步骤a)中确定的量与参照量的装置，由此诊断左心室肥大的病理机制，
由此调整所述装置以进行上述本发明的方法。
术语“设备(device) ”用在本文中是指至少包括前述装置(means)的装置系统， 所述前述装置彼此可操作地连接，从而允许进行预测。用于确定前述多肽之一的量的优选装置以及用于实行所述比较的装置与本发明的方法相联系公开在上文中。如何以操作方式连接所述装置取决于包括在设备中的装置类型。例如，在应用自动确定肽量的装置的情形中，通过所述自动操纵装置获得的数据可以通过例如计算机程序处理，以获得所需要的结果。优选地，在这样的情形中，装置包括在单一设备中。所述设备可以相应地包括用于测量所应用的样品中的肽或多肽量的分析部件，和用于处理所得到的数据进行评估的计算机部件。优选地，所述计算机部件包含包括下列各项的数据库在本说明书其他地方引用的存储的参照量或其值，以及计算机执行的算法，其用于实行确定的多肽量与数据库存储的参照量的比较。计算机执行的用在本文中是指确实包含在计算机部件中的计算机可读的程序代码。备选地，在使用诸如检测条带的装置来确定肽或多肽的量的情形中，用于比较的装置可以包括为所确定的量指定参照量的对照条带或表格。优选地，检测条带与特异性结合本文涉及的肽或多肽的配体偶联。所述条带或设备优选地包括用于检测所述肽或多肽与所述配体的结合的装置。优选的检测装置与上述涉及本发明的方法的实施方案相联系公开。在这样的情形中，所述装置可操作地连接，以使系统的使用者将量的确定结果与其由人工给出的指示和解释得到的诊断或预测值放置在一起。在这样的实施方案中，所述装置可以作为分开的设备而存在，并且优选地一起包装为试剂盒。本领域技术人员知晓如何没有其他麻烦地连接装置。优选地设备是可以无需专业临床医师的特定知识而应用的那些，例如，仅需要上样样品的检测条带或电子设备。结果可以作为需要临床医师解释的原始数据的输出而给出。然而，优选地，设备的输出是经处理的(即，评估的)原始数据，使其解释不需要临床医师。其他优选的设备包括分析部件/设备(例如，生物传感器、阵列、与特异性识别利尿钠肽的配体偶联的固体支持物、表面等离子体共振设备、NMR分光计、质谱仪等)和/或上述本发明的方法所涉及的评估部件/设备。
此外，本发明涉及用于监测患有病理性左心室肥大心肌病的受试者中的治疗法的设备，所述设备包括
a)用于确定下述肽的量的装置
坏死标记，优选肌钙蛋白或其变体；
心脏功能标记，优选利尿钠肽或其变体；
炎性标记，优选⑶F-15或其变体；和任选地用于确定PlGF或其变体的量的装置； 和
b)用于比较在步骤a)中确定的量与参照量的装置，由此诊断左心室肥大的病理机制，
由此调整所述设备以实行上文涉及的本发明的方法。
本发明还涉及前述一种设备或多种设备用于下述的应用
在具有左心室肥大的受试者中诊断或区分所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大；或用于
在患有病理性左心室肥大的受试者中区分所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大；或用于
决定和/或监测在患有病理性左心室肥大的受试者中的治疗法。
此外，本发明涉及适合实行上文涉及的本发明的方法的试剂盒，所述试剂盒包括
a)用于确定下述肽的量的装置
坏死标记，优选肌钙蛋白或其变体；
心脏功能标记，优选利尿钠肽或其变体；
炎性标记，优选⑶F-15或其变体；和任选地用于确定PlGF或其变体的量的装置； 和
b)用于比较在步骤a)中确定的量与参照量的装置，由此诊断左心室肥大的病理机制，
其中所述试剂盒适合实行上述本发明的方法。优选地，所述试剂盒包括用于实行所述本发明的方法的使用说明。
术语“试剂盒”当用在本文中时是指前述装置的集合，优选地，提供在分开的或单个容器内。所述容器还优选地包括用于实行本发明的方法的使用说明。
本发明还涉及前述一种试剂盒或多种试剂盒用于下述的应用
在具有左心室肥大的受试者中诊断或区分所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大；或用于
在患有病理性左心室肥大的受试者中区分所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大；或用于
决定和/或监测在患有病理性左心室肥大的受试者中的治疗法。
