专利名称：一种反映胃疾病变化全过程的组织微阵列芯片的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，更具体地，涉及在片基上固定有组织芯片。
背景技术：
随着组织学、病理学的发展，人们对人体或其他动植物的认识，从解剖学上的器官水平向组织、细胞水平发展。但由于完整的器官很难用显微镜观察，因此需要把器官切成很薄的切片进行染色观察，为了解决这个问题，出现了组织学技术。该方法的原理是通过把器官切成小块组织，用福尔马林固定后，利用酒精脱去该组织中的水分，再浸入二甲苯或苯溶液脱去酒精，最后组织块浸入熔化石蜡溶液中脱去二甲苯，放入模具内用石蜡溶液进行包埋，冷却后形成石蜡块。该石蜡块利用切片机进行切片，把蜡片裱于玻璃片上再进行烤片、脱蜡，染色、封片后就可以用显微镜进行观察研究。目前，组织学技术不仅是单纯染色显微镜观察，还出现了各种特殊染色、免疫组织化学技术、原位杂交技术、原位PCR技术。
近年来随着基因组学、蛋白组学研究发展，人们研究的生理和疾病已逐步从分子水平向细胞水平及组织水平发展，因此，如何利用组织开展研究，是目前研究中所要解决问题之一。采用传统组织技术的研究方法，由于组织标本需要量大，实验工作量大，难以适应研究的学要。近年来，出现了组织微阵列芯片技术，解决了上述问题。该技术将数十个、数百个乃至上千个小的组织片整齐地排列在某一载体上(通常是载玻片)而制作成微缩组织切片，其基本操作程序(如

图1所示)包括设计并拟定组织芯片的分类系列、核对组织或有关疾病的病理诊断、组织定位、阵列蜡块的制作、再从源蜡块上钻取组织并转移到空白石蜡块的相应位置、组织芯片切片。组织芯片的特点有体积小、信息含量大、高通量；减少或避免了对原始组织蜡块的破坏；组织样本的定位准确，减少无效组织；批量制作及可能的结果分析自动化；不同来源的病例的处理、染色和分析条件相同。
胃部疾病是一组常见、多发行的疾病，包括早期胃癌可分为以下各型(1990年WHO分类)①腺癌包括乳头状腺癌、管状腺癌、与粘液腺癌(恶性度高于前两者)，再根据分化程度又分为高分化、中分化与低分化3种；②未分化癌(恶性度最高)；③粘液细胞癌(即印戒细胞癌)；④特殊类型癌包括腺鳞癌、鳞癌、类癌、绒癌、癌肉瘤和神经内分泌癌等。还有一些罕见的癌肝癌样胃癌、壁细胞癌、髓样癌等。各种疾病存在一个动态发展的变化原位癌(原发癌限于粘膜层未累及粘膜固有层)；肿瘤侵及粘膜下层；肿瘤侵及肌层；肿瘤侵及浆膜层；侵及邻近器官；胃镜活检证实为癌，但切除标本组织学检查未发现癌；肿瘤浸润深度无法判定；无区域淋巴结转移；淋巴结转移局限于肿瘤边缘3cm以内的胃周淋巴结；淋巴结转移超出肿瘤边缘3cm以外，包括胃左动脉、肝总动脉、脾及腹腔周围淋巴结；淋巴结转移情况无法确定；无远处转移等。通过何种研究工具，从分子、细胞、组织水平上观察这些疾病的发生、发展的整个过程从而找到有意义的基因和表达的蛋白质，是目前急需解决的问题。
因此，本领域迫切需要建立起一种胃组织研究工具以解决，上述问题。

发明内容
本发明的目的是提供一种高效、简便和低成本的胃组织微阵列芯片，从而可以在分子、细胞、组织水平上研究疾病的发生、发展的整个过程。该芯片亦可筛选出特异性、有意义的基因和及其表达的蛋白质。
该胃组织微阵列芯片，包括片基、片基上连接有特异性组织点。片基可以是玻璃、生物膜、硅芯片、聚二氟乙烯膜或硝酸纤维膜。片基上组织点所需不同大小直径可为0.7mm，1.0mm，1.5mm，2.0mm，2.5mm，3.0mm，3.5mm，4.0mm，4.5mm，5.0mm，5.5mm，6.0mm等。，密度为500个点/平方厘米～1个点/平方厘米，每张片基上可有1000点～10点不等。可以矩阵列方式、园形方式或其他形状排列。
