专利名称：一种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法
技术领域：
本发明涉及化合物物质检测领域中的一种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法。
背景技术：
磷霉素(Fosfomycin)系1967年由美国默克公司和西班牙CEPA公司从西班牙土壤中的链丝菌中发现的一种广谱抗生素，其分子量很小，是一个不同于其他任何一种抗生素结构的全新抗生素。目前磷霉素已经在中国、欧洲和日本等国家和地区广泛应用，其应用于临床的品种主要有3个，分别是磷霉素钠、磷霉素钙和磷霉素氨丁三醇，其中，中国应用较广泛的品种为磷霉素钠。磷霉素钠抗菌谱广、不良反应小，易进入感染组织内，是治疗轻、中度感染的一线用药之一，是治疗重度感染、耐药菌感染联合使用的理想药物。安全、低毒、无需试敏的特点给临床应用带来便利，与其他抗生素相比有独特的优点。但是，目前磷霉素钠的法定检测方法中均未收载其有关物质的检测方法，为保证药品的质量及其安全性，亟 需建立检测方法对其进行控制。因此，研制开发一种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法一直是亟待解决的新课题。

发明内容
本发明的目的在于提供一种重现性好、灵敏度高、检测精确、专属性强、操作方法简便、检测设备和仪器应用广泛的采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法。本发明的目的是这样实现的一种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，所述方法包括如下步骤(I)色谱条件色谱柱为氨基-丙基硅烷键合的硅胶柱，检测器为示差折光检测器，流动相为正磷酸盐水溶液；( 2 )对照品溶液的制备取憐霉素纳标准品用流动相配制成憐霉素纳的对照品溶液；(3)参照溶液一的制备(a)用水湿润的磷霉素钠原料，在烘箱中进行加热，得到磷霉素钠残渣，残渣中含杂质A，用适量流动相溶解所述残渣，得到残渣溶液；(b)取磷霉素钠原料溶于适量所述残渣溶液中得到参照溶液一；(4)供试品溶液的制备取磷霉素钠原料用流动相配制成供试品溶液；(5)参照溶液二的制备将供试品溶液用流动相进行稀释，得到参照溶液二 ；(6)测定方法取参照溶液一注入高效液相色谱仪，记录谱图，计算磷霉素峰与杂质A峰的分离度应大于或等于I. 5 ;取对照品溶液，平行进样，注入高效液相色谱仪，记录谱图，计算磷霉素峰面积的相对标准偏差应小于或等于O. 85% ;取供试品溶液、参照溶液二分别注入高效液相色谱仪，记录谱图，计算供试品溶液中杂质的峰面积；在步骤(I)中，所述的氨基-丙基硅烷键合的硅胶柱为Zorbax-NH2柱；所述检测器的温度为30-40°C，优选温度为35°C ;所述正磷酸盐选自磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾中的一种或几种，优选磷酸二氢钾；所述正磷酸盐水溶液的浓度为O. 05-0. 12mol/l，优选O. 08mol/l ;在步骤(2)中，所述对照品溶液中磷霉素钠的浓度为O. 06-0. 24g/ml，优选O. 12g/ml ;在步骤(3)中的步骤 (a)中，所述烘箱加热的温度为50-70°C，优选温度60°C ;所述加热的时间为16-30小时，优选时间为24小时；所述残渣溶液为每IOOml含有将l_2g所述磷霉素钠原料加热所得残渣的残渣溶液，优选每IOOml含有将I. 5g所述磷霉素钠原料加热所得残渣的残渣溶液；在步骤(3)中的步骤(b)中，所述参照溶液一为每IOml含有溶于所述残渣溶液中的磷霉素钠原料O. 6-2. 4g，优选每IOml含有溶于所述残潘溶液中的憐霉素纳原料I. 2g ;在步骤(4)中，所述供试品溶液中憐霉素纳的浓度为O. 06-0. 24g/ml，优选磷霉素钠的浓度为O. 12g/ml ;在步骤(5)中，每200ml所述参照溶液二含有O. 5-1. 5ml所述供试品溶液，优选每200ml所述参照溶液二含有Iml所述供试品溶液；在步骤(6)中，所述参照溶液一、对照品溶液、供试品溶液、参照溶液二的进样体积为3-20 μ 1，优选进样体积为10 μ I ;所述杂质为杂质Α、非特定杂质及总杂质；所述的正磷酸盐水溶液的配制方法为将适量所述正磷酸盐置于水中溶解，过滤，超声；所述的杂质A为(1，2-二羟基丙基)膦酸。