专利名称：食品中蛋白质含量的测定方法
技术领域：
本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及一种食品中蛋白质含量的测定方法。
背景技术：
蛋白质是构成生物体细胞的重要成分，食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源， 具有糖类和脂肪等生物大分子不可替代的作用。蛋白质与生物体中的营养代谢、细胞结构、 酶、激素、病毒以及免疫、物质转运和遗传等密切相关，其分离与定性或定量测定在食品检验中具有重要意义。食品中测定蛋白质含量的方法有很多种，一般可分为间接方法和直接方法，间接方法是通过测定样品中蛋白质的含氮量进而推算蛋白质含量；直接方法则根据蛋白质的物理或化学性质直接测定蛋白质的含量。凯氏定氮法作为食品类产品蛋白质含量测定的法定方法，也是蛋白质测定中最常用的方法，以其测定结果稳定、准确，在国内外得到了广泛地采用，但此法操作繁琐，试剂消耗量大，消化时排放的SO2对人体健康造成直接危害，而且费时、费电、费水；其他诸如分光光度法和滴定法等方法也都存在操作繁琐的缺点；而利用凯氏定氮仪进行蛋白质测定成本过高，且由于仪器本身昂贵，难以推广使用。

发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中食品中蛋白质含量的测定方法操作复杂繁琐， 对操作人员危害性大，费用过高的技术问题。本发明的食品中蛋白质含量的测定方法包括如下步骤步骤一，用双氧水与浓硫酸组成的消化液消化样品，得混合溶液；步骤二，取混合溶液，以甲基红作为指示剂，加入NaOH的水溶液；步骤三，加入甲醛溶液振摇，之后加入酚酞指示剂，用浓度为C的NaOH的水溶液滴定至微红色半分钟内不退色，记录消耗的NaOH的水溶液的体积V，利用公式计算蛋白质的含量，所述公式为蛋白质含量=CVX 14. 01X6. 25X100%/m，其中，m为步骤二中所取混合溶液中
含有的样品质量。优选地，所述双氧水的浓度为8. 8mol/L。优选地，所述消化液中双氧水与浓硫酸的体积比为4 1。优选地，所述消化包括如下步骤取样品，加入浓硫酸，加热，滴加消化液，加热使溶液由黑色变为无色，加热，冷却，加蒸馏水定容。优选地，所述加入NaOH的水溶液中和消化液中的酸具体为先使用2. 5mol/L的 NaOH的水溶液中和硫酸，接近终点时改用0. lmol/L的NaOH的水溶液滴定至红色消失变成黄色。优选地，所述甲醛溶液的浓度为6. 5mol/L。优选地，所述NaOH的水溶液的浓度为0. lmol/L。本发明具有如下的有益效果
(1)本发明的方法使用的消化液能够加快样品的消化速度，缩短消化时间，使得分析速度加快；(2)本发明的方法采用甲醛法进行滴定，简化了操作；(3)本发明的方法消除了空气污染，减少了对操作人员的危害性，且节约了试剂和水电；(4)本发明的方法适于进行大批量样品的蛋白质含量测定。
具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。实施例本实施例中使用的消化装置为用IOOml梨形三颈瓶代替凯氏烧瓶，上面分别连接滴液漏斗、真空调节管和弯管，弯管用导管与内盛稀碱溶液的抽滤瓶和真空泵相连，将消化所产生的烟气用碱液吸收。实施例中使用的试剂为浓硫酸购于国药集团化学试剂有限公司；8. 8mol/L过氧化氢购于开封开化集团有限公司；氢氧化钠购于淄博市化学试剂厂；甲醛购于淄博市化学试剂厂；六次甲基四胺购于中国药品生物制品检定所；酚酞指示剂购于上海市试剂三厂；甲基红指示剂购于上海市试剂三厂。