所述组织点至少选自以下正常或疾病病变的胃组织胃(包括胃底、胃体、胃小弯、胃大弯、幽门、喷门)正常组织，慢性浅表性胃炎，单纯型萎缩性胃炎，胃溃疡，肠化型萎缩性胃炎完全性结肠化生，肠化型萎缩性胃炎不完全性结肠化生，肠化型萎缩性胃炎完全性小肠化生，肠化型萎缩性胃炎不完全性小肠化生，胃不典型增生，胃管状腺瘤，胃绒毛状腺瘤，胃管状绒毛状腺瘤，ZoHinger-Ehison综合征，胃脉管瘤，胃平滑肌瘤，胃平滑肌肉瘤，胃神经鞘瘤，胃恶性神经鞘瘤，胃乳头状腺癌，胃管状腺癌，胃粘液腺癌，胃印戒细胞癌，胃腺鳞癌，胃鳞癌，胃小细胞癌，胃未分化癌，胃恶性淋巴瘤等。组织点还可选取其它器官正常或疾病病变组织作为对照食道、十二指肠、空肠、回肠、大肠、肝、胆囊、咽喉等正常组织，食管癌、大肠癌、肠腺癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、喉癌等病变组织。
下面结合实施例具体阐述本发明内容1.胃癌不同发病机理及发展全过程组织芯片胃癌不同发病机理及发展全过程组织芯片阵列中每个点的组织类型信息如表格一所示，排列后形成的组织芯片效果图如图2所示1为经过防脱片处理的在玻片，2为碳芯标记点(标记阵列读取顺序)，3为排列的组织样本。点的直径为1.0mm，点之间的间距为0.4mm。每行8个点，共十二行，下面结合表格一详叙阵列中排列点的组织类型在芯片左上角有一个碳芯标记点(Maker)用于给阵列的排列方向进行定位。A1，A2，A3，A4，A5，A6，A7，A8，B1分别为食道，胃(贲门)，胃(大弯)，胃(小弯)，胃(窦)，十二指肠，空肠，回肠，大肠正常组织；B2，B3，B4分别为慢性浅表性胃炎发展过程中轻度，中度，重读三个阶段的病变组织；B5，B6，B7分别为单纯型萎缩性胃炎发展过程中轻度，中度，重读三个阶段的病变组织；B8为胃溃疡病变组织；C1，C2，C3，C4分别为肠化型萎缩性胃炎不同病因完全性结肠化生，不完全性结肠化生，完全性小肠化生，不完全性小肠化生四种病变组织；C5，C6，C7分别为胃不典型增生三个不同发展阶段轻度，中度，重度的病变组织；C8，D1，D2，D3，D4，D5，D6，D7，D8分别为胃管状腺瘤，胃绒毛状腺瘤，胃管状绒毛状腺瘤，ZoHinger-Ehison综合征，胃脉管瘤，胃平滑肌瘤，胃平滑肌肉瘤，胃神经鞘瘤，胃恶性神经鞘瘤癌变组织；E1F1，E2F2，E3F3，E4F4分别为四例患有胃乳头状腺癌患者的肿瘤组织和肿瘤旁组织；E5F5，E6F6，E7F7，E8F8分别为四例患有胃管状腺癌患者的肿瘤组织和肿瘤旁组织；G1H1，G2H2，G3H3，G4H4分别为四例患有胃粘液腺癌患者的肿瘤组织和肿瘤旁组织；G5H5，G6H6，G7H7，G8H8分别为四例患有胃印戒细胞癌患者的肿瘤组织和肿瘤旁组织；I1J1，I2J2分别为两例患有胃腺鳞癌患者的肿瘤组织和肿瘤旁组织；I3J3，I4J4分别为两例患有胃鳞癌患者的肿瘤组织和肿瘤旁组织；I5J5，I6J6分别为两例患有胃小细胞癌患者的肿瘤组织和肿瘤旁组织；I7J7，I8J8分别为两例患有胃未分化癌患者的肿瘤组织和肿瘤旁组织；K1L1，K2L2分别为两例患有胃恶性淋巴瘤患者的肿瘤组织和肿瘤旁组织；K3L3，K4L4，K5L5，K6L6分别为四例食道鳞癌，肠腺癌，大肠癌，直肠癌患者的肿瘤组织和肿瘤旁组织；K7L7为两个碳芯标记点(Marker)用于标记阵列排列的结束位置。这一张含有反映胃癌不同发病机理及发展全过程组织和其他器官正常及癌变对照组织的芯片用于免疫组化，原位杂交，免疫荧光等不同试验研究。

