专利名称：肝苏糖浆的检测方法
技术领域：
发明涉及一种肝苏糖浆的质量检测方法，属于对药品进行质量控制的技术领域。
背景技术：
肝苏糖浆原标准收载于国家食品药品监督管理局标准，药品标准编号是 YBZ06542009，是以中药材扯根菜为主要原料制成的中药糖浆剂，具有降酶，保肝，退黄，健 脾的作用。临床用于慢性活动性肝炎、乙型肝炎，也可用于急性病毒性肝炎等的治疗。具有 降酶退黄快、滴度下降快、体征症状改善快、食欲增进快、精神复常快的特点。经研究证明， 扯根菜的主要成份为没食子酸、槲皮素等，其中没食子酸为已知具有抗乙肝病毒和保肝作 用的有效成分，在对肝苏糖浆的分析中也发现肝苏糖浆中的主要成份是没食子酸、槲皮素 等。原标准仅对简单易测定的槲皮素进行了含量控制，而且对槲皮素的含量控制也是进行 水解后测定槲皮素的含量，其中测得的仅是多种化合物的一个总的水解产物的量，而且槲 皮素等存在于多种植物中，所以仅笼统地测定一个槲皮素不能全面反映肝苏糖浆的有效成 份的量，更不能很好地控制肝苏糖浆的质量。由于以中药材扯根菜为主要原料制成的中成 药肝苏糖浆等用于慢性活动性肝炎、乙型肝炎、急性病毒性肝炎等的治疗取得的很好的疗 效，现在扯根菜药材十分紧缺，不法厂商就可能以其它水解后主要成份为槲皮素的植物提 取物替代扯根菜而投料生产伪劣肝苏糖浆。

发明内容
本发明的目的，是针对原有技术标准中只笼统地测定一个槲皮素不能全面反映肝 苏糖浆的有效成份的量，更不能很好地控制肝苏糖浆的质量的问题，对其质量检测进行了 研究，提供一种肝苏糖浆的质量检测方法，增加了高效液相色谱法测定肝苏糖浆中没食子 酸的含量，对制剂中主要成份进行鉴别和测定，不仅能更好更全面地反映肝苏糖浆的有效 成份的量，而且能有效地控制以其它水解后主要成份为槲皮素的植物提取物替代扯根菜而 投料生产的伪劣肝苏糖浆的产生，从而保证了该药品的质量，使群众用药安全有效。本发明肝苏糖浆的检测方法，主要包括鉴别、检查、含量测定项目；其中，鉴别包括 对糖浆中槲皮素的鉴别、黄酮类化合物的鉴别；含量测定包括对糖浆中槲皮素的含量测定、 没食子酸的含量测定。没食子酸的含量测定是以没食子酸为对照品，以甲醇和0. 磷酸及0. 三乙 胺水溶液的混合物为流动相，甲醇-0. 磷酸0.1%三乙胺水溶液=10 90，用高效液 相色谱法测定。槲皮素的鉴别是以槲皮素为对照品，以甲苯、乙酸乙酯和甲酸的混合物为展开 齐U，甲苯乙酸乙酯甲酸=5 4 1，用薄层色谱法鉴别。槲皮素的含量测定是以槲皮素为对照品，以甲醇和0. 2%磷酸溶液的混合物为流动相，甲醇0. 2%磷 酸溶液=45 55，用高效液相色谱法测定。
槲皮素的鉴别具体步骤是取本品(肝苏糖浆)，加盐酸甲醇溶液，置水浴中加热回流，趁热滤过，滤液蒸干， 残渣加乙酸乙酯使溶解，用水洗涤两次，弃去水液，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶 解，作为供试品溶液。另取槲皮素对照品适量，加甲醇制成对照品溶液。吸取上述两种溶液， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯、乙酸乙酯和甲酸的混合物为展开剂，甲苯乙酸乙 酯甲酸=5 4 1，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝甲醇溶液，挥干，置日光下检视。 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。黄酮类化合物的鉴别是取本品，以乙醇溶液为提取剂，以三氯化铝溶液为鉴别剂 的鉴别方法；或取本品，以乙醇溶液为提取剂，以醋酸铅试液为鉴别剂的鉴别方法。黄酮类化合物的鉴别具体步骤是取本品，加乙醇，振摇提取，滤过，滤液加水，摇勻，取上述溶液置于试管中，加三氯 化铝溶液，即显黄色，再取溶液，点于滤纸上，置紫外光365nm下观察，显黄色或绿色荧光； 或取本品，加乙醇，振摇提取，滤过，滤液加水，摇勻，取上述溶液置于试管中，加醋酸 铅试液，振摇，放置，生成黄棕色沉淀。槲皮素的含量测定具体步骤是用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇和0.2%磷酸溶液的混合液为流动 相，甲醇0.2%磷酸溶液=45 55;检测波长为370nm，理论板数按槲皮素峰计算应不低 于1800 ；精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥的槲皮素对照品适量，加甲醇溶解并制 成溶液，即得对照品溶液；再取本品(肝苏糖浆)，精密称定，置具塞锥形瓶中，加盐酸甲醇 溶液，置水浴中加热回流，趁热滤过，滤液置量瓶中，用甲醇分次洗涤残渣，洗液并入同一量 瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液 与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得本品中槲皮素含量。