本发明还涉及下列各项用于制备诊断组合物的应用针对选自坏死标记的至少一种标记、选自心脏功能标记的至少一种标记和选自炎性标记的至少一种标记的抗体和/或用于确定选自坏死标记的至少一种标记的量、选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量的装置和/或用于比较选自坏死标记的至少一种标记的量、选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量与至少一种参照量的装置，所述诊断组合物用于诊断受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大；在患有病理性左心室肥大的受试者中区分所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大；在患有病理性左心室肥大的受试者中区分所述受试者一方面是患有肥大型非梗阻性心肌病还是另一方面是患有选自肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的心肌病；决定用于治疗患有病理性左心室肥大的受试者中的所述病理性左心室肥大的治疗法，和/或监测治疗患有病理性左心室肥大的受试者中的所述病理性左心室肥大的治疗法。
本发明还涉及下列各项的应用选自坏死标记的至少一种标记、选自心脏功能标记的至少一种标记和选自炎性标记的至少一种标记和/或用于确定选自坏死标记的至少一种标记的量、选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量的装置和/或用于比较选自坏死标记的至少一种标记、选自心脏功能标记的至少一种标记和选自炎性标记的至少一种标记的量与至少一种参照量的装置，所述应用为诊断受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大；在患有病理性左心室肥大的受试者中区分所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大；在患有病理性左心室肥大的受试者中区分所述受试者一方面是患有肥大型非梗阻性心肌病还是另一方面是患有选自肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的心肌病；决定用于治疗患有病理性左心室肥大的受试者中的所述病理性左心室肥大的治疗法， 和/或监测治疗患有病理性左心室肥大的受试者中的所述病理性左心室肥大的治疗法。
还提供用于诊断患者中的心肌梗死的方法，所述方法包括下述步骤
a)确定所述患者的样品中的心脏肌钙蛋白或其变体的量；
b)将所测量的心脏肌钙蛋白或其变体的量与参照量进行比较；
由此步骤b)获得的结果指示所述患者是否患有心肌梗死。
优选地，本发明的方法包括下述步骤a)确定患者的样品中的心脏肌钙蛋白或其变体的量；b)将所测量的心脏肌钙蛋白或其变体的量与参照量进行比较；和C)诊断所述患者是否患有心肌梗死。
本发明的另一个实施方案涉及用于诊断患者中的心力衰竭的方法，所述方法包括下述步骤
a)确定所述患者的样品中的利尿钠肽的量或其变体的量；
b)将所测量的利尿钠肽的量或其变体的量与参照量进行比较；
由此步骤b)获得的结果指示所述患者是否患有心力衰竭。
优选地，本发明的方法包括下述步骤a)确定患者的样品中的利尿钠肽的量或其变体的量；b)将所测量的利尿钠肽的量或其变体的量与参照量进行比较；和C)诊断所述患者是否患有心力衰竭。
本说明书中引用的所有参考文献通过引用将其全部的公开内容和本说明书中特别提及的公开内容结合在本文中。
下述实施例仅是举例说明本发明。无论如何，它们不应该解释为限制本发明的范围。实施例
方法
肌钙蛋白T使用罗氏电化学发光ELISA夹心检测Elecsys肌钙蛋白T hs (高灵敏性)STAT Ghort Turn Around Time)测定法进行测量。该检测使用两种特异性针对人心脏肌钙蛋白T的单克隆抗体。所述抗体识别位于心脏肌钙蛋白T蛋白中心部分的两个表位 (氨基酸位置125-131和136-147)，心脏肌钙蛋白T蛋白由288个氨基酸组成。
NT-proBNP 使用罗氏电化学发光 ELISA 夹心检测 Elecsys proBNP II STAT (Short Turn Around Time)测定法来确定。该检测使用识别位于proBNP(1-108)的N端部分(1_76) 的表位。