本发明的要点在于采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法。其原理是利用磷霉素钠与杂质结构特点的不同，通过高效液相色谱法，采用氨基-丙基硅烷键合的硅胶柱作为色谱柱，正磷酸盐水溶液作为流动相，使得磷霉素钠和杂质得到良好的分离，再通过示差折光检测器进行检测，并进行计算从而得到磷霉素钠原料中有关物质的含量。一种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法与现有技术相比，具有对于磷霉素钠中有关物质检测的重现性好、灵敏度高、专属性强、检测精确、操作简便、检测条件温和、检测设备和仪器应用广泛、流动相正磷酸盐水溶液原料来源广、配制简单等优点，将广泛地应用于化合物物质检测领域中。下面结合实施例对本发明进行详细说明。图I是实施例一中参照溶液一 HPLC图谱的示意图。图2是实施例一中对照品溶液HPLC图谱的示意图。图3是实施例一中供试品溶液HPLC图谱的示意图。图4是实施例一中参照溶液二 HPLC图谱的示意图。图5是本发明中杂质A的结构式图。
具体实施例方式以下实施例将有助于对本发明的了解，但这些实施例仅为了对本发明加以说明，本发明并不限于这些内容。以下实施例中“供试品”和“磷霉素钠标准品”的含义如下供试品为待测定有关物质的磷霉素钠原料。
憐霉素纳标准品为憐霉素纳原料经纯化去除杂质后的憐霉素纳纯品。实施例一(I)色谱条件色谱柱Zorbax-NH2(4. 6 X 250mm，5 μ m)检测器RID (示差折光检测器)检测器温度35°C其中，色谱柱Zorbax-NH2为安捷伦公司的氨基-丙基硅烷键合的硅胶柱。 流动相的配制精密称取10. 89g磷酸二氢钾，置于IOOOml纯化水中溶解，过滤，超声，得到O. 08mol/l的磷酸二氢钾溶液。( 2 )对照品溶液的制备用流动相溶解O. 6g磷霉素钠标准品，并用流动相稀释至5. Oml,得到每Iml含O. 12g憐霉素纳标准品的对照品溶液。(3)参照溶液一的制备(a)用60 μ I水润湿O. 3g供试品，在60°C烘箱中加热24小时。用流动相溶解残渣，并用流动相稀释至20. Oml得到残渣溶液，得到每IOOml含有将I. 5g磷霉素钠加热所得残渣的残渣溶液，此溶液中含有杂质A ; (b)溶解O. 6g供试品于残渣溶液中，并用残渣溶液稀释至5. 0ml，得到每IOml含有I. 2g供试品的参照溶液一，此溶液中含有杂质A。(4)供试品溶液的制备用流动相溶解O. 6g供试品，并用流动相稀释至5. Oml,得到每Iml含O. 12g供试品的供试品溶液。(5)参照溶液二的制备精密吸取供试品溶液I. Oml加入至IOOml容量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀；精密吸取5. Oml上述液，用流动相稀释至10. 0ml，得到每200ml含有Iml供试品溶液的参照溶液二。(6)测定方法取参照溶液一，待仪器稳定后进样，进样量10. O μ 1，记录谱图，计算磷霉素峰I与杂质A峰2的分离度(R)应大于等于1.5。本实施例，参照溶液一中磷霉素峰I与杂质A峰2的分离度(R)为2. 9，参照溶液一的HPLC图谱见图I。取对照品溶液，待仪器稳定后进样，平行进样6针，进样量10 μ 1，记录谱图，计算磷霉素峰面积的相对标准差(RSD)应小于等于O. 85%。本实施例，对照品溶液平行进样6针的峰面积、峰面积的平均值及RSD情况见下表I 表I对照品溶液平行进样6针的峰面积情况表
权利要求
1.一种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤 (1)色谱条件 色谱柱为氨基-丙基硅烷键合的硅胶柱，检测器为示差折光检测器，流动相为正磷酸盐水溶液； (2)对照品溶液的制备 取磷霉素钠标准品用流动相配制成磷霉素钠的对照品溶液； (3)參照溶液一的制备 (a)用水湿润的磷霉素钠原料，在烘箱中进行加热，得到磷霉素钠残渣，残渣中含杂质 A，用适量流动相溶解所述残渣，得到残渣溶液；(b)取磷霉素钠原料溶于适量所述残渣溶液中得到參照溶液一； (4)供试品溶液的制备 取磷霉素钠原料用流动相配制成供试品溶液； (5)參照溶液ニ的制备 将供试品溶液用流动相进行稀释，得到參照溶液ニ ； (6)测定方法 取參照溶液一注入高效液相色谱仪，记录谱图，计算磷霉素峰与杂质A峰的分离度应大于或等于I. 5 ;取对照品溶液，平行进样，注入高效液相色谱仪，记录谱图，计算磷霉素峰面积的相对标准偏差应小于或等于O. 85% ;取供试品溶液、參照溶液二分别注入高效液相色谱仪，记录谱图，计算供试品溶液中杂质的峰面积。