没食子酸的含量测定具体步骤是用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇和0. 磷酸及0. 三乙胺水溶液 的混合物为流动相，甲醇-0. 磷酸0. 三乙胺水溶液=10 90 ；检测波长为271nm， 理论板数按没食子酸峰计算应不低于1800 ；取经五氧化二磷减压干燥至恒重的没食子酸 对照品适量，精密称定，加水制成溶液，即得对照品溶液；取本品，精密加入水，称定重量，超 声处理，放冷，再称定质量，用水补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得供试品溶液， 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得本品中没食子酸 的含量。更具体的检测方法包括以下项目槲皮素的理化鉴别进一步的步骤是取本品5g，加2. 3%盐酸甲醇溶液50ml，置85°C水浴中加热回流1小时，趁热滤 过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯50ml使溶解，用水洗涤两次，每次20ml，弃去水液，合并乙 酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取槲皮素对照品适量，加甲 醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以甲苯、乙酸乙酯和甲酸的混合液为展开剂，甲苯乙酸乙酯甲酸=5:4: 1，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝甲醇溶液，挥干，置日光下检视，供试品色谱 中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；黄酮类化合物的鉴别进一步的步骤是取本品lg，加乙醇5ml，振摇提取，滤过，滤液加水5ml，摇勻，取上述溶液置于试管 中，加1 %三氯化铝溶液5滴，即显黄色，再取溶液2滴，点于滤纸上，置紫外光365nm下观 察，显黄色或绿色荧光；或取本品lg，加乙醇5ml，振摇提取，滤过，滤液加水5ml，摇勻，取上述溶液置于试管 中，加醋酸铅试液4滴，振摇，放置，生成黄棕色沉淀；槲皮素的含量测定进一步的步骤是用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇和0.2%磷酸溶液的混合液为流动 相，甲醇0.2%磷酸溶液=45 55，检测波长为370nm，理论板数按槲皮素峰计算应不低 于1800 ；精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥12小时的槲皮素对照品适量，加50%甲 醇溶解并制成每Iml含5ug的溶液，即得对照品溶液；取本品约lg，精密称定，置250ml具 塞锥形瓶中，加2. 3%盐酸甲醇溶液50ml，置85°C水浴中加热回流1小时，趁热滤过，滤液置 IOOml量瓶中，用甲醇分次洗涤残渣，洗液并入同一量瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，滤过，取 续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱 仪，测定，即得本品种槲皮素含量；没食子酸的含量测定进一步的步骤是用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇和0. 磷酸及0. 三乙胺水溶液 为流动相，甲醇0. 磷酸0. 三乙胺水溶液=10 90，检测波长为271nm，理论板数 按没食子酸峰计算应不低于1800 ；取经五氧化二磷减压干燥至恒重的没食子酸对照品适 量，精密称定，加水制成每Iml含28 μ g的溶液，即得对照品溶液；取本品约0. 4g，精密加入 50ml水，称定重量，超声处理20min，放冷，再称定质量，用水补足减失的重量，摇勻，滤过， 取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入高效液 相色谱仪，测定，即得本品中没食子酸的含量，本品每Ig含扯根菜以没食子酸计，不得少于 3. 5mg0本发明的技术效果由于增加了高效液相色谱法测定肝苏糖浆中没食子酸的含量，通过以上几个鉴别 以及含量测定，有了明确的质量指标以及各质量指标的鉴别和测定方法，这些方法科学合 理、切实可行。本发明使肝苏糖浆中槲皮素、黄酮类化合物、没食子酸都得到了有效的质量 控制，这不仅能更好更全面地反映肝苏糖浆的质量，而且有效地控制不法厂商生产伪劣肝 苏糖浆，从而保证群众用药安全有效。