为了确定血清和血浆样品中的⑶F-15浓度，开发使用来自R&D Systems (R&D系统)(AF957)的多克隆、⑶F-15亲和层析纯化的山羊抗-人⑶F_15IgG抗体Elecsys原型检测。在每次实验中，用来自R&D系统(957-GD/CF)的重组人⑶F-15产生标准曲线。在标准血浆样品中用新批次或重组GDF-15蛋白检测结果，并且通过引入关于该测定法的调整因子而校正任何高于10%的偏离。在校正最终稀释因子后，来自同一患者的血清和血浆样品中的GDF-15测量产生实质上相同的结果。该测定法的检测界限是200pg/ml。
PlGF 使用罗氏电化学发光 ELISA 夹心检测 Elecsys PlGF STAT (Short Turn Around Time)测定法来确定。该检测使用两种单克隆人PlGF特异性抗体(生物素化的单克隆抗体和用钌复合物标记的抗体)。
实施例1
在运动员的运动训练期间过程中(即，不在训练定期中止或相对于正常训练期间训练程度减少的假期等过程中)，检查12名具有生理性左心室肥大的健康竞技运动员集体。在检查过程中，确定NT-proBNP、⑶F-15和肌钙蛋白T的水平。发现下述结果
GDF-15 :397pg/ml 中值；(第 25 百分位数:360pg/ml ；第 75 百分位数:442pg/ml)
NT-proBNP :15，72pg/ml 中值；(第 25 百分位数:6，48pg/ml ；第 75 百分位数19， 68pg/ml)
肌钙蛋白T :3，94pg/ml中值；(第25百分位数3，30pg/ml ；第75百分位数6， 77pg/ml)
该值明显低于在患有病理性左心室肥大的受试者中确定的那些值(见实施例2)， 并且令人惊讶地表明，基于上述标记检测，可以区分患有生理性左心室肥大的健康个体与具有病理性肥大的那些个体。
实施例2:
在怀疑患有心脏病的个体中，通过ECG检查发现左心室肥大迹象。所有个体具有超过60ml/min的肾小球滤过率(GFR)，具有肾性高血压的患者不包括在该研究中。
然后，通过超声心动图和确定血压来诊断高血压性左心室肥大(在排除主动脉狭窄之后)。
通过排除可能是左心室肥大的基础(动脉高血压，见上文；主动脉狭窄和运动员心脏；未进行验证存在肥大型心肌病的遗传检测)的其他已知的原因，而诊断肥大型心肌病。在这些个体中，如果左心室流出梯度高于30mm Hg，则诊断为梗阻性肥大型心肌病。
在所有个体中，采集血液样品，并且如在实施例1中所述，确定血清样品中各种肽的量/水平。
诊断怀疑患有进展性疾病的患有梗阻性肥大型心肌病并且药物治疗法难以治愈的患者，在先验证补给血管的闭合后，通过消融进行治疗。在介入之前和介入后6个月采集血液样品。
权利要求
1.用于在具有左心室肥大的受试者中诊断或区分所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大的方法，所述方法包括下述步骤a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量，选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，b)将在步骤a)中确定的所述标记的量与适当的参照量进行比较，和c)诊断所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大。
2.根据权利要求1的方法，其中所述坏死标记是肌钙蛋白I或T或其变体。
3.根据权利要求1或2的方法，其中所述心脏功能标记是BNP-型标记，优选BNP或 NT-proBNP或其变体。
4.根据权利要求1-3中任一项的方法，其中所述炎性标记是GDF-15或其变体。
5.根据权利要求1-4中任一项的方法，其中下述值指示受试者具有病理性左心室肥大心脏肌钙蛋白或其变体，优选肌钙蛋白I或肌钙蛋白T或其变体，特别是肌钙蛋白T或其变体>约5pg/ml ；利尿钠肽，优选BNP或NT-proBNP或其变体，特别是NT-proBNP或其变体>约75pg/ml ；炎性标记，优选⑶F-15 :>约600pg/ml。
6.根据权利要求1-5中任一项的方法，其中所述心脏肌钙蛋白是肌钙蛋白T或其变体， 所述利尿钠肽是NT-proBNP或其变体，并且所述炎性标记是⑶F-15或其变体。