2.根据权利要求I所述的ー种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于在步骤(I)中，所述的氨基-丙基硅烷键合的硅胶柱为ZorbaX-NH2柱；所述检测器的温度为30-40°C，优选温度为35°C ;所述正磷酸盐选自磷酸氢ニ钠、磷酸氢ニ钾、磷酸ニ氢钠、磷酸ニ氢钾中的ー种或几种，优选磷酸ニ氢钾；所述正磷酸盐水溶液的浓度为O.05-0. 12mol/l，优选 O. 08mol/l。
3.根据权利要求I所述的ー种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于在步骤(2)中，所述对照品溶液中磷霉素钠的浓度为O. 06-0. 24g/ml，优选O.12g/mlο
4.根据权利要求I所述的ー种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于在步骤(3)中的步骤(a)中，所述烘箱加热的温度为50-70°C，优选温度60°C;所述加热的时间为16-30小时，优选时间为24小时；所述残渣溶液为每IOOml含有将l_2g所述磷霉素钠原料加热所得残渣的残渣溶液，优选每IOOml含有将I. 5g所述磷霉素钠原料加热所得残渣的残渣溶液；在步骤(3)中的步骤(b)中，所述參照溶液ー为每IOml含有溶于所述残渣溶液中的磷霉素钠原料O. 6-2. 4g，优选每IOml含有溶于所述残渣溶液中的磷霉素钠原料I. 2g。
5.根据权利要求I所述的ー种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于在步骤(4)中，所述供试品溶液中憐霉素纳的浓度为O. 06-0. 24g/ml,优选憐霉素钠的浓度为O. 12g/mL·
6.根据权利要求I所述的ー种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于在步骤(5)中，每200ml所述參照溶液ニ含有O. 5-1. 5ml所述供试品溶液，优选姆200ml所述參照溶液ニ含有Iml所述供试品溶液。
7.根据权利要求I所述的ー种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于在步骤(6)中，所述參照溶液一、对照品溶液、供试品溶液、參照溶液ニ的进样体积为3-20 μ 1，优选进样体积为10 μ I ;所述杂质为杂质Α、非特定杂质及总杂质。
8.根据权利要求I所述的ー种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于所述的正磷酸盐水溶液的配制方法为将适量所述正磷酸盐置于水中溶解，过滤，超声。
9.根据权利要求I所述的ー种采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于所述的杂质A为(1，2- ニ羟基丙基)膦酸。
全文摘要
一种应用于化合物物质检测领域中的采用高效液相色谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，取参照溶液一注入高效液相色谱仪，记录谱图，计算磷霉素峰与杂质A峰的分离度应大于或等于1.5；取对照品溶液，平行进样，注入高效液相色谱仪，记录谱图，计算磷霉素峰面积的相对标准偏差应小于或等于0.85%；取供试品溶液、参照溶液二分别注入高效液相色谱仪，记录谱图，计算供试品溶液中杂质的峰面积。该发明对于磷霉素钠中有关物质检测的重现性好、灵敏度高、专属性强、检测精确、操作简便、检测条件温和、检测设备和仪器应用广泛、流动相正磷酸盐水溶液原料来源广、配制简单。
文档编号G01N30/02GK102841155SQ20121036134
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月25日 优先权日2012年9月25日
发明者冯文宇, 崔莹, 周岩, 吴涛, 谢丹, 尤楠, 唐奎山, 尹宏, 娄玉涛, 周秀峰, 孟涛, 刘志清 申请人:东北制药集团股份有限公司