具体实施例方式制法取扯根菜1667g，切碎，加10倍量水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过， 滤液浓缩成相对密度为1. 15 1. 18(60 65°C )的清膏，冷却，加乙醇使含醇量达60%， 搅拌，静置，滤过，沉淀用4倍沉淀量的60%乙醇洗涤三次，合并洗液与滤液，回收乙醇并浓 缩成相对密度为1. 10 1. 15的清膏，加入500g蔗糖，煮沸至完全溶解，加水至1000ml，搅 勻，静置，滤过，灌封，即得。
性状本品为棕褐色至深棕色的粘稠液体；味甜。鉴别(1)取本品lg，加乙醇5ml，振摇提取，滤过，滤液加水5ml，摇勻，取上述溶液各Iml 分置二支试管中，一管中加1 %三氯化铝溶液5滴，即显黄色，再取溶液2滴，点于滤纸上，置 紫外光(365nm)下观察，显黄色或绿色荧光；另一管中加醋酸铅试液4滴，振摇，放置，生成 黄棕色沉淀.(2)取本品5g，加2. 3%盐酸甲醇溶液50ml，置85°C水浴中加热回流1小时，趁热 滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯50ml使溶解，用水洗涤两次，每次20ml，弃去水液，合并乙 酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取槲皮素对照品适量，加甲醇 制成每Iml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附 录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙 酯-甲酸(5 4 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝甲醇溶液，挥干，置日 光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。检查相对密度应为1.22 1. 27 (中国药典2005年版一部附录VIIA)。ρΗ值应为3. 5 5. 5 (中国药典2005年版一部附录VIIG)。其他应符合糖浆剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录IH)。含量测定槲皮素照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2% 磷酸溶液(45 55)为流动相；检测波长为370nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于 1800。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥12小时的槲皮素对 照品适量，加50%甲醇溶解并制成每Iml含5ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品约lg，精密称定，置250ml具塞锥形瓶中，加2. 3%盐酸 甲醇溶液50ml，置85°C水浴中加热回流1小时，趁热滤过，滤液置IOOml量瓶中，用甲醇分 次洗涤残渣，洗液并入同一量瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。本品每Ig含扯根菜以槲皮素(C15HltlO7)计，不得少于0. 23mg。没食子酸照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0. 磷酸0. 三乙胺水溶液(10 90)为流动相；检测波长为271nm。理论板数按没食子酸峰 计算应不低于1800。对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥至恒重的没食子酸对照品适量，精密 称定，加水制成每Iml含28 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品约0. 4g，精密加入50ml水，称定重量，超声处理20min， 放冷，再称定质量，用水补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ 1，注入高效液相色谱仪，测 定，即得。本品每Ig含扯根菜以没食子酸(C7H6O5)计，不得少于3. 5mg。