7.用于在患有病理性左心室肥大的受试者中区分所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大的方法，所述方法包括下述步骤a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自心脏功能标记的至少一种标记的量，选自坏死标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，b)将在步骤a)中确定的量与参照量进行比较，和c)依据步骤b)的结果，区分肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大。
8.用于在患有病理性左心室肥大的受试者中区分所述受试者一方面是患有肥大型非梗阻性心肌病还是另一方面患有选自肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的心肌病的方法，所述方法包括下述步骤a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，b)形成在步骤a)中确定的心脏功能标记和炎性标记之间的比值，c)将步骤b)中确定的比值与参照比值进行比较，和d)依据步骤c)的结果，区分一方面的肥大型非梗阻性心肌病和另一方面的选自肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的心肌病。
9.根据权利要求8的方法，其中所述心脏功能标记是利尿钠肽，优选BNP或NT-proBNP 或其变体，特别是NT-proBNP或其变体，并且所述炎性标记是⑶F-15或其变体。
10.根据权利要求8或9的方法，其中指示存在肥大型非梗阻性心肌病的NT-proBNP/ GDF-15比值是彡约0. 43，优选彡0. 43的值。
11.根据权利要求8-10中任一项的方法，其中指示存在肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的NT-proBNP/⑶F-15比值是至多约0. 43、优选< 0. 43的值。
12.用于在患有病理性左心室肥大的受试者中区分所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大的方法，所述方法包括下述步骤a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，b)形成在步骤a)中确定的所述坏死标记和炎性标记之间的比值，c)将在步骤c)中确定的比值量与参照比值进行比较，和d)依据步骤c)的结果，区分肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大。
13.根据权利要求12的方法，其中所述坏死标记是肌钙蛋白T或肌钙蛋白I或其变体， 优选肌钙蛋白T或其变体，并且所述炎性标记是GDF-15或其变体。
14.根据权利要求12或13的方法，其中指示存在肥大型非梗阻性心肌病的肌钙蛋白 T/GDF-15比值是彡约0. 01的值，优选彡0. 01的值。
15.根据权利要求12-14中任一项的方法，其中指示存在肥大型梗阻性心肌病和压力负荷过度型肥大的肌钙蛋白T/⑶F-15比值是彡约0. 004的值，优选彡0. 004的值。
16.根据权利要求12-15中任一项的方法，其中指示存在压力负荷过度型肥大的肌钙蛋白T/⑶F-15比值是>约0. 004至<约0. 01范围的值。
17.根据权利要求7-16中任一项的方法，其中另外确定PlGF或其变体的量。
18.用于诊断受试者的肥大型梗阻性心肌病的方法，所述方法包括确定受试者样品中 PlGF或其变体的量，其中升高量的PlGF或其变体指示肥大型梗阻性心肌病。
19.根据权利要求17或18的方法，其中彡约12.4pg/ml，优选彡约15. Opg/ml，特别是彡约16. 7pg/ml的PlGF值指示肥大型梗阻性心肌病。
20.决定用于治疗患有病理性左心室肥大的受试者中的病理性左心室肥大的治疗法的方法，所述方法包括下述步骤a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量，选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，b)将在步骤a)中确定的所述标记的量与适当的参照量进行比较，和c)基于在步骤b)进行的比较，决定所述治疗法。
21.根据权利要求20的方法，其中所述心脏功能标记是NT-proBNP或其变体，并且>约 300pg/ml的NT-proBNP或其变体的量表示应该施用影响心脏功能的药剂，所述药剂优选地选自β阻断剂；硝酸盐；肾上腺素能激动剂；增强肌收缩力药剂；利尿剂。
