专利名称：一种用于地西他滨有关物质的分析方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种地西他滨的分析方法。
背景技术：
地西他滨是目前已知的最强的DNA甲基化特异抑制剂，主要用于骨髓增生异常综合征(MDS)的治疗，适合于新发的和继发的MDS患者，以及按IPSS系统分为高危、中度2级危险、中度1级危险的MDS患者。地西他滨分子式为C8H12N4O4,化学结构式为β -构型根据文献报道，地西他滨的主要问题是其化学不稳定性，地西他滨水解开环、去甲酰化以及端基异构化均导致其降解形成新的产物。虽然目前还不清楚地西他滨的降解产物是否具有的毒性、潜在的诱变性和DNA修复诱导作用，但地西他滨的降解不仅会引起其药物浓度的降低，还会导致其降解产物可能存在地西他滨外的药理和毒理特性，故应控制地西他滨中各类降解产物的种类和含量。根据文献及我们的研究共发现地西他滨的水解杂质共13个，包括地西他滨α -异构体等杂质。在研究中，将α-异构体单独指出，其他杂质取有关物质英文“Related Substances"的简写“Rs”，按相对保留时间的先后顺序命名为Rsl_Rsl2。地西他滨降解产物种类多，且极性大，在反相色谱柱中保留机制较差，需采用无有机相的流动相才能获得良好的分离，故在分析地西他滨有关物质时除需考虑检测到的杂质种类及数量，还需考虑分析过程中溶液的稳定性，以排除溶液稳定性原因引起的对检测的干扰。地西他滨α -异构体是地西他滨的主要杂质，它既是地西他滨的工艺杂质也是其降解杂质，目前的检测分析方法也主要是控制α-异构体。依据文献(W02008/083634A1 17. 07. 2008)报道，α-异构体具有和地西他滨相似的药理活性，虽然活性较地西他滨稍弱，但毒性更低，并且稳定性更好，所以，可以适当放宽生产过程中对α-异构体的控制限度。但应严格控制α-异构体外的其他杂质的种类和含量。中国专利“高效液相色谱法分离测定地西他滨及其对映异构体的方法”(申请号200710064576)公开了使用正己烷-低级醇溶液为流动相(流动相中可包含有机胺改性剂)分离测定地西他滨及其α-异构体，该方法虽然提供了分离测定地西他滨及其α -异构体的方法，但地西他滨样品溶解度不好， 分离过程中地西他滨易发生水解，影响结果准确性，且不适于分离α-异构体以外的有关物质。中国专利“高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对映异构体的方法”(申请号200910089574. X)，该方法使用HILIC色谱柱，以乙腈-水为流动相，平衡时间长，色谱峰分离度较差。地西他滨是FDA批准上市治疗MDS的三种药物中的一种，对在人类的其他癌症和镰刀细胞性贫血和难治性慢性粒细胞白血病(CML)的使用也正处于临床研究阶段，如上所述，地西他滨的降解产物可能存在地西他滨外的药理和毒理特性，所以，应该建立一种新的方法用于控制地西他滨有关物质的种类和含量，这种新方法的建立是十分必要的。

发明内容
基于以上原因，本发明提供了一种用于地西他滨有关物质的分析方法，该方法不仅能保证分析过程中地西他滨的稳定性，而且能有效的检出地西他滨中的各种有关物质。本发明通过以下技术方案实现一种地西他滨有关物质的分析方法，包括地西他滨原料药及注射用地西他滨，采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充料，检测波长为210-240nm，流速为 1. 0-3. Oml/min，柱温为10_30°C，使用低级醇溶解供试品及对照品，供试品及对照品溶液进样量为1-20 μ 1，流动相为ρΗ6· 0-7. 5的浓度为0. 01-0. 05mol/L的磷酸盐溶液。其中检测波长为220nm。其中流速为1. 5ml/min。其中柱温为25 °C。其中所述低级醇包括甲醇、乙醇、异丙醇、异戊醇。其中样品进样量为5ul。其中所述磷酸盐为磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种或几种。其中所述磷酸盐溶液的pH为6. 8，浓度为0. 03mol/L。分析方法确证实验1.检测波长的选择地西他滨水解三嗪环开环形成开环甲酰化衍生物，水解开环后甲基丢失的的不可逆反应产生胍基甲酰胺衍生物。文献中表明，三嗪环的水解开环使得240nm的摩尔吸收增大，因此，地西他滨开环甲酰化衍生物在MOnm处有强吸收，吸收强度大于210nm处的吸收； 而地西他滨胍基甲酰胺衍生物在240nm处存在吸收，但强度很小。故采用210-240nm为检测波长。为全面检测各水解杂质，避免末端吸收，优选220nm为检测波长。2.流动相的选择地西他滨有关物质种类多，极性大，选择适当的流动相以得到良好的分离效果是分析方法的关键。我们选择磷酸盐缓冲液-甲醇、乙酸铵溶液(文献1)、磷酸盐溶液作为流动相进行对比。部分试验结果见表1表1流动相对比筛选试验的部分数据
权利要求
1.一种地西他滨有关物质的分析方法，包括地西他滨及注射用地西他滨，其特征在于采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充料，检测波长为210-240nm，流速为 1. 0-3. Oml/min，柱温为10_30°C，使用低级醇溶解供试品及对照品，供试品及对照品溶液进样量为1-20 μ 1，流动相为ρΗ6· 0-7. 5的浓度0. 01-0. 05mol/L的磷酸盐溶液。
2.根据权利要求1所述的一种地西他滨有关物质的分析方法，其中检测波长为220nm。
3.根据权利要求1所述的一种地西他滨有关物质的分析方法，其中流速为1.5ml/min。
4.根据权利要求1所述的一种地西他滨有关物质的分析方法，其中柱温为25°C。
5.根据权利要求1所述的一种地西他滨有关物质的分析方法，其中所述低级醇包括甲醇、乙醇、异丙醇、异戊醇。
6.根据权利要求1所述的一种地西他滨有关物质的分析方法，其中样品进样量为5ul。
7.根据权利要求1所述的一种地西他滨有关物质的分析方法，其中所述磷酸盐为磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种或几种。
8.根据权利要求1所述的一种地西他滨有关物质的分析方法，其特征在于所述磷酸盐溶液的PH为6. 8，浓度为0. 03mol/L。
全文摘要
本发明公开了一种地西他滨有关物质的分析方法，包括地西他滨及注射用地西他滨的高效液相色谱法，其特征在于以pH6.0-7.5的浓度0.01-0.05mol/L的磷酸盐溶液为流动相，检测波长为210-240nm，在流速为1.0-3.0ml/min，柱温为10-30℃的条件下，能够有效的分离地西他滨各有关物质，保证地西他滨中有关物质的检出率，保证了地西他滨质量的可控性。
文档编号G01N30/02GK102313781SQ20101021937
公开日2012年1月11日 申请日期2010年7月7日 优先权日2010年7月7日
发明者姜威, 孙学伟, 孙德杰, 米长江, 顾群 申请人:北京本草天源药物研究院