功能与主治降酶，保肝，退黄，健脾。用于慢性活动性肝炎、乙型肝炎，也可用于 急性病毒性肝炎。用法与用量口服，一次10ml，一日3次，小儿酌减。规格每瓶装100ml。贮藏密封。为了验证用高效液相色谱法测定肝苏糖浆中没食子酸含量的方法是否可行，本申 请人进行了如下研究具体实验资料如下方法高效液相色谱法；色谱柱Dikma Kromasil C18 柱(250mmX 4. 6mm, 5 μ m)；流动相甲醇-0. 磷酸0. 三乙胺水溶液(10 90)；检测波长27Inm ；柱温30°C;流速0· 8ml/min ；结果没食子酸在0. 07 0. 56 μ g范围内具有良好的线性关系(r = 0. 9999)，平 均回收率为95. 23%, RSD为1. 08% ；结论该方法简便、准确、可靠，重复性好，可用于肝苏糖浆的含量测定。肝苏糖浆原标准收载于国家食品药品监督管理局标准，药品标准编号是 YBZ06542009，是以中药材扯根菜为主要原料制成的中药糖浆剂，具有降酶，保肝，退黄，健 脾的作用。临床用于慢性活动性肝炎、乙型肝炎，也可用于急性病毒性肝炎等的治疗。具有 降酶退黄快、滴度下降快、体征症状改善快、食欲增进快、精神复常快的特点。经研究证明， 扯根菜的主要成份为没食子酸、槲皮素等，其中没食子酸为已知具有抗乙肝病毒和保肝作 用的有效成分，在对肝苏糖浆的分析中也发现肝苏糖浆中的主要成份是没食子酸、槲皮素 等。申请人建立一个高效液相色谱法测定其中的没食子酸含量的方法，不仅能更好更全面 地反映肝苏糖浆的有效成份的量，而且能有效地控制以其它水解后主要成份为槲皮素的植 物提取物替代扯根菜而投料生产的伪劣肝苏糖浆的产生，从而保证群众用药安全有效。1仪器与试药戴安高效液相色谱仪(P680A LPG四元低压梯度泵，PDA-100 二极管阵列检测器， TCC-100柱温箱，Chromeleon色谱工作站)。CQX25-06超声波清洗器(上海必能信超声有限 公司，功率250W，频率25kHZ)。甲醇为色谱纯试剂，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。没 食子酸对照品为中国药品生物制品检定所提供，肝苏糖浆为四川逢春制药有限公司生产。2方法与结果2. 1 色谱条件色谱柱Dikma KromasilC18 (250mmX 4. 6mm，5 μ m)；流动相甲 醇-0. 磷酸及0. 三乙胺水溶液(10 90)；检测波长271nm;流速0.8ml/min ；柱 温:30°C ；进样量:10μ 1。2. 2溶液的制备2. 2. 1对照品溶液取经五氧化二磷减压干燥至恒重的没食子酸对照品适量，精密 称定，加水制成每Iml含28 μ g的溶液，即得。2. 2. 2供试品溶液取本品0. 3g，精密加入50ml水，称定重量，超声处理30min，放 冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。
2. 3系统适应性试验分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入高效 液相色谱仪，记录色谱图，结果没食子酸的保留时间约为8. 4min，没食子酸峰与其前后色谱 峰的分离度均大于1. 5，拖尾因子为0. 97，理论塔板数以没食子酸峰计为12740。2. 4线性关系考察精分别精密吸取“2. 2. 1”项下对照品溶液2. 5,5,7. 5，10，15， 20 μ 1，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积值A对进样量C ( μ g)进行 回归，得标准曲线方程A = 58. 8878C-0. 2877，r = 0. 9999，结果表明没食子酸进样量在 0. 07 0. 56 μ g范围内峰面积与进样量有良好的线性关系。2. 5精密度试验精密吸取“2. 2. 1”项下对照品溶液10 μ 1，重复进样6次，测得没 食子酸峰面积RSD为0. 35% (η = 6)，表明仪器精密度良好。2. 6稳定性试验取本品的供试品溶液，分别于制备后0，4，8，12，24，48h进样测定， 测得没食子酸峰面积RSD为1. 38%，表明供试品溶液在48h内稳定。2. 7重复性试验取同一批样品6份，照“2. 2. 2”项下方法，平行制备6份供试品溶 液，分别进样测定，测得没食子酸平均含量为0. 2876%, RSD为0. 77%。2.8回收率试验精密称取已知含量(0.2876% )的本品9份，每份0. 25g，分成3 组，每组3份，分别精密添加没食子酸对照品溶液(0. 2206mg/ml)2，3，4ml，照“2. 2. 2”项下 方法制备供试品溶液，按“2. 2. 1”项下色谱条件测定，并计算回收率。结果见下表。肝苏糖浆中没食子酸回收率试验结果(η = 9)