1、消化样品，得混合溶液称取0. 5g样品置于消化装置中，加浓硫酸5ml ；打开真空泵，用螺旋夹调节三颈瓶中的压力，使产生的烟气被碱液完全吸收，三颈瓶置电炉上加热2 5min，然后用滴液漏斗缓慢滴加15ml消化液，所述消化液是将浓度为8. 8mol/L的双氧水与浓硫酸按体积比为 4 1的比例进行混合而得；加完后继续加热:3min，样品由黑色变为无色，再加热aiiin，除去H2A ；冷却后缓缓加入蒸馏水20ml，摇勻，定量转移至IOOml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。2、取混合溶液，加入NaOH的水溶液中和混合溶液中的酸取混合溶液IOml于IOOml的三角瓶中，加入蒸馏水20ml以及甲基红指示剂2滴， 此处先用蒸馏水稀释，可防止在后续加入NaOH溶液的过程中出现碱的局部过浓，避免产生氨从溶液中逸失；先用2. 5mol/L的NaOH溶液中和过剩的硫酸，接近终点时改用0. lmol/L 的NaOH溶液滴定至红色消失变成黄色，先用高浓度后用低浓度的NaOH溶液中和酸可以避免加入过量的碱。3、滴定加入6. 5mol/L的甲醛溶液10ml，强力振摇0. 5min，放置1 2min，然后加入酚酞指示剂2滴，用0. lmol/L的NaOH标准溶液滴定至微红色半分钟不退，即为终点，记录消耗标准溶液的体积；
所述公式为蛋白质含量=CVX 14. 01X6. 25X100%/m，其中，C为NaOH标准溶液的浓度，V为消耗的NaOH的水溶液的体积，m为步骤2中混合溶液中样品的质量。本实施例的实施结果(1)回收率测定取3份样品(大豆)，分别加入一定量的六次甲基四胺，按实施例的方法测定，该基准物的理论含氮量为39. 85%，结果如表1所示。结果显示，平均回收率为98. 80%。表 权利要求
1.一种食品中蛋白质含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤步骤一，用双氧水与浓硫酸组成的消化液消化样品，得混合溶液；步骤二，取混合溶液，以甲基红作为指示剂，加入NaOH的水溶液；步骤三，加入甲醛溶液振摇，之后加入酚酞指示剂，用浓度为C的NaOH的水溶液滴定至微红色半分钟内不退色，记录消耗的NaOH的水溶液的体积V，利用公式计算蛋白质的含量， 所述公式为蛋白质含量=CVX 14. 01X6. 25X100% /m，其中，m为步骤二中所取混合溶液中含有的样品质量。
2.如权利要求1所述的食品中蛋白质含量的测定方法，其特征在于，所述双氧水的浓度为 8. 8mol/L0
3.如权利要求1或2所述的食品中蛋白质含量的测定方法，其特征在于，步骤一中，所述消化液中双氧水与浓硫酸的体积比为4 1。
4.如权利要求1所述的食品中蛋白质含量的测定方法，其特征在于，步骤一中，所述消化包括如下步骤取样品，加入浓硫酸，加热，滴加消化液，加热使溶液由黑色变为无色，加热，冷却，加蒸馏水定容。
5.如权利要求1所述的食品中蛋白质含量的测定方法，其特征在于，步骤二中，所述加入NaOH的水溶液中和消化液中的酸具体为先使用2. 5mol/L的NaOH的水溶液中和硫酸， 接近终点时改用0. lmol/L的NaOH的水溶液滴定至红色消失变成黄色。
6.如权利要求1所述的食品中蛋白质含量的测定方法，其特征在于，步骤三中，所述甲醛溶液的浓度为6. 5mol/L。
7.如权利要求1所述的食品中蛋白质含量的测定方法，其特征在于，步骤三中，所述 NaOH的水溶液的浓度为0. lmol/L。
全文摘要
本发明涉及一种食品检测技术领域的食品中蛋白质含量的测定方法，该方法包括如下步骤用双氧水与浓硫酸组成的消化液消化样品，得混合溶液；取混合溶液，以甲基红作为指示剂，加入NaOH的水溶液；加入甲醛溶液振摇，之后加入酚酞指示剂，用浓度为C的NaOH的水溶液滴定至微红色半分钟内不退色，记录消耗的NaOH的水溶液的体积V，利用公式计算蛋白质的含量。本发明的方法使用的消化液能够加快样品的消化速度，缩短消化时间，使得分析速度加快；同时本发明的方法采用甲醛法进行滴定，简化了操作。
文档编号G01N21/79GK102338749SQ20101023792
公开日2012年2月1日 申请日期2010年7月27日 优先权日2010年7月27日
发明者丁国才, 沙飞翔, 郭景鹏 申请人:上海海帝园艺有限公司