专利名称：高渗三唑磷乳油中的氮酮的高效液相色谱分析法的制作方法
技术领域：
本发明涉及氮酮的分析方法，具体地说，高渗三唑磷乳油中的氮酮的高效液相色谱分析法。
背景技术：
三唑磷(triazophos；phentriazophos；Hostathion)，化学名称为O，O-二乙基-O-(1-苯基-1，2，4-三唑-3-基)硫逐磷酸酯，是一种有机磷杀虫剂，对粮、棉、果、蔬菜等主要农作物上的许多重要害虫，如螟虫、稻飞虱、蚜虫、红蜘蛛、棉铃虫、菜育虫、线虫等，都有良好的防治效果。其杀卵作用明显，对鳞翅目昆虫卵的杀灭作用尤为突出。因为它的生产工艺比较简单，得率较高，使用方便，在全国各地已大量推广应用[参见董竞武，肖萍，郑志清等.三唑磷杀虫剂的亚慢性毒性研究[J].环境与职业医学，2003，20(2)126～128.]。
氮酮(月桂氮卓酮、十二烷氮卓酮、阿佐恩、laurocapram、Azone)，化学名称1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮，是70年代从一系列N-烃氮杂环酮中开发出来的新型高效透皮促进剂。氮酮作为高渗促进剂，对杀虫剂、杀菌剂、除草剂，无论是乳剂还是可湿性粉剂，均有明显的增效作用。其主要机理是影响生物角质层中细胞壁的有序叠集结构，并作用于皮下类脂质，使其致密性改变，增加脂质的流动性，促进有效药物通过表皮层，进入害虫、菌株和植物体内。添加氮酮的农药制剂，能提高药液的渗透和展着力，迅速均匀地浸润植物叶面、害虫、菌体表面，破坏其腊质保护层，从而降低害虫、菌体的抗性，明显增加药效。单位面积内，加入氮酮后，有效成分用量降低50％，而药效相当于原剂量或高于原剂量。一般在农药中加入量为1％～1.5％，就可达到理想的药效，从而可以降低药害和环境污染，深得农药生产厂家和农民的欢迎，同时产生巨大的经济效益和社会效益。据国外文献报道，氮酮对植物吸收N、P、K、Zn、Fe、Mo等营养元素和微量元素同样具有极强的渗透活性，在微肥、叶面肥、植物生长调节剂方面，有着更为广阔的潜在市场[参见甘霖，甘立谦.高含量氮酮在农药中的应用研究[J].农药，2000，39(7)，14～15.]。
三唑磷(triazophos) 氮酮(Azone)目前对于氮酮的定量分析，气相色谱法是常用的方法[参见中华人民共和国卫生部药典编写委员会.中华人民共和国药典[M].北京人民卫生出版社，2000，66；焦铸，周磊.气相色谱法测定氮酮的条件探索[J].四川化工与腐蚀控制，2000，3(4)12；孙心齐，刘小强，魏敏等.毛细管气相色谱法定量测定氮酮[J].化学研究，2003，14(4)60～62；张慧.气相色谱测定月桂氮卓酮[J].化学工业于工程技术，2001，12(3)47～48.]，薄层层析法也有报道[参见孙心齐，王金中，康桂亭等.薄层色谱法定量测定氮酮[J].理化检验—化学分册，2003，39(12)709～710，712.]，但这些方法都只是用于测定氮酮原药纯品的含量，而测定农药、药物及其它制剂中作为渗透剂的微量的氮酮尚未见报道。

发明内容
本发明的目的是提供一种测定高渗三唑磷乳油中微量的氮酮的高效液相色谱分析法(HPLC)。
本发明的技术方案如下一种高渗三唑磷乳油中的氮酮的高效液相色谱分析法，其高效液相色谱的条件是色谱柱Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；流动相甲醇—水，体积比甲醇∶水＝92∶8；或乙腈—水，体积比乙腈∶水＝90∶10；流速1.0mL/min；柱温30℃；检测波长210nm；进样量10μL。
本发明的高效液相色谱法能方便、快捷、准确地测出高渗三唑磷乳油中的氮酮的含量，当信噪比S/N＝3时，测得氮酮的最低检出限，流动相为甲醇—水是2.5×10-4mg/mL，流动相为乙腈—水是1.25×10-5mg/mL。


图1为流动相甲醇或乙腈的浓度对氮酮保留值的影响，1.甲醇—水；2.乙腈—水；图2为氮酮的紫外—可见光谱；图3为氮酮的标准工作曲线，a.流动相甲醇—水(92∶8，v/v)；b.流动相乙腈—水(90∶10，v/v)；图4为氮酮对照品和高渗三唑磷乳油样品的色谱图，a.氮酮标准品(S/N＝1000)，流动相甲醇—水(92∶8，v/v)；b.氮酮标准品(S/N＝4500)，流动相乙腈—水(90∶10，v/v)；c.高渗三唑磷乳油(S/N＝1000)，流动相甲醇—水(92∶8，v/v)；d.高渗三唑磷乳油(S/N＝4500)，流动相乙腈—水(90∶10，v/v)。峰1为氮酮峰。
具体实施例方式
1仪器、试剂与药品1.1仪器Varian5060型高效液相色谱仪，配有Rheodyne7725i六通进样阀，Waters486型紫外—可见分光光度检测器；大连江申分离科学技术公司JS-3050色谱工作站；四川仪表厂Type3066笔式记录仪。Waters Alliance2695型高效液相色谱仪，996型二极管阵列检测器(PAD)。
1.2试剂与药品氮酮对照品(95％)；高渗三唑磷乳油(1.5％)；甲醇(HPLC级)；乙腈(HPLC级)；实验中流动相和溶液用水均为娃哈哈纯净水。
1.3标准溶液的配制准确称取50.00mg氮酮对照品，置于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为2.00mg/mL的标准储备液，分别精密移取适量储备液，用甲醇逐级稀释成系列标准溶液。