样品含量 (mg)加入量 (mg)测得量 (mg)丨回收率(％)(%)RSD (%)0.64310. 44121.062795.10I 0.66490.44121.091496. 660.68420. 44121.102094. 690.67240. 66181. 292093.630.70030.66181. 327094. 6995. 231.08 0.72450.66181.361596. 260.71500.88241.560795.84； 0. 73510. 88241. 565694. 12；0.75010.8824 i1. 597596. 03试验结果表明，本法具有良好的回收率。2. 9样品含量测定分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μ 1，按“2. 2. 1”项 下色谱条件测定，记录没食子酸的峰面积，并用外标法计算没食子酸的含量。每Ig含扯根 菜以没食子酸(C7H6O5)计，为3. 9mg。3 讨论3. 1试验中针对配制供试品溶液的不同提取方法(超声、回流及索氏提取)，不同 提取溶剂(甲醇、75%甲醇、50%甲醇、25%甲醇、水和流动相)，不同浓度的酸水解(1%盐 酸、5%盐酸、10%盐酸)，不同溶剂体积a0、25、50、75、100ml)及不同提取时间(15、30、45、 60min)分别考察。结果以50ml水不水解直接超声提取45min含量最高，杂质峰较少。3. 2采用二极管阵列检测器在190 380nm范围内分别扫描对照品、样品溶液 中没食子酸峰的紫外吸收，对照品和样品中的没食子酸分别在215. 3、215. 4nm和271. 1、
9271. 2nm有最大吸收，由于215nm处干扰较大，故检测波长选择271nm。
3. 3在流动相选择试验中，考察了甲醇-0. 磷酸溶液(5 95)；甲醇-0. 冰 醋酸溶液(15 85)；乙腈-0. 磷酸溶液(1 99)；甲醇-0. 磷酸0. 三乙胺水 溶液(10 90)等的不同比例、pH值、流速及柱温。发现其它的分离效果均不理想，经摸索 筛选采用本实验所用色谱条件为较好，样品中没食子酸与其他组分色谱峰得到较好分离。
权利要求
一种肝苏糖浆的检测方法，包括性状、鉴别、检查、含量测定项目；其中，鉴别包括槲皮素的鉴别，黄酮类化合物的鉴别；含量测定包括槲皮素的含量测定，其特征在于含量测定还包括没食子酸的含量测定；所述没食子酸的含量测定是以没食子酸为对照品，以甲醇和0.1％磷酸及0.1％三乙胺水溶液的混合物为流动相，甲醇 0.1％磷酸∶0.1％三乙胺水溶液＝10∶90，用高效液相色谱法测定。
2.根据权利要求1所述肝苏糖浆的检测方法，其特征在于所述没食子酸的含量测定具体步骤是用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇和0. 磷酸及0. 三乙胺水溶液的混 合物为流动相，甲醇-0. 磷酸0. 三乙胺水溶液=10 90 ；检测波长为271nm，理论 板数按没食子酸峰计算应不低于1800 ；取经五氧化二磷减压干燥至恒重的没食子酸对照 品适量，精密称定，加水制成溶液，即得对照品溶液；取本品，精密加入水，称定重量，超声处 理，放冷，再称定质量，用水补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得供试品溶液，分别 精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得本品中没食子酸的含 量，本品每Ig含扯根菜以没食子酸计，不得少于3. 5mg。
3.根据权利要求2所述肝苏糖浆的检测方法，其特征在于所述没食子酸的含量测定更具体步骤是用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇和0. 磷酸及0. 三乙胺水溶液为流 动相，甲醇-0. 磷酸0. 三乙胺水溶液=10 90，检测波长为271nm，理论板数按没 食子酸峰计算应不低于1800 ；取经五氧化二磷减压干燥至恒重的没食子酸对照品适量，精 密称定，加水制成每Iml含28 μ g的溶液，即得对照品溶液；取本品约0. 4g，精密加入50ml 水，称定重量，超声处理20min，放冷，再称定质量，用水补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤 液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ 1，注入高效液相色谱 仪，测定，即得本品中没食子酸的含量，本品每Ig含扯根菜以没食子酸计，不得少于3. 5mg。
4.根据权利要求1所述肝苏糖浆的检测方法，其特征在于所述槲皮素的鉴别是以槲皮素为对照品，以甲苯、乙酸乙酯和甲酸的混合物为展开剂， 甲苯乙酸乙酯甲酸=5:4: 1，用薄层色谱法鉴别；所述槲皮素的含量测定是以槲皮素为对照品，以甲醇和0. 2%磷酸溶液的混合物为流 动相，甲醇0.2%磷酸溶液=45 55，用高效液相色谱法测定。