22.根据权利要求20或21的方法，其中所述炎性标记是⑶F-15或其变体，并且>约 800pg/ml的GDF-15或其变体的量表示应该施用抗炎药；血管紧张素受体拮抗剂和醛固酮拮抗剂；和/或他汀类。
23.根据权利要求20-22中任一项的方法，其中所述坏死标记是肌钙蛋白T或其变体， 并且>约3pg/ml的肌钙蛋白T或其变体的量表示应该进行经皮冠状动脉介入。
24.根据权利要求20-23中任一项的方法，其中另外确定PlGF的水平，并且>约8pg/ ml的PlGF或其变体的量表示应该施用促血管生成药。
25.监测治疗患有病理性左心室肥大的受试者中的病理性左心室肥大的治疗法的方法，所述方法包括下述步骤a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量，选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，b)将在步骤a)中确定的所述标记的量与适当的参照量进行比较，和c)基于在步骤b)中进行的比较，改变或中断所述治疗法。
26.根据权利要求25的方法，其中另外测量PlGF或其变体的量。
27.根据权利要求25或26的方法，其中所述参照量是权利要求21-M中所引用的量或是在开始所述治疗法之前确定的量。
28.根据权利要求25-27中任一项的方法，其中所述确定的量关于所述参照量减少或增加20%，在所述标记量减少的情况下表示受试者病理性状态的改善，或在所述标记量增加的情况下表示受试者病理性状态的恶化。
29.根据权利要求25-28中任一项的方法，其中在患有梗阻性肥大型心肌病的受试者中已经进行间隔肥大的经冠状动脉消融(TASH)，确定利尿钠肽，特别是NT-proBNP或其变体，并且关于所述参照值减少20%表示成功的TASH介入。
30.用于实施权利要求1- 中任一项的方法的装置，所述装置包括 用于确定下述每种肽的量的装置坏死标记，优选肌钙蛋白或其变体； 心脏功能标记，优选利尿钠肽或其变体； 炎性标记，优选⑶F-15或其变体；和用于比较在所述方法的步骤a)中确定的量与参照量的装置；和任选地用于确定PlGF或其变体的量的装置。
31.适于实施权利要求1- 中任一项的方法的试剂盒，所述试剂盒包括 用于确定下述每种肽的量的装置坏死标记，优选肌钙蛋白或其变体； 心脏功能标记，优选利尿钠肽或其变体； 炎性标记，优选⑶F-15或其变体；用于比较在所述方法的步骤a)中确定的量与参照量的装置；和用于实施本发明所述方法的说明书； 和任选地用于确定PlGF或其变体的量的装置。
全文摘要
本发明涉及在具有左心室肥大的受试者中诊断或区分所述受试者是具有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大的方法，所述方法包括下述步骤a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自坏死标记的至少一种标记的量，选自心脏功能标记的至少一种标记的量和选自炎性标记的至少一种标记的量，b)将在步骤a)中确定的所述标记的这样确定的量与适当的参照量进行比较，和c)诊断所述受试者是生理性健康还是患有病理性左心室肥大。本发明还涉及允许在患有病理性左心室肥大的受试者中区分(诊断)所述受试者是患有肥大型非梗阻性心肌病、肥大型梗阻性心肌病还是压力负荷过度型肥大的方法，所述方法包括下述步骤a)在所述受试者的至少一份样品中确定选自心脏功能标记的至少一种标记的量，选自坏死标记的至少一种标记的量，和选自炎性标记的至少一种标记的量，b)将所述量与参照量进行比较，和c)依赖于步骤b)的结果，区分肥大型心肌病的不同类型。在本发明的这种方法的优选实施方案中，形成2种标记的比例。任选地，测量作为另一种标记的PlGF。此外，本发明涉及适合实施本发明的方法的装置和试剂盒。BNP (NT-proBNP)、肌钙蛋白T或I、GDF-15和PlGF用于在患有左心室肥大的受试者中区分所述受试者是患有生理性左心室肥大还是患有病理性左心室肥大的应用。
文档编号G01N33/68GK102498403SQ201080041316
公开日2012年6月13日 申请日期2010年9月16日 优先权日2009年9月17日
发明者乔治·海斯, 安德烈·霍尔施, 迪特马尔·茨杜内克 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司