表格12.含有两个亚阵列研究胃癌不同发病机理及发展全过程的组织芯片该组织芯片有两个亚阵列构成，每个亚阵列的排列点数和组织类型与实例1完全相同，点直径与距离不同，点的直径为0.6mm，点之间的距离为0.4，两个亚阵列之间间距为1.0mm，组织芯片的实际效果图如图3所示1为经过防脱片处理的在玻片，2为碳芯标记点(标记阵列读取顺序)，3为排列的组织样本，4为亚阵列一，5为亚阵列二。
应理解，本说明书之题目及本说明书所述及之实施例仅用于说明本发明而不用于对本发明的范围进行限制。
权利要求
1.一种组织微阵列芯片，包括片基和组织点，组织点以点阵方式排列并附于片基之上，其特征在于所述组织点由正常胃组织、胃疾病病变部组织和对照组织构成。
2.根据权利要求1所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于所述片基可以是玻璃、胶片、生物膜、硅芯片、聚二氟乙烯膜或硝酸纤维膜。
3.根据权利要求2所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于所述片基可以是经过防脱片处理。
4.根据权利要求1所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于，所述组织点直径为0.7毫米，1.0毫米，1.5毫米，2.0毫米，2.5毫米，或3.0毫米。
5.根据权利要求1所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于所述点阵方式可以为矩阵列方式或园形方式排列，密度为500～1个点/平方厘米，数量为1000点～10点。
6.根据权利要求1所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于所述正常胃组织至少包括胃喷门、胃小弯、胃大弯、胃窦部组织。
7.根据权利要求1所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于所述胃疾病至少包括慢性浅表性胃炎、单纯性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡、胃不典型增生、胃管状腺瘤、胃绒毛状腺瘤、胃管状绒毛状腺瘤、ZoHinger-Ehison综合征、胃脉管瘤、胃平滑肌瘤、胃平滑肌肉瘤、胃神经鞘瘤、胃恶性神经鞘瘤、胃乳头状腺癌、胃管状腺癌、胃粘液腺癌，胃印戒细胞癌，胃腺鳞癌，胃鳞癌，胃小细胞癌，胃未分化癌或胃恶性淋巴瘤。
8.根据权利要求1所述的一种组织微阵列芯片，其特征在于所述对照组织可以为食道、十二指肠、空肠、回肠、大肠、肝、胆囊、咽喉正常组织，食管癌、大肠癌、肠腺癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、喉癌病变组织。
全文摘要
本发明公开了一种组织微阵列芯片，该芯片上组织点由正常胃组织，胃疾病不同发展阶段、不同程度与不同类型的各种病变组织，以及部分其他器官正常和病变对照组织而构成，从而可以在分子、细胞、组织水平上研究胃疾病的发生、发展的整个过程。该芯片亦可筛选出特异性、有意义的基因和及其表达的蛋白质。
文档编号G01N21/17GK1704752SQ200410024749
公开日2005年12月7日 申请日期2004年5月28日 优先权日2004年5月28日
发明者郜恒骏, 张宝峰 申请人:上海芯超生物科技有限公司