1.4样品的配制将样品摇匀后，移取38μL三唑磷乳油(约30mg)，置于25mL的容量瓶中，准确称取其质量后，用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀备用。
2.色谱条件的选择2.1有机溶剂浓度的优化和比较流动相中甲醇和乙腈比例对氮酮的保留值有明显的影响，图1比较了氮酮的容量因子k’与甲醇和乙腈浓度的关系。
从图中可以看出，对于甲醇—水体系，随着甲醇比例的下降，氮酮的保留时间迅速增大；相比较，在乙腈—水体系下，随着乙腈比例的下降，氮酮的保留时间增大的趋势要平缓得多。两条线在约90％的地方相交。以甲醇—水为流动相，当体积比为92∶8时，氮酮和高渗三唑磷乳油中的成分能够完全分离，保留时间较短；而以乙腈—水为流动相，当体积比为92∶8时，乳油中有一个杂质峰靠近氮酮的峰，干扰测定，当体积比为90∶10时，该杂质能够够与氮酮分离，但出峰时间较长。综合考虑分离度和保留时间两个因素，我们选择的流动相分别为甲醇—水(92∶8)和乙腈—水(体积比为90∶10)。
2.2检测波长的选择用二极管阵列检测器(PAD)采集氮酮的紫外—可见光谱(图2)，从图2中可以看出，氮酮的最大吸收波长为202.6nm，但考虑到在该最大吸收波长下基线噪声较大，信噪比S/N较小，我们选择210nm作为检测波长。
2.3灵敏度和最低检出限的比较本实验在210nm下检测，以甲醇—水体系作为流动相，背景吸收值大，基线噪音大，导致达到平衡状态所需要的时间长，因此灵敏度比较低，最低检出限为5.0×10-4mg/mL；以在乙腈—水体系为流动相，背景吸收值较小，基线噪音也小，达到平衡状态需要的时间短，得到了更低的检出限1.25×10-5mg/mL。
3样品的测定3.1色谱条件色谱柱Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；流动相甲醇—水(体积比92∶8)或乙腈—水(体积比为90∶10)；流速1.0mL/min；柱温30℃；检测波长210nm；进样量10μL。
3.2氮酮的标准工作曲线分别以甲醇—水(体积比为92∶8)、乙腈—水(体积比为90∶10)为流动相，在氮酮标准溶液浓度0.001～0.1mg/mL、0.00005～0.1mg/mL范围内进行实验，标准曲线均有良好的线性(r＝0.9998)(图3)，回归方程分别为Aazone＝-2344.74996+9.89565E7CAzone和A＝-4117.3892+8.71622E7CAzone。当信噪比S/N＝3时，测得氮酮的最低检出限分别为2.5×10-4mg/mL和1.25×10-5mg/mL。
3.3色谱图在3.1的色谱条件下，氮酮对照品和高渗三唑磷乳油样品的色谱图如图4所示。
3.4样品的测定结果平行配制高渗三唑磷乳油样品溶液三份，在相同的色谱条件下对每一份溶液重复进样五次，测得峰面积取平均值，用外标法计算含量，结果如表1所示。
表1样品的测定结果(n＝3，％)样品序号 甲醇+水(92∶8，v/v) 乙腈+水(90∶10，v/v)含量平均含量RSD含量 平均含量 RSD11.78 1.7221.781.780.32 1.72 1.72 0.3431.77 1.733.5回收率试验对三唑磷乳油样品进行氮酮的标准添加回收率试验，测定结果见表2。结果表明，两种流动相下氮酮的回收率分别为100.6％～102.4％和99.5％～102.8％。
表2氮酮的回收率(n＝3)流动相 本底浓度加入浓度测得浓度 回收率(％) RSD(％)(mg/L) (mg/L) (mg/L)甲醇+水20.43 10.00 30.56 100.6 0.14(92∶8，v/v) 20.57 20.00 40.75 100.9 0.1920.28 30.00 60.76 102.4 0.09乙腈+水19.80 10.00 29.85 100.3 0.13(90∶10，v/v) 19.94 20.00 39.83 99.50.0319.65 30.00 60.20 102.8 0.534结语本发明的高效液相色谱分析法，在两种不同的流动相条件下，测定了高渗三唑磷乳油中氮酮的含量，操作简单，准确度高，重复性好。与甲醇—水流动相相比，乙腈—水流动相背景吸收较小，可以得到更低的最低检出限，而且基线比较平稳，尽管氮酮出峰时间稍长，但达到平衡状态需要的时间较短，整体有效分析时间较短。考虑到乙腈的价格比甲醇要高出很多，所以对于一般的企业控制分析，使用甲醇—水体系更为经济。
权利要求
1.一种高渗三唑磷乳油中的氮酮的高效液相色谱分析法，其特征是高效液相色谱的条件是色谱柱Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；流动相甲醇—水，体积比甲醇∶水＝92∶8；或乙腈—水，体积比乙腈∶水＝90∶10；流速1.0mL/min；柱温30℃；检测波长210nm；进样量10μL。
全文摘要
一种高渗三唑磷乳油中的氮酮的高效液相色谱分析法，其高效液相色谱的条件是色谱柱Kromasil C
文档编号G01N30/26GK1632561SQ200410065980
公开日2005年6月29日 申请日期2004年12月29日 优先权日2004年12月29日
发明者练鸿振, 蔡秀兰 申请人:南京大学