5.根据权利要求4所述肝苏糖浆的检测方法，其特征在于所述槲皮素的鉴别具体步骤是取本品，加盐酸甲醇溶液，置水浴中加热回流，趁热滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯 使溶解，用水洗涤两次，弃去水液，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品 溶液。另取槲皮素对照品适量，加甲醇制成对照品溶液。吸取上述两种溶液，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以甲苯、乙酸乙酯和甲酸的混合物为展开剂，甲苯乙酸乙酯甲酸= 5:4: 1，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝甲醇溶液，挥干，置日光下检视。供试品色谱 中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；槲皮素的含量测定具体步骤是用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇和0. 2%磷酸溶液的混合液为流动相，甲 醇0.2%磷酸溶液=45 55;检测波长为370nm，理论板数按槲皮素峰计算应不低于1800;精密称取经五氧化二磷减压干燥器中槲皮素对照品适量，加甲醇溶解并制成溶液， 即得对照品溶液；再取本品，精密称定，置具塞锥形瓶中，加盐酸甲醇溶液，置水浴中加热 回流，趁热滤过，滤液置量瓶中，用甲醇分次洗涤残渣，洗液并入同一量瓶中，用水稀释至刻 度，摇勻，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入 液相色谱仪，测定，即得本品中槲皮素含量，本品每Ig含扯根菜以槲皮素(C15H1007)计，不 得少于0. 23mg ；
6.根据权利要求5所述肝苏糖浆的检测方法，其特征在于槲皮素的鉴别更具体步骤是取本品5g，加2. 3%盐酸甲醇溶液50ml，置85°C水浴中加热回流1小时，趁热滤过，滤 液蒸干，残渣加乙酸乙酯50ml使溶解，用水洗涤两次，每次20ml，弃去水液，合并乙酸乙酯 液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每 Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以甲苯、乙酸乙酯和甲酸的混合液为展开剂，甲苯乙酸乙酯甲酸=5 4 1， 展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝甲醇溶液，挥干，置日光下检视，供试品色谱中，在与对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
7.根据权利要求5所述肝苏糖浆的检测方法，其特征在于槲皮素的含量测定更具体步骤是用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇和0. 2 %磷酸溶液的混合液为流动相，甲 醇0.2%磷酸溶液=45 55，检测波长为370nm，理论板数按槲皮素峰计算应不低于 1800 ；精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥12小时的槲皮素对照品适量，加50%甲醇 溶解并制成每Iml含5ug的溶液，即得对照品溶液；取本品约lg，精密称定，置250ml具塞 锥形瓶中，加2. 3%盐酸甲醇溶液50ml，置85°C水浴中加热回流1小时，趁热滤过，滤液置 IOOml量瓶中，用甲醇分次洗涤残渣，洗液并入同一量瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，滤过，取 续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱 仪，测定，即得本品种槲皮素含量，本品每Ig含扯根菜以槲皮素计，不得少于0. 23mg。
全文摘要
本发明提供了一种肝苏糖浆的检测方法，包括槲皮素的鉴别，黄酮类化合物的鉴别，槲皮素的含量测定，没食子酸的含量测定。该检测方法使肝苏糖浆中槲皮素、黄酮类化合物、没食子酸都得到了有效的质量控制，不仅能更好更全面地反映肝苏糖浆的有效成份的量，而且能有效地控制以其它水解后主要成份为槲皮素的植物提取物替代扯根菜而投料生产的伪劣肝苏糖浆的产生，从而保证群众用药安全有效。
文档编号G01N30/90GK101904879SQ20101022779
公开日2010年12月8日 申请日期2010年7月16日 优先权日2010年7月16日
发明者古莉, 唐终国, 林剑, 温国梁, 邹波, 钟茂团, 黎勇 申请人:四川逢春制药有限公司